比較不同產地白術中揮發(fā)油及兩種白術內酯活性成分的含量

黃柏益，田 薇，袁 珂，陳 磊

1 杭州華東中藥飲片有限公司，杭州 311301;2 浙江農林大學，杭州 311300

白術為菊科植物白術[1]Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根莖。我國白術的產地主要分布在中部地區(qū)及江浙一帶，其中浙江是白術的道地產區(qū)。浙江白術是有名的“浙八味”之一，其主產地以新昌、磐安最著。而產于臨安於潛西天目山一帶的白術，由于處于獨特的地理環(huán)境，因品質優(yōu)良而被冠為“於術”，在《浙江省中藥炮制規(guī)范》2015 年版予以收載[2]。近年來，白術在河北等地也廣為栽培。

在《中國藥典》2020 年版中，白術質量控制方法較為簡單，無含量測定項?，F建立了白術揮發(fā)油主要成分的定性分析及白術內酯Ⅱ和白術內酯Ⅲ的含量測定方法，并比較了不同產地白術揮發(fā)油的組成、白術內酯Ⅱ和白術內酯Ⅲ的含量。

1 儀器與藥品、試劑

Waters 2695 高效液相色譜儀（美國Waters 公司）；Finnigan 氣相色譜－串聯質譜聯用儀（美國菲尼根公司）；十萬分之一分析天平（METTLER AE 240，瑞士）。揮發(fā)油提取器（四川蜀玻集團公司）。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；水為蒸餾水。

白術內酯Ⅱ（批號1018-090908）與白術內酯Ⅲ（批號1018-090812）對照品（購自江西本草天工科技有限責任公司，純度均＞98%）。臨安於術（9 批）、磐安白術（8 批）、河北白術（7 批），經浙江農林大學田薇教授鑒定確認，其產地等信息見表1。

表1 樣品批號、采集地和揮發(fā)油總量

2 方法與結果

2.1 揮發(fā)油的提取與測定

2.1.1 揮發(fā)油的提取及總量測定 分別將不同產地白術粉碎成粗粉，各取樣50 g 左右放入1000 mL的圓底燒瓶中，加入350 mL 的蒸餾水，安裝揮發(fā)油提取器，提取揮發(fā)油至盡。收集揮發(fā)油，測量其體積，計算得油率。結果見表1。

采用水蒸餾提取檢測揮發(fā)油含量，磐安白術較臨安於術檢測值略高，河北白術最低。其中磐安白術、臨安於術飲片較河北白術分別高出71.4%、68.4%，相對含量較高，浙產白術有較明顯優(yōu)勢。

2.1.2 GC－MS 測定條件 氣相色譜條件[3]：色譜柱為OV-1701（30 m×0.25 mm，0.25 μm）毛細管柱；升溫程序：初始溫度50℃，保持2 min，以10℃·min-1的速度升至130℃，再以5℃·min-1的速度升至190℃；繼續(xù)以12℃·min-1的速度升至240℃，保持4 min；進樣口溫度200℃，氣化室溫度250℃；載氣為氦氣，流速：0.8 mL·min-1；分流比30∶1，進樣量：0.1 μL。

質譜條件：電子轟擊（EI）離子源；電離能量70eV，離子源溫度200℃，檢測器電壓350 V，掃描質量范圍：m/z：33～450 AMU；掃描速度0.5 s；檢索的圖譜數據庫為Willey 和NIST 標準質譜圖庫。

2.1.3 測定結果 取於術1（批號211004）、磐安10（批號210913）、河北20（批號211101）3 批樣品揮發(fā)油，按“2.1.2”測定條件進行分析化合物的定量，采用面積歸一化法，使用Hewlett-Packard 軟件處理系統計算各峰面積，以測得揮發(fā)油各組分的相對百分含量；按照上述GC/MS 測定條件對各飲片中提取得到的揮發(fā)油進行化學成分分析。

對總離子流圖中的各峰經過質譜掃描后，通過質譜數據系統（NIST 和Willey 標準圖譜數據庫）檢索對照，并查閱有關質譜資料，鑒定、計算出不同產地飲片中的揮發(fā)油的化學成分。見表2。

由表2 知，臨安於術、磐安白術、河北白術的飲片中的揮發(fā)油成分，經GC/MS 檢測，共從中分離出38 個成分，鑒定出25 種成分（見表2），其中相對含量在1.0%以上的共11 種。3 批不同產地白術揮發(fā)油含量主要為烴類的不同，而醇類、酯類含量無顯著差異。揮發(fā)油主要成分蒼術酮，三者相差不多。

表2 各飲片中揮發(fā)油成分分析結果

2.2 白術內酯Ⅱ、白術內酯Ⅲ的含量測定

2.2.1 HPLC 色譜條件及系統適應性試驗[4]Waters XBridge C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相A：甲醇，流動相B：水，梯度洗脫（程序為：0～40 min 60%～100% A）；檢測波長為230 nm（0～17 min）和276 nm（17～25 min）；柱溫：30℃；流速：1.0 mL·min-1；靈敏度0.2 AUFS。在上述色譜條件下，白術內酯Ⅱ與白術內酯Ⅲ色譜峰與相鄰色譜峰分離度大于2.0，理論塔板數均大于6000。

2.2.2 對照品及供試品溶液的制備 對照品溶液：分別精密稱取白術內酯Ⅱ對照品3.01 mg，白術內酯Ⅲ對照品3.98 mg，置50 mL 量瓶中，加甲醇至刻度。從中取1 mL 置10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，制成白術內酯Ⅱ與白術內酯Ⅲ濃度分別為0.006 02、0.007 96 mg·mL-1的混合溶液，作為對照品溶液。

供試品溶液：將樣品粉碎成細粉，稱取約1.0 g，精密稱定，置于錐形瓶中，加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足失重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 線性關系考察 精密依次吸取混合對照品溶液5、10、15、20、25 μL，按上述色譜條件進樣測定。以對照品質量X（μg）為橫坐標，峰面積積分值Y 為縱坐標進行線性回歸，計算白術內酯Ⅱ與白術內酯Ⅲ的回歸方程，分別為：Y=5.52×106X+1.51×104，r=0.999 8；Y=2.00×106X+2.89×103，r=0.999 9。表明白術內酯Ⅱ與白術內酯Ⅲ分別在0.030 1～0.150 5 μg與0.039 8～0.199 0 μg 范圍內線性關系良好。

2.2.4 進樣精密度試驗 精密吸取供試品溶液10μL，按上述色譜條件進樣測定，連續(xù)進樣6 次，測定峰面積。白術內酯Ⅱ的峰面積分別為222 758、223 068、225 290、226 096、235 627、234 527，RSD 為2.51%；白術內酯Ⅲ的峰面積分別為296 119、294 699、294 623、304 826、299 374、294 832，RSD 為1.36%，表明精密度良好。

2.2.5 重復性試驗 取同一批樣品（批號211004）平行取樣6 份，每份約1.0 g，精密稱定，按“2.2.2”項下方法制得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液10 μL，按照上述色譜條件進樣測定峰面積，計算含量，結果白術內酯Ⅱ與白術內酯Ⅲ含量的RSD 分別為0.75%和1.91%，表明重復性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液（批號211004），分別于0、3、6、9、12、15 h 進樣10 μL，記錄峰面積，結果白術內酯Ⅱ的峰面積分別為228 008、223 068、225 192、235 141、226 084、234 498，RSD 為2.20%。白術內酯Ⅲ的的峰面積分別為294599、295324、294 522、298 313、304 927、294 134，RSD 為1.41%，表明供試品溶液在15 h 內穩(wěn)定。

2.2.7 加樣回收率試驗 精密稱取6 份已知含量的同一批樣品（批號211004）0.5 g，分別加入白術內酯Ⅱ和白術內酯Ⅲ對照品溶液適量，按“2.2.2”項下方法制得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液10 μL 注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，計算含量。白術內酯Ⅱ與白術內酯Ⅲ的平均加樣回收率分別為98.6%和98.6%，RSD%分別為2.1%和1.8%。見表3、表4。

表3 白術內酯Ⅱ加樣回收率結果（n=6）

表4 白術內酯Ⅲ加樣回收率結果（n=6）

2.2.8 含量測定結果 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL 注入高效液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，計算各供試品溶液中白術內酯Ⅱ與白術內酯Ⅲ的含量，結果見圖1，表5。

表5 樣品含量測定結果

圖1 高效液相色譜圖

結果表明，臨安於術及磐安白術中白術內酯Ⅱ略高于河北白術，白術內酯Ⅲ含量顯著高于河北。

2.2.9 聚類分析 24 批樣品主要分為兩類，將分析結果與產地信息結合發(fā)現：1～17 聚為一類，於術和磐安樣品；18～24 聚為一類，河北樣品；說明不同產地的白術內酯顯示出一定地域差別。以含量測定分析，於術和磐安樣品的內酯含量明顯高于河北的。見圖5。

圖5 24 批白術樣品內酯聚類分析圖

3 討論

飲片中所含的揮發(fā)油總量和白術內酯在不同產地有很大不同。揮發(fā)油總量（mL·g-1）檢測，臨安於術、磐安白術分別達1.9%、2.1%，而河北白術揮發(fā)油（mL·g-1）僅為0.6%，兩者比較相差懸殊。白術內酯Ⅱ與白術內酯Ⅲ總值臨安於術最高。有資料顯示[5]，於術由于具有土壤肥沃、亞熱帶氣候、降雨、光照、生態(tài)群落等環(huán)境，揮發(fā)油、白術內酯成分的生成及累積要好于河北的白術。