豬偽狂犬病防控技術(shù)研究進(jìn)展

余春明，鄧柏林 ，鄭雪瑩，谷傳慧，趙景義

（北京市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京 大興 102629）

豬 偽 狂 犬 病（Pseudorabies，PR）是豬的一種急性傳染病，其病原為偽狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV），該病呈地區(qū)性的暴發(fā)性流行，其臨診癥狀因豬只周齡而異，成年豬只一般呈隱性感染，妊娠母豬則出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎，公豬不育，育肥豬呼吸困難、生長(zhǎng)停滯等綜合癥候群，而2周齡內(nèi)的仔豬發(fā)病死亡率可達(dá) 100%，而斷奶仔豬發(fā)病率可達(dá)40%，死亡率達(dá)20%左右，是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之一。

1 PR病毒學(xué)特征和流行病學(xué)特點(diǎn)

PR病毒粒子呈二十面體立體對(duì)稱橢圓形或圓形，其基因組為線性dsDNA分子，偽狂犬病病毒迄今只發(fā)現(xiàn)一個(gè)血清型，根據(jù)基因分析可分為 I、II、III、IV 四個(gè)基因型，我國(guó)僅發(fā)現(xiàn) IV型病毒，且不同毒株在毒力和生物學(xué)特征等方面存在差異。PRV通過(guò)鼻腔黏膜進(jìn)入宿主，沿神經(jīng)干傳播，并且在扁桃體等部位增殖形成原發(fā)感染灶，然后進(jìn)入嗅神經(jīng)和舌咽神經(jīng)進(jìn)行病毒的復(fù)制后以核衣殼的形式存在，最終感染大腦并在宿主動(dòng)物形成終生潛伏感染。

豬偽狂犬病呈世界分布，多發(fā)生在寒冷的季節(jié)，但其他季節(jié)也有發(fā)生。1813年偽狂犬病最早發(fā)現(xiàn)于美國(guó)，1902年匈牙利學(xué)者首次報(bào)道該病病原是一種不同于狂犬病病毒的新病毒。該病毒1931年由美國(guó)科學(xué)家從牛體內(nèi)分離證實(shí)該病病原屬于皰疹病毒。該牛目前已知為該病的唯一天然宿主，病豬、帶毒豬以及帶毒鼠類為本病重要傳染源，該病傳播方式包括口鼻接觸，帶毒豬排毒和胎盤(pán)垂直傳播等方式，此外被偽狂犬病毒污染的人員和器具也能傳播該病。現(xiàn)有疫苗保護(hù)效果不佳，PR的暴發(fā)主要發(fā)生在許多傳統(tǒng)疫苗免疫接種的豬場(chǎng)，給全世界養(yǎng)豬行業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

我國(guó)于20世紀(jì)50年代首次報(bào)道豬偽狂犬病的暴發(fā)，20世紀(jì)80年代以來(lái)我國(guó)從匈牙利引進(jìn)的Barth-K61疫苗，有效地控制了我國(guó)豬偽狂犬病暴發(fā)流行。然而，隨著國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖環(huán)境的變化，近幾年我國(guó)PR的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，并出現(xiàn)流行范圍廣、發(fā)病率和病死率顯著升高的流行特點(diǎn)。

2 診斷技術(shù)研究發(fā)展

該病除通過(guò)觀察臨床癥狀與病理變化進(jìn)行診斷外，可通過(guò)病原學(xué)、血清學(xué)及分子生物學(xué)對(duì)該病進(jìn)行準(zhǔn)確的診斷。病毒分離接種是經(jīng)典的方法，也是最權(quán)威的病原診斷方法，但是對(duì)于實(shí)驗(yàn)室條件、人員要求較高、操作復(fù)雜、成本較高，多用于科研診斷和特殊情況下診斷，現(xiàn)階段生產(chǎn)中應(yīng)用較少。血清學(xué)診斷方法是用已知抗原和血清樣本進(jìn)行反應(yīng)，通過(guò)檢測(cè)血清中是否存在該病毒的特異性抗體，來(lái)診斷是否存在病毒感染的方法。中和試驗(yàn)需要時(shí)間長(zhǎng)，技術(shù)條件要求高，現(xiàn)階段在實(shí)際生產(chǎn)中尚未普及，檢測(cè)PRV抗體水平的ELISA法具有操作簡(jiǎn)單、能夠大批量檢測(cè)樣品、檢測(cè)快速等特點(diǎn)，適合廣泛應(yīng)用于臨床診斷。目前主要的診斷方法是對(duì)偽狂犬病毒抗體或PRV-gE抗體的ELISA血清診斷方法，在實(shí)際中通過(guò)檢測(cè)gE和gB 抗體，分別評(píng)估野毒感染壓力和疫苗免疫效果。使用gE基因缺失疫苗，商品化gE抗體試劑盒可準(zhǔn)確用于陰性豬場(chǎng)和抗體背景清晰豬場(chǎng)的準(zhǔn)確、快速診斷。將疫苗抗體與野毒抗體區(qū)分開(kāi)來(lái)。

分子診斷方法是近年來(lái)發(fā)展最快及應(yīng)用最廣泛的診斷方法。其現(xiàn)階段較為常用的診斷方法，常見(jiàn)的包括 PCR 和熒光定量 PCR技術(shù)。PCR 技術(shù)是通過(guò)體外酶擴(kuò)增 DNA來(lái)進(jìn)行檢測(cè)，而熒光定量技術(shù)則是通過(guò) Rotor-gene檢測(cè)系統(tǒng)建立起定量檢測(cè)。接種豬偽狂犬疫苗為基因缺失苗的豬場(chǎng)，利用分子生物學(xué)檢測(cè)方法，可以鑒別出疫苗株和野毒株感染。

3 疫苗免疫的研究現(xiàn)狀

商品化豬偽狂犬病疫苗主要有豬偽狂犬病滅活疫苗、豬偽狂犬病活疫苗、豬偽狂犬病基因缺失活疫苗等，而豬偽狂犬病核酸疫苗及豬偽狂犬病基因工程活載體疫苗現(xiàn)仍處于實(shí)驗(yàn)室研制階段。當(dāng)前主要分為弱毒苗、基因工程缺失疫苗、亞單位疫苗、重組偽狂犬病毒載體疫苗。

2011 年出現(xiàn)偽狂犬病病毒變異株大流行后，國(guó)內(nèi)外學(xué)者針對(duì)偽狂犬病病毒變異株開(kāi)展了偽狂犬病活疫苗的研制工作。童武等利用同源重組技術(shù)構(gòu)建了gE和gI雙基因缺失毒株（JS-2012-gE/gI 株），并用該缺失株進(jìn)行了豬偽狂犬病滅活疫苗的研制，該疫苗免疫仔豬和妊娠母豬，均能產(chǎn)生高水平的中和抗體，且免疫仔豬及免疫母豬所生仔豬均能有效地抵抗偽狂犬病毒變異毒株（JS-2012 株）的攻擊。王琴、郭萬(wàn)柱等人利用基因工程手段構(gòu)建了Fa株TK基因缺失和TK/gE/gI基因缺失的基因缺失株。方六榮等利用基因工程手段成功構(gòu)建了TK、g G、TK/gG、TK/gE/gp63等一系列單/雙/三基因缺失的鄂A株?，F(xiàn)今應(yīng)用較多的 Bartha-K61株疫苗為gE基因缺失苗，基于gE基因研發(fā)的檢測(cè)試劑可鑒別野毒感染還是免疫帶毒，已經(jīng)應(yīng)用于豬場(chǎng)凈化過(guò)程的鑒定。有學(xué)者以偽狂犬病基因缺失弱毒活疫苗為載體，利用同源重組的方法，將豬瘟病毒的E2 基因插入到載體病毒中，成功構(gòu)建出含豬瘟病毒 E2 蛋白基因序列的重組偽狂犬病病毒基因缺失疫苗株rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，具有很好的免疫保護(hù)效果。

4 主要的防控技術(shù)措施

4.1 遵守科學(xué)的引種制度

由于該病可潛伏感染存在隱性帶毒豬，因此，豬場(chǎng)應(yīng)實(shí)行自繁自養(yǎng)，培育屬于自己的健康種群，若無(wú)特殊情況不要從外面引種（精液），嚴(yán)禁從疫區(qū)引種。引進(jìn)種豬、后備豬時(shí)，需隔離飼養(yǎng)45 d，期間采血送檢，并進(jìn)行驅(qū)蟲(chóng)，免疫豬瘟、豬偽狂犬病、口蹄疫、豬藍(lán)耳病等疫苗工作，最后經(jīng)過(guò)血清學(xué)檢測(cè)確認(rèn)為健康者方可混群飼養(yǎng)。

4.2 加強(qiáng)抗體檢測(cè)，優(yōu)化疫苗免疫程序

分別在母豬開(kāi)產(chǎn)前15~20 d采血和采集初乳檢測(cè) PRVgE抗體，監(jiān)測(cè)公豬的抗體水平變化，判斷能否阻斷病毒感染公豬，分別于30日齡、60日齡、90日齡、120日齡采集商品豬血清來(lái)檢測(cè)偽狂犬gE抗體，以此推斷偽狂犬病毒的感染情況。對(duì)種豬場(chǎng)豬只檢測(cè)偽狂犬病病毒 g E 抗體（野毒感染抗體），并根據(jù)gE抗體的檢測(cè)結(jié)果來(lái)調(diào)整、完成免疫方案。

4.3 加強(qiáng)疫苗免疫

豬偽狂犬病的疫苗主要有滅活疫苗、弱毒疫苗和基因缺失疫苗。滅活疫苗安全性良好，但免疫效率低，免疫劑量大，易造成豬只發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)；弱毒疫苗雖然效果較好，但其毒力可能會(huì)返強(qiáng)，導(dǎo)致疾病流行和潛伏感染；基因缺失弱毒疫苗緊急預(yù)防接種育肥豬，其效果顯著，但應(yīng)注意同一豬場(chǎng)只能使用一種缺失苗，防止毒株間重組形成超強(qiáng)毒株。

4.4 防治與凈化措施

由于豬偽狂犬病存在的潛伏感染，早在20世紀(jì)80年代一些養(yǎng)豬發(fā)達(dá)國(guó)家就已經(jīng)開(kāi)始啟動(dòng)凈化工程。我國(guó)開(kāi)展凈化工作也取得很大的成果，基于gE及其他毒力相關(guān)基因的缺失而構(gòu)建的PRV基因缺失疫苗，在偽狂犬病病毒根除過(guò)程中非常重要，采用進(jìn)口豬偽狂犬病gE基因缺失苗，對(duì)豬群進(jìn)行免疫為豬偽狂犬病凈化提供了可實(shí)施的客觀條件，通過(guò)對(duì)陽(yáng)性豬只淘汰，達(dá)到逐漸凈化的目的。

5 討論與小結(jié)

豬偽狂犬病防控是國(guó)家豬病疫情防控的重點(diǎn)，關(guān)系到我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展，針對(duì)豬偽狂犬病的控制需要注意其潛伏感染的重要特點(diǎn)，當(dāng)其他疾病發(fā)生后，豬只抵抗力下降時(shí)，病毒在潛伏處增殖，引起發(fā)病。一旦發(fā)現(xiàn)豬場(chǎng)中存在偽狂犬病病毒傳播，接種疫苗應(yīng)當(dāng)慎重，否則可能因免疫壓力而促進(jìn)毒株變異進(jìn)化，增大防控壓力。鑒于國(guó)外的成熟經(jīng)驗(yàn)，落實(shí)凈化措施，首先，防控的關(guān)鍵點(diǎn)應(yīng)放在做好感染帶毒種豬的凈化工作上，通過(guò)對(duì)PRVgE抗體陽(yáng)性種豬群中野毒帶毒排毒情況的重點(diǎn)監(jiān)測(cè)，及時(shí)淘汰排毒的 PRVgE 抗體陽(yáng)性豬只。其次，要輔以生物安全等綜合防控措施，監(jiān)測(cè)初生仔豬垂直感染情況，利用免疫程序優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果，安排確定豬場(chǎng)采取逐步凈化的策略。