正確認(rèn)識(shí)和應(yīng)用布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)

邵衛(wèi)星，蓋文燕，左媛媛，孫明軍，焉 鑫，孫世雄，劉蒙達(dá)，張研博

（1.中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032；2.山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，山東濰坊 261061）

布魯氏菌?。ê喎Q“布病”）是由布魯氏菌引起的一種嚴(yán)重威脅動(dòng)物和人類健康的全球性重要人獸共患病。本病主要引起動(dòng)物流產(chǎn)、不孕和不育，以致降低生產(chǎn)性能。人感染布魯氏菌后主要表現(xiàn)為波浪熱、關(guān)節(jié)痛、肌肉痛和不育；如果不及時(shí)治療可轉(zhuǎn)為慢性，往往難以治愈。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WOAH）將其列為須通報(bào)的多種動(dòng)物疫病，我國將其列為二類動(dòng)物疫病。近年來，我國畜間和人間布病疫情持續(xù)加重，病例數(shù)量一直維持高位，每年因患布病導(dǎo)致的流產(chǎn)和產(chǎn)奶量下降給奶牛業(yè)帶來很大經(jīng)濟(jì)損失。在開展布病診斷、監(jiān)測、陽性動(dòng)物篩查等工作時(shí)，虎紅平板凝集試驗(yàn)（rose bengal test，RBT）是一種必不可少的、經(jīng)典的常規(guī)抗體檢測方法，尤其在人力、財(cái)力和物力有限地區(qū)，RBT 以其操作簡單、不需特殊儀器設(shè)備、獲得結(jié)果快、結(jié)果直觀、成本低等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛使用[1]；但在實(shí)際應(yīng)用中，由于對(duì)其特性缺乏足夠了解和認(rèn)識(shí)，常出現(xiàn)檢測結(jié)果不準(zhǔn)確、結(jié)果解釋不規(guī)范等問題而導(dǎo)致被“誤用”，從而影響了RBT 在布病防控中所應(yīng)起到的作用。本文將從動(dòng)物感染布魯氏菌后產(chǎn)生抗體的種類及特點(diǎn)，凝集反應(yīng)中存在的“前帶現(xiàn)象”和非特異性反應(yīng)，以及RBT 的特性，陽性結(jié)果需“確證”及不同臨床情形下的應(yīng)用5 個(gè)方面進(jìn)行闡述，使相關(guān)職業(yè)人員能認(rèn)識(shí)和理解RBT特點(diǎn)，在布病防控中能合理解釋和應(yīng)用其檢測結(jié)果，避免RBT 被“誤用”，以利于發(fā)揮其應(yīng)有的作用。

1 動(dòng)物感染布魯氏菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體種類及特點(diǎn)

布魯氏菌是細(xì)胞內(nèi)寄生菌，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫。在血清、乳汁、陰道分泌物、關(guān)節(jié)水瘤液和精液中都含有布魯氏菌抗體[2]。光滑型布魯氏菌（通常為牛種、羊種和豬種布魯氏菌）感染動(dòng)物后，細(xì)菌脂多糖（S-LPS）能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的、不同抗體類型的體液免疫反應(yīng)。例如，牛感染牛種布魯氏菌后產(chǎn)生的抗體類型包括IgM、IgG1、IgG2 和少量的IgA，但以IgG1 為主。感染布魯氏菌后，不同類型抗體出現(xiàn)的先后順序不同，一般先產(chǎn)生IgM，然后很快轉(zhuǎn)換為產(chǎn)生IgG。抗體類型轉(zhuǎn)換需要的時(shí)間很短，如犢牛和成年?？煞謩e在感染后4 d 和7 d 內(nèi)完成抗體類型轉(zhuǎn)換[3-4]。在正常生理?xiàng)l件下，IgM、IgG 和IgA 可分為凝集抗體、非凝集抗體和阻斷抗體。一般來講，凝集抗體包括IgM、IgG 和IgA，非凝集抗體包括大部分IgG1 和血清中部分IgA（不包括奶中的IgA）。一些血清還含有所謂的“阻斷抗體”。該抗體是非凝集抗體的一個(gè)亞類，與凝集抗體共存，在正常生理?xiàng)l件下可以阻止凝集抗體發(fā)生凝集。當(dāng)血清中的“阻斷抗體”效價(jià)過高時(shí)，就不發(fā)生凝集反應(yīng)和沉淀反應(yīng)。動(dòng)物感染布魯氏菌（包括疫苗接種）后，首先產(chǎn)生凝集抗體，達(dá)到峰值后逐漸被非凝集抗體取代[5]。

2 布魯氏菌抗體凝集反應(yīng)中存在的“前帶現(xiàn)象”和非特異性反應(yīng)

2.1 “前帶現(xiàn)象”

在體外生理（生理pH 和離子濃度）條件下，布魯氏菌與陽性血清發(fā)生的凝集反應(yīng)會(huì)受到阻斷抗體影響，出現(xiàn)所謂的“前帶現(xiàn)象”，即在抗體濃度高的時(shí)候，反而出現(xiàn)非凝集現(xiàn)象。但血清經(jīng)過稀釋，降低了阻斷抗體的滴度，可使阻斷凝集反應(yīng)的效應(yīng)消失[5]。實(shí)際上，含有高滴度IgM 或凝集抗體的血清一般不會(huì)產(chǎn)生“前帶現(xiàn)象”，通常只在加熱處理一些血清（為排除IgM 干擾）時(shí)才出現(xiàn)。這表明“前帶現(xiàn)象”是凝集抗體（IgM、IgG 和IgA）和非凝集抗體（IgG1 和IgA 部分）之間競爭的結(jié)果。這兩類抗體在血清中的滴度和親和力，隨動(dòng)物感染布魯氏菌的時(shí)間進(jìn)程而不同。因此，“前帶現(xiàn)象”可降低凝集試驗(yàn)的診斷敏感性（DSe）。

2.2 非特異性凝集反應(yīng)

在體外生理?xiàng)l件（生理pH 和離子濃度）下，凝集反應(yīng)還會(huì)受到非特異性凝集反應(yīng)影響。非特異性凝集主要來自兩個(gè)方面：一方面來自布魯氏菌抗原與血清中其他抗原的IgM 抗體發(fā)生非特異性凝集反應(yīng)。據(jù)估計(jì)，約0.6%無布魯氏菌感染牛的血清（布魯氏菌抗體陰性）在1:100 及以上稀釋時(shí)，可對(duì)光滑型（S 型）布魯氏菌產(chǎn)生凝集反應(yīng)。研究[6]表明，沒有感染布魯氏菌的小母牛血清中含有的IgM，在ELISA 試驗(yàn)中也可以與布魯氏菌脂多糖（LPS）結(jié)合，其中與粗糙型菌（R 型）LPS的結(jié)合強(qiáng)度比與S 型菌的高。這一非特異性結(jié)合現(xiàn)象在大腸桿菌和假單胞桿菌中也存在。出現(xiàn)非特異性凝集反應(yīng)的原因是，血清中的非布魯氏菌抗體IgM 通過其Fc 部分，能夠識(shí)別布魯氏菌和其他革蘭氏陰性菌的LPS 核心脂質(zhì)A（lipid A-core）上共有的抗原決定簇[7]。如果抗原懸液中含有裂解的布魯氏菌，就會(huì)加重這種非特異性凝集。另一方面是因?yàn)椴剪斒暇舛嗵牵∣PS）與一些革蘭氏陰性菌的OPS 存在抗原交叉。在這些細(xì)菌中，小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌血清型O:9（Y.O:9）可與布魯氏菌OPS 產(chǎn)生強(qiáng)的交叉反應(yīng)，是布魯氏菌抗體檢測中出現(xiàn)假陽性反應(yīng)（FPSR）的最常見因素。Y.O:9可感染牛、豬，也可感染綿羊。在反芻動(dòng)物中，引起布魯氏菌抗體FPSR 的細(xì)菌可能還有大腸桿菌O:157 和沙門氏菌群N（O:30），但這些細(xì)菌表現(xiàn)出的抗原交叉反應(yīng)性較低[8-10]。盡管霍亂弧菌O:1和一些嗜麥芽窄食單胞菌的OPS 中也攜帶有N-替代的過氧胺[11]，但從來沒有報(bào)道過其在反芻動(dòng)物中可引起FPSR。因而，很難確定引起FPSR 的所有來源[12]。

3 RBT 特性

3.1 酸化處理RBT 抗原

為消除凝集反應(yīng)中的“前帶現(xiàn)象”和非特異性反應(yīng)，人們采取了多種措施，來降低或排除血清中IgM 對(duì)凝集反應(yīng)的干擾。常用方法包括：向血清中加入EDTA 和利凡諾，優(yōu)先沉淀IgM；對(duì)血清加熱，向血清中加入硫醇或酸化血清，使血清中的IgM 變性。在這些措施中，使血清酸化是消除“前帶現(xiàn)象”和非特異性凝集反應(yīng)的最有效方法，但對(duì)因存在抗原交叉（如耶爾森菌O:9）細(xì)菌感染產(chǎn)生的非特異性凝集反應(yīng)無效。

為了區(qū)分特異性凝集和非特異性凝集，Rose 和Roepke 在1957 年報(bào)道了一種經(jīng)過改進(jìn)的RBT。他們發(fā)現(xiàn)，在檢測前將所用的抗原緩沖液處于pH4.0 條件下，可抑制牛種布魯氏菌抗原與牛血清的非特異性反應(yīng)，而血清中的布魯氏菌抗體活性卻基本不受影響。向血清中加入弱酸，使血清pH在3.7～4.1 范圍內(nèi)，可最大程度消除非特異性凝集；pH 在3.8～4.2 范圍內(nèi)，牛血清的緩沖能力最強(qiáng)。乳酸和醋酸對(duì)酸化牛血清最有效[13]。由于直接酸化血清不方便操作，改為酸化RBT 抗原，當(dāng)抗原與血清混合時(shí)，血清得到酸化，從而達(dá)到抑制非特異性凝集反應(yīng)的目的。RBT 抗原經(jīng)過酸化處理，可有效消除凝集反應(yīng)中的“前帶現(xiàn)象”，這是由于存在非布魯氏菌抗體IgM，從而使產(chǎn)生的非特異性反應(yīng)大大降低。盡管在pH3.8～4.2 范圍內(nèi)，酸化抗原可以極大減少非特異性凝集反應(yīng)，但該條件下抗原不穩(wěn)定，為此1965 年美國農(nóng)業(yè)部（USDA）國家動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室對(duì)酸性平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行修改，采用虎紅染料對(duì)牛種布魯氏菌懸液染色，并將緩沖液pH 調(diào)整為3.65[14]。該試驗(yàn)方法在美國稱為卡片試驗(yàn)（card test），而在其他國家，如法國、英國等，稱為虎紅平板試驗(yàn)（RBPT），后來簡稱RBT[15-16]。研究[17]發(fā)現(xiàn)，在pH3.65 條件下，IgG1 的非凝集特性轉(zhuǎn)變?yōu)槟苣剪斒暇gG1 凝集能力改變的原理并不清楚，推測可能是在酸性條件下，打開了IgG1 的鉸鏈區(qū)，使抗體分子變?yōu)槎r(jià)，使其具有凝集布魯氏菌的能力；診斷實(shí)驗(yàn)室在持續(xù)檢測中發(fā)現(xiàn)，在pH3.65 條件下開展RBT 檢測，血清中存在的阻斷凝集效應(yīng)和相關(guān)的“前帶現(xiàn)象”也消失了。

3.2 RBT 抗原需經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化

制備RBT 抗原所用的菌株、培養(yǎng)菌的批次，特別是抗原濃度，能對(duì)RBT 性能（敏感性和特異性）造成很大影響。為使RBT 性能保持一致，需用參考血清對(duì)不同菌株和批次的RBT抗原進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，這是非常重要的。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WOAH）的參考血清被認(rèn)定為國際標(biāo)準(zhǔn)血清，是所有其他標(biāo)準(zhǔn)血清（如國家標(biāo)準(zhǔn)血清、工作標(biāo)準(zhǔn)血清）進(jìn)行校準(zhǔn)的依據(jù)。用國家標(biāo)準(zhǔn)血清對(duì)RBT 抗原進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，可使不同廠家制備的RBT 抗原達(dá)到統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，使檢測結(jié)果在國內(nèi)具有一致性。但需要注意的是，抗原標(biāo)準(zhǔn)化并不一定意味著RBT 具有最佳的診斷敏感性（DSe）和診斷特異性（DSp），還需用血清盤進(jìn)行驗(yàn)證，以獲得最佳檢測性能。

常用的RBT 抗原標(biāo)準(zhǔn)化方法是，將牛種標(biāo)準(zhǔn)陽性血清用0.5%石碳酸生理鹽水或生理鹽水進(jìn)行1/45 和1/55 比例稀釋，按RBT 試驗(yàn)程序檢測，抗原應(yīng)與1/45 比例稀釋的標(biāo)準(zhǔn)血清發(fā)生清晰的凝集反應(yīng)，但不與1/55 比例稀釋的標(biāo)準(zhǔn)血清發(fā)生可見的凝集反應(yīng)[1]。用該方法標(biāo)化的RBT 抗原在檢測小反芻動(dòng)物（如山羊、綿羊等）血清時(shí)，會(huì)降低其敏感性，與補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）檢測結(jié)果存在偏差[18]，因此，當(dāng)RBT 用于檢測小反芻動(dòng)物血清時(shí)，為提高敏感性，可將血清和抗原的體積比改為3:1（如分別為 75 μL 和25 μL），而不是標(biāo)準(zhǔn)操作程序中的1:1，但該方法并不適用于檢測牛和豬血清。

3.3 RBT 的診斷性能

經(jīng)過抗原酸化的RBT，其診斷性能得到大大提高，在診斷布魯氏菌感染方面，比試管凝集試驗(yàn)（SAT）更準(zhǔn)確。

具體表現(xiàn)在：一是診斷特異性得到提高，這是因?yàn)橄擞煞遣剪斒暇贵wIgM 引起的非特異性凝集反應(yīng)；二是診斷敏感性也大大提高，對(duì)于某些血清樣品，SAT 檢測（生理?xiàng)l件下pH7.2～7.4）結(jié)果為陰性，而用RBT 檢測，結(jié)果可能為陽性（這是因?yàn)榭乖峄腞BT 不再受“前帶現(xiàn)象”影響，因此比SAT 的敏感性高）；三是能更早地檢測出感染布魯氏菌動(dòng)物，由于部分布魯氏菌抗體IgM在酸性條件下仍然具有活性，能與RBT 抗原發(fā)生凝集反應(yīng)，因此比其他試驗(yàn)方法，如補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）、間接ELISA，能更早地檢測出感染布魯氏菌動(dòng)物。

不同廠家生產(chǎn)的RBT 抗原凝集IgG2 和IgM的能力不同，但是都能有效凝集IgG1，這使得RBT 的檢測結(jié)果與CFT 結(jié)果有非常好的一致性（因?yàn)镃FT 也是檢測IgG1）。研究[15]表明：將聯(lián)合使用CFT 和SAT 獲得的試驗(yàn)結(jié)果與RBT 結(jié)果進(jìn)行比較，可獲得90.8%的一致性，隨后又證明一致性可高達(dá)97%；以聯(lián)合使用SAT 和CFT 的檢測結(jié)果作為“金標(biāo)準(zhǔn)”，RBT 的敏感性和特異性可分別達(dá)到96%和97%，從而說明抗原酸化的RBT具有更好的檢測性能。RBT 已成功用于美國和歐洲布病根除計(jì)劃中。但在酸性條件下，抗體與抗原的結(jié)合強(qiáng)度降低，與其他方法（如CFT）比較，對(duì)于抗體效價(jià)低的血清，能降低RBT 的分析靈敏性（最小檢出能力），但不會(huì)對(duì)敏感性造成不良影響[19]。需要注意的是，必須在抗原與血清混合后4 min 內(nèi)判讀結(jié)果，如果時(shí)間延長，有時(shí)就會(huì)因?yàn)槌霈F(xiàn)纖維蛋白凝塊而導(dǎo)致假陽性。

4 RBT 陽性結(jié)果“確證”

4.1 RBT 陽性結(jié)果需要“確證”的起因

RBT 無法區(qū)分S 型布魯氏菌疫苗免疫產(chǎn)生的抗體和野生布魯氏菌感染誘導(dǎo)的抗體。在免疫情況下，RBT 的特異性大大降低。在20 世紀(jì)60 年代末，人們發(fā)現(xiàn)犢牛接種S19 疫苗后12 個(gè)月，用RBT 進(jìn)行檢測，還有相當(dāng)比例的牛能被檢測出疫苗抗體，但是用CFT 檢測，在免疫后幾個(gè)月（通常6～8 個(gè)月）就檢測不出疫苗抗體。在免疫狀況下，由于CFT 比RBT 特異性高，在實(shí)際檢測工作中，開始將CFT 與RBT 聯(lián)合使用，即用CFT 對(duì)RBT 陽性結(jié)果進(jìn)行確證[20]，以增加檢測的特異性，減少疫苗抗體陽性動(dòng)物被“冤殺”。因此，在疫苗接種的情況下，CFT 成為RBT 陽性結(jié)果的“確認(rèn)性”檢測方法，并在一些國家被推薦使用[1]。這就是在免疫情形下RBT 陽性結(jié)果需進(jìn)行“確證性”檢測的起因。

4.2 對(duì)RBT 陽性結(jié)果進(jìn)行“確證性”檢測的誤用

在實(shí)際檢測中，對(duì)RBT 陽性結(jié)果需再次進(jìn)行“確證性”檢測這一做法常存在誤用，即無論流行病學(xué)背景如何以及是否免疫接種，RBT 陽性結(jié)果都必須用CFT 或其他檢測方法（如iELISAs、cELISAs、SAT）進(jìn)行“確證性”檢測。根據(jù)歷史經(jīng)驗(yàn)和近期研究，在沒有接種疫苗的情況下，RBT的敏感性和特異性較高，均超過95%[21-22]。因此，在布病流行地區(qū)（或養(yǎng)殖場），對(duì)于非免疫動(dòng)物，特別是為評(píng)估群體流行率而開展抗體檢測時(shí)，RBT陽性結(jié)果無需用其他方法進(jìn)行確證。一些國家實(shí)施S19 疫苗接種和聯(lián)合使用RBT-CFT 進(jìn)行檢測的防控策略，成功根除了牛群中的布病。該策略之所以能成功，是因?yàn)檫@些國家具有良好的基礎(chǔ)條件，能對(duì)可疑畜群（群中存在RBT 陽性，但CFT 為弱陽性的動(dòng)物）不斷進(jìn)行重復(fù)檢測，跟蹤這些可疑動(dòng)物CFT 抗體滴度的變化，從而做出準(zhǔn)確診斷。盡管如此，該策略也不可避免地導(dǎo)致相當(dāng)比例的接種疫苗動(dòng)物被認(rèn)為感染了布魯氏菌而被“冤殺”，增加了額外的資金補(bǔ)償。

4.3 SAT 不適合用于對(duì)RBT 陽性結(jié)果進(jìn)行“確證”

我國現(xiàn)行的《動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》（GB/T18648—2018）將SAT 作為RBT 陽性結(jié)果的確證方法，但有研究[15]表明，用SAT 檢測接種S19 疫苗牛血清，其特異性并不高。一些成功實(shí)施牛群布病根除計(jì)劃國家的經(jīng)驗(yàn)表明，SAT（或含巰基乙醇的SAT）并不能很好區(qū)分野生布魯氏菌感染抗體和S19 疫苗抗體[15-16]。同時(shí)，必須注意到，SAT 只能檢測血清中的IgM 和凝集抗體，而這二類抗體通常在動(dòng)物感染布魯氏菌的早期產(chǎn)生，因此SAT 更適于早期感染的檢測，而不適合感染后期的檢測，特別是不適合對(duì)慢性感染動(dòng)物的檢測。但RBT 不存在上述問題。在一項(xiàng)研究[23]中，比較了幾種檢測方法，結(jié)論是RBT 和iELISAs 敏感性高，而SAT 是一種較差的檢測方法。WOAH 的《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)與疫苗手冊》（2020 年版）中有關(guān)SAT 的描述是，在國際貿(mào)易中用SAT 診斷布病，結(jié)果通常是不可靠的。在該手冊的“牛種、羊種和豬種布魯氏菌感染的診斷方法”列表中，明確指出SAT 不適用于疑似或臨床病例的確證[1]。

5 在實(shí)施布病防控計(jì)劃中正確使用RBT

根據(jù)RBT 特性，自1966 年，它作為一種布病篩選試驗(yàn)而被廣泛使用。在一個(gè)國家、地區(qū)或養(yǎng)殖場實(shí)施布病預(yù)防、控制或凈化措施時(shí)，RBT 主要用于以下幾種情形。

5.1 在采取防控措施前評(píng)估動(dòng)物群體流行率

在實(shí)施布病防控措施前，評(píng)估當(dāng)?shù)貏?dòng)物群布病流行率（在個(gè)體水平，更重要的是在群體水平上）對(duì)于評(píng)估布病在當(dāng)?shù)卦斐傻奈：σ约皼Q定采取哪種干預(yù)策略至關(guān)重要[24-26]。在資源有限地區(qū)（通常指自由放牧和輪牧飼養(yǎng)模式，但有時(shí)也包括中小規(guī)模密集飼養(yǎng)模式），RBT 以其操作簡單、價(jià)格便宜、結(jié)果易判定的特點(diǎn)而成為評(píng)估流行率最實(shí)用的檢測方法[27-28]。

5.2 在全面免疫的情形下評(píng)估疫苗接種效果

在全面免疫（所有動(dòng)物都進(jìn)行免疫接種）情形下，評(píng)估疫苗接種的有效性是首要目標(biāo)，而將檢測和撲殺布魯氏菌感染動(dòng)物作為次要目標(biāo)?？贵w陽轉(zhuǎn)率是評(píng)估疫苗接種有效性的重要指標(biāo)。接種疫苗2～3 周后，用RBT 檢測接種疫苗（S 型）動(dòng)物，評(píng)估抗體陽轉(zhuǎn)率。長期實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)表明，接種動(dòng)物的抗體陽轉(zhuǎn)率達(dá)70%～90%（如果經(jīng)眼結(jié)膜途徑接種，抗體陽性率會(huì)低一些，一般在60%以上），證明本次疫苗接種有效；如果接種動(dòng)物的抗體陽轉(zhuǎn)率低于50%，表明疫苗接種效果不良，不能提供足夠的免疫保護(hù)[29-30]。

5.3 在采取“免疫+檢測+撲殺”防控策略情形下初篩布魯氏菌感染動(dòng)物

當(dāng)采用“免疫+檢測+撲殺”防控策略時(shí)，一般只對(duì)未成年動(dòng)物進(jìn)行免疫，在動(dòng)物性成熟后（牛一般在接種后12 個(gè)月，羊一般在接種后6 個(gè)月）用RBT 進(jìn)行檢測。檢測的目的是初篩布魯氏菌感染動(dòng)物。在免疫情形下，RBT 的特異性會(huì)下降。為排除疫苗抗體對(duì)RBT 結(jié)果造成的干擾，需用特異性更高的確證性試驗(yàn)（如CFT 和HN 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)等）[29]或補(bǔ)充性試驗(yàn)（如iELSA、cELISA、FPA 等）[27]，對(duì)RBT 檢測為陽性的血清樣品進(jìn)行再次檢測，確證動(dòng)物是否感染野生布魯氏菌，以減少疫苗抗體陽性動(dòng)物被“冤殺”。在此情形下，選擇合適的檢測時(shí)機(jī)也非常重要。檢測時(shí)機(jī)通常與接種動(dòng)物的日齡、劑量、途徑、頻次及疫苗的菌株等因素有關(guān)，而且需有經(jīng)驗(yàn)的流行病學(xué)專家根據(jù)當(dāng)?shù)夭疾×餍械木唧w情況，確定合適的檢測時(shí)機(jī)[31-32]。

5.4 在無疫狀態(tài)下證明動(dòng)物群無布病

對(duì)于無布魯氏菌感染的動(dòng)物群，可將RBT 作為一種群體水平的篩查方法，在適當(dāng)時(shí)機(jī)（一般1年2 次）對(duì)全群動(dòng)物進(jìn)行檢測，證明無布病，即可確定動(dòng)物群無布魯氏菌感染[1]，以維持動(dòng)物群的無疫狀態(tài)。在這種情形下，對(duì)于RBT 檢測出的陽性動(dòng)物，一般需用病原學(xué)方法（如細(xì)菌分離鑒定、熒光PCR 等）在合適的時(shí)機(jī)（如產(chǎn)后1 個(gè)月內(nèi)）重新采集樣品，進(jìn)行確證檢測（因?yàn)榇藭r(shí)血清學(xué)檢測方法的陽性預(yù)測值非常低，即陽性結(jié)果的可靠性低），以提高檢測的特異性。

6 總結(jié)及展望

作為一種經(jīng)典的常規(guī)方法，RBT 是常用的布魯氏菌抗體檢測方法之一。RBT 經(jīng)過抗原酸化處理后，其敏感性和特異性大大提高。在免疫或布病流行率很低的情況下（流行率幾乎接近于0），RBT 檢測出的陽性動(dòng)物需用特異性更好的“確證性”或“補(bǔ)充性”試驗(yàn)進(jìn)行再次檢測，以盡可能減少疫苗抗體對(duì)布病檢測結(jié)果的干擾，或FPSR 對(duì)可疑病例確診造成的影響。但在布病流行地區(qū)，對(duì)于非免疫動(dòng)物，無需對(duì)RBT 檢測出的陽性樣品進(jìn)行再次確證。應(yīng)根據(jù)不同的臨床情形正確選擇使用RBT，避免被“誤用”。應(yīng)選用經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化的RBT 抗原試劑，否則會(huì)影響RBT 性能（敏感性和特異性）和檢測結(jié)果的正確性。認(rèn)識(shí)和了解RBT的特性，根據(jù)不同臨床情形正確解釋和應(yīng)用檢測結(jié)果，不但可以降低布病檢測成本，而且可極大發(fā)揮RBT 在布病防控中的作用。