八角蓮木脂素和黃酮類化學(xué)成分研究

張欣，曹瑞，馮改利，張化為，姜祎，王薇，鄧翀（陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西 咸陽 712046）

八角蓮（Dysosma versipellis） 為小檗科（Berberidaceae）鬼臼屬植物八角蓮的干燥根及根莖[1]，又稱旱八角、八角盤、獨葉一枝花等，文獻報道其主要化學(xué)成分為木脂素類、黃酮類和有機酸等[2-5]，具有抗腫瘤、抗菌和抗病毒等藥理作用[6-8]。其中鬼臼毒素類木脂素是八角蓮抗腫瘤的主要活性成分，受到國內(nèi)外學(xué)者的重點關(guān)注。目前關(guān)于八角蓮的化學(xué)成分研究并不系統(tǒng)，為進一步明確其化學(xué)成分，本文對八角蓮醇提取物進行了系統(tǒng)研究，從中共鑒定了8 個化合物（結(jié)構(gòu)見圖1），包括木脂素類5 個，黃酮類3 個，分別為爵床脂素A（1）、山荷葉素葡萄糖苷（2）、arabelline（3）、鬼臼毒素-4-O-β-D-葡萄糖苷（4）、落葉松樹脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（5）、槲皮素（6）、山柰酚3-O-β-D-葡萄糖苷（7）、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷（8），其中，化合物1、3、5 和8首次從八角蓮中分離鑒定，具體結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1 ～8 的結(jié)構(gòu)圖Fig 1 Structures of compounds 1 ～8

1 材料

Bruker-AVANCE400 型核磁共振儀（布魯克公司）；HH-2 恒溫水浴鍋（青島聚創(chuàng)環(huán)保集團有限公司）；島津LC-6AD 型半制備液相色譜儀（檢測器SPD-20A）；CAPCELL PAK C18MGⅡ半制備色譜柱（10 mm×250 mm，5 μm）；6550Q-TOF質(zhì)譜儀（美國Agilent Technologies）；Sephadex LH-20（GE 公司）；薄層色譜硅膠GF254、柱色譜用硅膠（青島海洋化工廠）；色譜甲醇和乙腈（阿德馬斯試劑公司）；甲醇、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯等均為分析純（天力化學(xué)試劑有限公司），水為娃哈哈純凈水。

八角蓮藥材于2019年10月購于陜西省安康市，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院王薇教授鑒定為小檗科Berberidaceae 鬼臼屬Dysosma植物八角蓮Dysosma versipellis（Hance）M.Cheng ex Ying 的根及根莖，標本（DV2019-1）保存于陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥標本館。

2 提取分離

取干燥的八角蓮根及根莖7.2 kg，粉碎后以90%乙醇回流提取3 次，各2 h、1.5 h 和1 h。減壓回收乙醇，干燥至浸膏，分散于水中，分別用石油醚、乙酸乙酯和水飽和正丁醇萃取3 次，得到石油醚部位42.1 g，乙酸乙酯部位206.3 g 和正丁醇部位70.7 g。取乙酸乙酯部位200 g，經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫（100∶0、70∶1、40∶1、20∶1、15∶1、8∶1、4∶1 和2∶1）TLC 檢測合并后，得到F1 ～F9 共9 個組分。F2（8.3 g），經(jīng)葡聚糖凝膠柱色譜分離，甲醇洗脫，得到化合物1（10.2 mg）；F4（15.3 g）經(jīng)葡聚糖凝膠柱色譜，甲醇洗脫，得到化合物6（122.4 mg）。F5（19.6 g）經(jīng)葡聚糖凝膠柱色譜分離，甲醇洗脫，TLC 檢測合并后，得到F5-1 ～F5-5 共5個組分。F5-2（1.7 g）經(jīng)半制備HPLC 分離，甲醇-水（35∶65）洗脫，流速1 mL·min－1，得到化合物2（47.5 mg，tR＝50.3 min）；F5-3（0.7 g）經(jīng)半制備HPLC 分離，甲醇-水（39∶61）洗脫，流速1 mL·min－1，得到化合物4（13.4 mg，tR＝31.6 min）；F6（18.0 g）經(jīng)葡聚糖凝膠柱色譜分離，甲醇洗脫，TLC 檢測合并后，得到F6-1 ～F6-7 共7個組分。F6-3（0.4 g）經(jīng)半制備液相色譜分離，甲醇-水（28∶72）洗脫，流速1.5 mL·min－1，得到化合物5（16.9 mg，tR＝41.7 min），F(xiàn)6-5（0.2 g）經(jīng)半制備HPLC 分離，甲醇-水（25∶75）洗脫，流速1.0 mL·min－1，得到化合物7（8.0 mg，tR＝18.4 min）和化合物8（5.6 mg，tR＝25.6 min）；F7（9.5 g）經(jīng)葡聚糖凝膠柱色譜分離，甲醇洗脫，TLC 檢測合并后，得到F7-1 ～F7-4 共4 個組分。F7-1 經(jīng)半制備HPLC 分離，甲醇-水（16∶84）洗脫，流速2 mL·min－1，得到化合物3（7.2 mg，tR＝14.7 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，ESI-MSm/z395.1 [M ＋H]＋。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：7.52（1H，s，H-5），7.04（1H，s，H-8），5.52（2H，s，H-11），6.80（1H，d，J＝1.7 Hz，H-2'），6.93（1H，d，J＝8.0 Hz，H-5'），6.76（1H，dd，J＝8.0，1.7 Hz，H-6'），6.03（2H，s，-OCH2O-），3.79（3H，s，4-OCH3），4.05（3H，s，6-OCH3），4.11（3H，s，7-OCH3）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：134.7（C-1），119.5（C-2），124.7（C-3），147.7（C-4），100.8（C-5），151.8（C-6），150.6（C-7），106.4（C-8），126.0（C-9），130.7（C-10），66.8（C-11），169.8（C-12），128.8（C-1'），111.0（C-2'），147.7（C-3'，4'），108.4（C-5'），123.9（C-6'），101.4（-OCH2O-），59.9（4-OCH3），56.3（6-OCH3），56.0（7-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[9]基本一致，故鑒定化合物1 為爵床脂素A。

化合物2：白色粉末，ESI-MSm/z543.1 [M ＋H]＋。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：8.18（1H，s，H-5），7.00（1H，s，H-8），5.75（1H，d，J＝15.2 Hz，H-11α），5.44（1H，d，J＝15.2 Hz，H-11β），6.91（1H，d，J＝1.6 Hz，H-2'），7.03（1H，d，J＝8.4 Hz，H-5'），6.81（1H，dd，J＝8.4，1.6 Hz，H-6'），6.13（2H，s，-OCH2O-），3.67（3H，s，6-OCH3），3.95（3H，s，7-OCH3），4.74（1H，d，J＝7.1 Hz，H-1''），3.20 ～4.02（4H，m，H-2'' ～H5''），3.78（1H，dd，J＝10.5，2.0 Hz，H-6''），3.45（1H，dd，J＝10.5，4.2 Hz，H-6''）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：118.8（C-1），123.6（C-2），129.5（C-3），126.5（C-4），101.1（C-5），150.0（C-6），151.5（C-7），111.8（C-8），129.7（C-9），134.7（C-10），67.4（C-11），169.2（C-12），144.9（C-1'），105.5（C-2'），146.9（C-3'），146.9（C-4'），108.0（C-5'），123.6（C-6'），101.7（-OCH2O-），55.2（6-OCH3），55.9（7-OCH3），101.1（C-1''），73.8（C-2''），76.4（C-3''），70.0（C-4''），77.3（C-5''），61.3（C-6''）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[10]基本一致，故鑒定化合物2為山荷葉素葡萄糖苷。

化合物3：白色粉末，ESI-MSm/z675.2 [M ＋H]＋。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：8.20（1H，s，H-5），6.98（1H，s，H-8），5.67（1H，d，J＝15.2 Hz，H-11α），5.42（1H，d，J＝15.2 Hz，H-11β），6.91（1H，d，J＝1.5 Hz，H-2'），7.02（1H，d，J＝7.8 Hz，H-5'），6.80（1H，dd，J＝1.5，7.8 Hz，H-6'），6.13（2H，s，-OCH2O-），3.95（3H，s，6-OCH3），3.67（3H，s，7-OCH3），4.74（1H，d，J＝7.6 Hz，H-1''），3.18 ～4.04（6H，m，H-2'' ～H-6''），4.16（1H，d，J＝6.4 Hz，H-1'''），3.27 ～3.62（5H，m，H-2''' ～H-6'''）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：134.8（C-1），119.1（C-2），126.5（C-3），145.0（C-4），101.8（C-5），151.4（C-6），149.9（C-7），105.0（C-8），129.9（C-9），119.1（C-10），67.2（C-11），169.2（C-12），128.3（C-1'），110.0（C-2'），146.8（C-3'），146.7（C-4'），107.9（C-5'），123.5（C-6'），101.1（-OCH2O-），55.9（6-OCH3），55.2（7-OCH3），105.0（C-1''），73.5（C-2''），75.1（C-3''），70.0（C-4''），76.0（C-5''），67.4（C-6''），103.2（C-1'''），70.3（C-2'''），72.5（C-3'''），67.2（C-4'''），64.8（C-5'''）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[11]基本一致，故鑒定化合物3 為arabelline。

化合物4：白色粉末，ESI-MSm/z523.3 [M ＋H]＋，[α]20D－8.6（c0.14，MeOH）。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：4.50（1H，d，J＝4.0 Hz，H-1），3.34（1H，m，H-2），2.87（1H，m，H-3），5.07（1H，d，J＝9.0 Hz，H-4），7.35（1H，s，H-5），6.51（1H，s，H-8），4.64（1H，dd，J＝8.3，6.4 Hz，H-11α），4.17（1H，dd，J＝8.3，6.4 Hz，H-11β），6.32（2H，s，H-2'，5'），5.99（2H，s，-OCH2O-），3.68（9H，s，3'，4'，5'-OCH3），4.30（1H，d，J＝7.1 Hz，H-1''），3.26 ～4.02（4H，m，H-2''，3''，4''，5''），3.89（1H，dd，J＝11.1，2.1 Hz，H-6''），3.75（1H，dd，J＝11.1，4.3 Hz，H-6''）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：43.1（C-1），44.3（C-2），38.6（C-3），77.1（C-4），109.0（C-5），146.9（C-6），146.6（C-7），108.1（C-8），131.8（C-9），131.3（C-10），70.0（C-11），174.5（C-12），136.4（C-1'），108.3（C-2'，6'），152.0（C-3'，5'），136.4（C-4'），101.1（-OCH2O-），55.8（3'，5'-OCH3），60.0（4'-OCH3），101.8（C-1''），73.4（C-2''），77.1（C-3''），70.0（C-4''），76.6（C-5''），61.1（C-6''）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[12]基本一致，故鑒定化合物4 為鬼臼毒素-4-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物5：無色膠狀物，ESI-MSm/z523.3 [M ＋H]＋，[α]20D－30.6（c0.23，MeOH）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：6.80（1H，overlapped，H-2），6.96（1H，d，J＝7.9 Hz，H-5），6.65（1H，overlapped，H-6），4.85（1H，m，H-7），2.44（1H，m，H-8），3.68（2H，m，H-9），6.80（1H，overlapped，H-2'），6.68（1H，d，J＝7.7 Hz，H-5'），6.66（1H，overlapped，H-6'），3.15（1H，dd，J＝4.9，13.4 Hz，H-7'a），2.57（1H，m，H-7'b），2.84（1H，m，H-8'），3.86（1H，d，J＝6.9 Hz，H-9'a），3.56（1H，m，H-9'b），4.67（1H，d，J＝7.4 Hz，H-1''），3.20（1H，m，H-2''），3.17（1H，m，H-3''），3.16（1H，m，H-4''），3.04（1H，m，H-5''），3.55（1H，m，H-6''a），3.37（1H，m，H-6''b）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：134.8（C-1），110.2（C-2），148.8（C-3），145.9（C-4），115.5（C-5），118.1（C-6），81.7（C-7），52.4（C-8），58.7（C-9），134.7（C-1'），112.9（C-2'），147.4（C-3'），144.7（C-4'），115.1（C-5'），120.5（C-6'），32.0（C-7'），41.9（C-8'），71.8（C-9'），100.1（C-1''），73.2（C-2''），77.0（C-3''），69.7（C-4''），76.9（C-5''），60.7（C-6''），55.6（3-OCH3），55.5（3'-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[13]基本一致，故鑒定化合物5 為落葉松樹脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物6：黃色粉末，ESI-MSm/z303.1 [M ＋H]＋。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：12.51（1H，br s，5-OH），6.20（1H，d，J＝1.7 Hz，H-6），6.42（1H，d，J＝1.7 Hz，H-8），7.69（1H，d，J＝1.9 Hz，H-2'），6.89（1H，d，J＝8.3 Hz，H-5'），7.54（1H，dd，J＝1.9，8.4 Hz，H-6'）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：147.2（C-2），136.2（C-3），176.3（C-4），161.2（C-5），98.6（C-6），164.3（C-7），93.8（C-8），156.6（C-9），103.5（C-10），122.4（C-1'），115.5（C-2'），147.2（C-3'），145.5（C-4'），115.5（C-5'），120.4（C-6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[14]基本一致，故鑒定化合物6 鑒定為槲皮素。

化合物7：黃色粉末，ESI-MS：m/z449.1 [M ＋H]＋。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.09（1H，d，J＝1.6 Hz，H-6），6.25（1H，d，J＝1.6 Hz，H-8），8.02（2H，d，J＝8.4 Hz，H-2'，6'），6.88（2H，d，J＝8.4 Hz，H-3'，5'），5.11（1H，d，J＝7.4 Hz，H-1''），3.20 ～3.80（6H，H-2''～H-6''）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：158.5（C-2），135.5（C-3），178.9（C-4），161.9（C-5），102.0（C-6），162.9（C-7），96.3（C-8），158.5（C-9），104.9（C-10），123.0（C-1'），132.3（C-2'，C-6'），116.3（C-3'，C-5'），159.1（C-4'），104.2（C-1''），75.9（C-2''），78.3（C-3''），71.5（C-4''），78.5（C-5''），62.8（C-6''）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[15]基本一致，故鑒定化合物7 為山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物8：黃色粉末，ESI-MS：m/z449.1 [M ＋H]＋。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：12.54（1H，br s，5-OH），6.39（1H，d，J＝1.8 Hz，H-6），6.68（1H，d，J＝1.8 Hz，H-8），7.34（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2'），7.28（1H，d，J＝8.4 Hz，H-5'），7.30（1H，dd，J＝8.4，2.0 Hz，H-6'），5.29（1H，br s，Rha-H1），3.13 ～3.99（4H，m，Rha-H2 ～H5），0.83（3H，d，J＝6.1 Hz，Rha-H6）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：156.9（C-2），134.9（C-3），178.4（C-4），161.5（C-5），98.4（C-6），161.5（C-7），92.7（C-8），156.6（C-9），105.5（C-10），121.1（C-1'），116.2（C-2'），149.0（C-3'），145.7（C-4'），115.9（C-5'），121.1（C-6'），102.3（C-1''），71.7（C-2''），70.5（C-3''），70.8（C-4''），71.1（C-5''），18.0（C-6''）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[16]基本一致，故鑒定化合物8 為槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷。

4 討論

本研究從八角蓮中共分離鑒定了8 個化合物，其中，5 個木脂素類化合物和3 個黃酮類化合物，化合物1、3、5 和8 為首次從八角蓮中分離鑒定。查閱文獻后發(fā)現(xiàn)關(guān)于八角蓮的系統(tǒng)化學(xué)成分研究較少，本研究進一步明確了八角蓮的化學(xué)成分，為其后續(xù)藥理活性研究奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。八角蓮中報道的主要成分為鬼臼毒素類木脂素，該類物質(zhì)具有抗腫瘤、抗病毒等多種生理活性，八角蓮可作為該類化合物的重要來源，值得后續(xù)繼續(xù)深入研究。