骨骼組織法醫(yī)毒物相關分析研究

徐丹丹

無錫市中西醫(yī)結合醫(yī)院司法鑒定所，江蘇 無錫 214000

血液、尿液、胃液等都是法醫(yī)毒理學檢測中常用的生物樣本，但例如白骨化、肢解和高度尸體腐爛等情況，就無法使用這些常見的生物樣本進行毒理學分析。而由于沒有其他可用材料，骨骼組織就成了進行毒物分析最重要的生物樣本。大多數(shù)骨骼組織是靜脈血管組織，其中骨髓血管化，富含多種脂質，允許一些可溶性藥物分布在其中，因此骨組織作為基質分析，可以加大分析范圍，與骨組織等生物體相比，樣品具有抗外界因素影響以及抗真菌和細菌破壞、無腐敗、不易污染等優(yōu)點。

Owsley（1985）的報告中，介紹一名犯罪嫌疑人，將一個白人女性殺害，并且拋尸到密西西比河，在一切都完成之后，嫌疑人清洗了自己的車輛。但是，警察還是在車輛中提出了骨骼組織的碎片[1]。在進行審問時嫌疑人卻矢口否認，說是動物的骨片。法醫(yī)在對其骨骼樣本進行檢驗后發(fā)現(xiàn)這些骨骼碎片屬于死者的骨組織。由此可見，對骨骼組織進行毒物分析是破獲刑偵案件的重要手段之一。但對于一些難度較高的骨組織，就需要結合實際進行毒物檢驗。法醫(yī)毒物檢測中血、尿、胃等樣本都屬于最基本的檢測對象，如果遇到一些白骨化或是其他的情況，傳統(tǒng)的分析方式就無法適用。多數(shù)骨骼組織都屬于脈管組織，含多種脂類，存在一些可溶性的藥物[2]。骨骼組織與其他生物樣品進行比較，雖然說存在一定的弊端，但卻具備了不會腐敗、難以銷毀的優(yōu)勢性。

一、骨骼組織的特點

從本質上看，人體骨骼在形態(tài)中可以分為：長骨、短骨、扁骨和不規(guī)則骨。骨骼作為一種堅硬的組織，在外源性藥物通過Haver、Volkmann之后進入骨骼。Haver、Volkmann的通道中，作為血管化的主要場所，只有在離子交換的過程中才可以實現(xiàn)兩者之間的平衡。這是藥物就可以取代晶體骨結構當中的礦化反應。若是采用了更為先進的檢驗技術，生理pH值在7．4的情況下，還可以讓電離藥物在骨組織的水化層中的濃度升高，從而將骨組織中的信息檢驗出來[3]。當pKa低于以上的pH值的時候，那么就很難檢驗出來。O6-單乙酰嗎啡等在正常的情況下，在骨骼中是不會存在的，需要在代謝物基礎上保持合理的統(tǒng)籌規(guī)劃，將蛋白質的化合物在血液中，轉移到骨骼當中，但是基礎上可以轉移的數(shù)量不多，一旦出現(xiàn)就基本上很難達到滿意的檢驗結果。

二、骨骼組織在法醫(yī)毒物分析中的應用

（一）研究的藥毒物種類

一般的情況下，需要在尸檢的過程中提取骨骼組織，分析死亡的時間，在室外發(fā)現(xiàn)骨骼殘骸的過程中，會檢測到很多的藥物，可能是抗驚厥藥、抗抑郁藥，也可能是雌激素調節(jié)劑、阿片類藥物等，這些藥物本身就是一些化學武器神經毒劑或者是乙基葡萄糖醛酸。

（二）研究的用途

在實踐的歷程中，骨骼組織中藥物含量不足，并且這些都和血液中藥物的濃度存在著較大的關系，但是這些并非真正的證據(jù)。因此就需要在骨骼上進行藥物檢驗，并將所得到的個人生活信息，與嫌疑人的陳述相互對比。在沒有確定一個人尸源的時候，若可以在骨骼組織當中檢測到甲基苯丙胺，那么很可能死亡者在生前有吸毒的歷史，這個時候，相關的工作人員就可以結合實際情況，進一步縮小排查的范圍，從吸毒的角度開始調查。曾經在一個案例中看到，有兩個男人失蹤了四年左右，最后在森林中發(fā)現(xiàn)了他們的尸骨，并且已經被簡單的埋葬[4]。在實施骨骼組織檢測的時候，檢測結果中檢測到了三唑侖，在這樣的情況下，調查人員就可以證實了嫌疑人是先使用三唑侖對受害者進行催眠，在催眠完成以后，直接將其活生生地埋葬。另外一起尸體火化案件中，骨灰本身就是唯一可以檢驗的東西了，在檢驗的時候，一般金屬毒物會沉淀在骨骼組織當中，就算是火化了，基本上也不會損失太多。如果可以在火化之后的骨灰中檢測到這類東西，那么基本上就可以認為這個人在生前就已經中毒，為案件的偵破給予了充分的支持[5]。

三、骨骼樣本的分析方法

（一）骨骼樣本的選擇

在實踐的歷程中，骨髓中藥物的含量較高，那么就需要結合實際情況分析骨髓數(shù)量。在選擇骨髓數(shù)量的時候，需要先分析肱骨或股骨，還有一個鎖骨的位置也是可以依據(jù)實際情況作為選擇目標。簡單來說在鎖骨附近的骨骼中的脂肪含量較多，在解剖的時候，可以在不破壞其他組織的情況下，獲得想要檢測的東西，并且保證尸體的完整性，為之后的案件進展奠定良好的基礎[6]。

（二）骨骼樣本的處理

一般的情況下，在去除骨頭當中的覆蓋物的時候，需要及時進行清洗、干燥、切片、粉碎等步驟進行處理。堿性蛋白酶在分解的時候，需要結合樣本的處理方式，針對這些線索選擇最為適宜的處理方式。此時，可以使用草桿菌蛋白酶A pH7～11去除骨表面的軟組織，最大限度縮小清洗的時間。Rubin之前認為，在萃取之前，就需要對骨組織暴露的位置進行清洗，清洗完成以后，就可以取代其中的藥物或代謝物，最終達到降低骨組織藥物濃度的主要目的。清洗干凈的骨頭，在這個時候需要先放到空氣中，之后研磨成為粉末的樣子，主要是為了增加回收率，并且對其中的甲醇實施被動提取。Desrosiers等使用的是MAE，對其中的氯胺酮、地西泮等實施合理的規(guī)劃，并且時間需要保持在五分鐘左右。一般的情況下，需要合理的統(tǒng)籌規(guī)劃，并且擴大微波能量，為以后的發(fā)展奠定良好的基礎。

（三）骨骼樣本的檢測方法

在檢驗的歷程中，大家可以直觀看到這些有效方式的建設，需要結合骨組織的具體情況，對其中的藥物實施合理的檢測，并且有效分析這些骨骼組織中的藥物成分，也就是說，相關的人員需要結合液相色譜及聯(lián)用技術等，合理分析，定量檢測。ELISA就是根據(jù)當前的發(fā)展需要，合理實施分析的方式，最大限度提高靈敏度，并且加入適度的痕量分析相關的內容，并且建立多種樣品，在初步的分析中，探究陽性的初篩，使用此種方式，一般的情況下，都會存在很大的局限性，并且這些樣品還會受到其他部分的干擾。氣相色譜在使用聯(lián)合技術的時候，需要在實驗室中合理使用，而且使用的次數(shù)較多。Raikos等主要是針對相色譜—火焰離子化的方式，可以從死者的骨髓或者是骨骼中，檢驗出來嗎啡含量，此種方式可以對海洛因成癮中毒死的人員實施檢測，檢驗出來的濃度高達155ng/g以上[7]。此時，Lopez等使用GC-MS的方式，可以合理地對骨骼當中的阿片類藥物、可卡因或者其他的代謝物實施分析，檢測的濃度主要是保持在0．3～1ng/mg到150ng/mg之間。Cartiser等使用的是GC-MS/MS的檢驗方式，此種方式，主要是對骨髓當中的咖啡因實施合理的分析和檢驗，此時的定量下限為50ng/g，使用此種方式檢驗出來的結果，不僅速度較快，并且可以展現(xiàn)較強的表現(xiàn)性，增強靈敏度，滿足定量檢測的需求。Orfanidis等就是使用UHPLC-MS/MS的檢驗方式，可以對骨頭當中所包含的卡因、大麻等二十七種藥物實施分離，并且可以將這些量合理分析標準化的制品方式，探究異質性，在不一樣的實驗室當中，即可對其中的濃度測量合理的分析，并給落到實處。Sri-kanth等需要合理使用反相高效液相色譜法在大鼠骨髓組當中，合理的分析當中存在的氯法齊明，在檢測完成以后，即可對其中的濃度保持良好的關系，在高中低的基礎上合理地統(tǒng)籌規(guī)劃，并且探究其中的濃度。

四、動物實驗研究

骨骼組織中藥毒物檢驗，并不是簡單的研究就可以完成的，需要使用大量的動物實施合理的實驗，并且完善其中的內容，分析基本的骨骼組織框架。骨髓中藥物濃度最高，Vandenbosch在大鼠骨組織中，就已經發(fā)現(xiàn)了美沙酮的存在，并且可以及時分析其中存在的濃度，合理發(fā)現(xiàn)其中蘊含的含量。在現(xiàn)實中，多種因素都可以對藥物在骨骼組織中所積累的沉淀產生影響，甲基苯丙胺濃度在外界卻不會存在較大的影響。Cornthwaite就是在不一樣的氣候條件中，對大鼠骨骼的組織中的氯胺酮實施合理地分析，發(fā)現(xiàn)其中的分解情況，避免濃度較高的問題出現(xiàn)，很少使用昆蟲的方式前來分解，真實反映出最終的重計量，探究藥物濃度所存在的差異性。在長期的動物實驗中，即可找到骨質藥物濃度的線性發(fā)展關系，合理的探究其中存在的比例性。

五、總結

隨著社會的進步，從高靈敏度儀器呈現(xiàn)到大家的視野當中以后，不僅提升了骨骼組織中藥物檢的效率，并且可以為案件的偵破提供更多的路徑。藥物在骨骼內一直都是保持著屬于自己的規(guī)律，這些濃度的變化，不僅可以反映出死亡的時間，也可以作為死者的證據(jù)。合理分析骨骼中藥物濃度和血液藥物濃度之間的關系，制定處理措施，為今后的標準化發(fā)展奠定良好的基礎。