基于UPLC特征圖譜結(jié)合多模式識(shí)別和色度值的槐角炮制前后差異研究

鄧?yán)罴t，王壽富，陳仕妍，鄺 敏，黃貴發(fā)，林偉雄，張志鵬

基于UPLC特征圖譜結(jié)合多模式識(shí)別和色度值的槐角炮制前后差異研究

鄧?yán)罴t，王壽富，陳仕妍，鄺 敏，黃貴發(fā)，林偉雄*，張志鵬

廣東一方制藥有限公司，廣東省中藥配方顆粒企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 佛山 528244

測(cè)定槐角炮制前后的超高效液相色譜（UPLC）特征圖譜和色度值，結(jié)合不同模式識(shí)別方法比較槐角炮制前后的差異性，為槐角和蜜槐角的質(zhì)量控制及評(píng)價(jià)提供參考。采用UPLC法對(duì)槐角炮制前后樣品進(jìn)行測(cè)定，按《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》對(duì)色譜圖進(jìn)行匹配生成槐角炮制前后的UPLC特征圖譜，并對(duì)炮制前后的色度值（、、）進(jìn)行測(cè)定，通過相似度分析、對(duì)照品比對(duì)、方差分析、聚類分析、主成分分析（principal component analysis，PCA）和正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）對(duì)槐角炮制前后進(jìn)行多模式識(shí)別研究。建立了槐角炮制前后的UPLC特征圖譜，槐角和蜜槐角分別確定了23、24個(gè)共有峰，指認(rèn)2、15、16、20、21號(hào)峰為沒食子酸、蘆丁、染料木苷、槲皮苷、槐角苷，炮制后新增成分24號(hào)峰為5-羥甲基糠醛；相似度分析結(jié)果顯示槐角炮制前后相似度均大于0.98，聚類分析結(jié)果顯示槐角炮制前后區(qū)分不明顯，PCA可以將槐角和蜜槐角大致分為2類，OPLS-DA分析可將槐角和蜜槐角明顯區(qū)分為2類，且結(jié)果顯示1、2、10、22、23、24號(hào)峰是引起槐角和蜜槐角間成分差異的主要標(biāo)志性成分，與方差分析結(jié)果一致；色度值Δ范圍為5～13，炮制前后色差可被肉眼識(shí)別。建立的多指標(biāo)特征圖譜和色度值鑒別方法對(duì)槐角藥材及其炮制品的質(zhì)量控制及整體性評(píng)價(jià)具有重要意義。

槐角；蜜槐角；UPLC特征圖譜；方差分析；沒食子酸；蘆?。蝗玖夏拒?；槲皮苷；槐角苷；5-羥甲基糠醛

槐角始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，為豆科植物槐L.的干燥成熟果實(shí)，味苦，性寒，歸肝、大腸經(jīng)，具有清熱瀉火、涼血止血等功效。用于腸熱便血、痔腫出血、肝熱頭痛、眩暈?zāi)砍嗟炔“Y[1]?，F(xiàn)代研究證明，槐角中主要含有黃酮、異黃酮、生物堿、三萜皂苷、氨基酸和磷脂類等多種化學(xué)成分[2-4]，其中以黃酮和異黃酮化合物含量最高[5]，主要有槐角苷、槐角雙苷、染料木苷、染料木素、蘆丁等[6-8]。槐角生品清熱涼血力較強(qiáng)，用于血熱妄行出血證，肝火目赤、肝熱頭痛、眩暈、陰瘡濕癢等癥；亦用于腸熱便血和痔腫出血。槐角炮制后苦寒之性減弱，具有緩和藥性兼具潤腸通便的作用，用于便血、痔血，尤其適用于脾胃不健或兼有便秘的患者[9-10]。

目前，關(guān)于槐角和蜜槐角的研究多集中于炮制工藝及染料木苷、槐角苷、蘆丁等黃酮類成分的含量測(cè)定上[11-14]，均以單個(gè)或多個(gè)含量指標(biāo)表征槐角炮制前后的差異性，但不足以作為全面而準(zhǔn)確地反映槐角炮制前后差異的主要變量指標(biāo)，有必要對(duì)槐角炮制前后化學(xué)成分進(jìn)行全面系統(tǒng)的分析。本研究采用超高效液相色譜法建立槐角炮制前后UPLC特征圖譜，并運(yùn)用方差分析、聚類分析、主成分分析（principal component analysis，PCA）與正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）等多模式識(shí)別方法對(duì)UPLC特征圖譜中多指標(biāo)變量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，同時(shí)增加飲片粉末色度值（、、）的變化加以輔助分析，可有效區(qū)分槐角炮制前后的主要共性和差異性成分，為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與儀器

1.1 儀器

Waters H-Class型超高效液相色譜儀（美國Waters公司）；ME204E型萬分之一天平、XP26型百萬分之一天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；KQ-500DE型數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；111B型二兩裝高速中藥粉碎機(jī)（浙江瑞安市永歷制藥機(jī)械有限公司）；MiliQ Direct 8型超純水機(jī)（德國Merck有限公司）。

1.2 藥品與試劑

5-羥甲基糠醛（質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.20%，批號(hào)111626-201912）、沒食子酸（質(zhì)量分?jǐn)?shù)90.8%，批號(hào)110831-201906）、蘆?。ㄙ|(zhì)量分?jǐn)?shù)91.7%，批號(hào)100080-201811），染料木苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.9%，批號(hào)111709-201702）、槲皮苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)90.6%，批號(hào)111538-201606）、槐角苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.6%，批號(hào)111695-201703）對(duì)照品均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜級(jí)，其余試劑為分析純，水為超純水。

16批槐角藥材（編號(hào)H1～H16）經(jīng)廣東一方制藥有限公司魏梅主任藥師鑒定本品為豆科植物槐L.的干燥成熟果實(shí)，相應(yīng)的16批蜜槐角（編號(hào)M1～M16）為實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格按照《中國藥典》2020年版一部槐角項(xiàng)下蜜槐角炮制規(guī)定[1]進(jìn)行炮制，來源信息見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC BEH Shield RP18柱（150 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相為乙腈（A）- 0.4%醋酸溶液（B），梯度洗脫，0～2 min，2% A；2～6 min，2%～5% A；6～8 min，5%～15% A；8～18 min，15%～22% A；18～20 min，22%～30% A；20～29 min，30%～40% A；29～30 min，40%～2% A；檢測(cè)波長282 nm；體積流量0.2 mL/min；柱溫25 ℃；進(jìn)樣量1 μL。

表1 16批槐角和蜜槐角來源信息

Table 1 Source information of 16 batches of Sophorae Fructus and its processed products

槐角編號(hào)蜜槐角編號(hào)產(chǎn)地槐角編號(hào)蜜槐角編號(hào)產(chǎn)地 H1M1安徽H9M9河北 H2M2山西H10 M10河北 H3M3安徽H11 M11河北 H4M4安徽H12 M12山東 H5M5安徽H13 M13河北 H6M6安徽H14 M14河北 H7M7安徽H15 M15山東 H8M8山東H16 M16河北

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取5-羥甲基糠醛、沒食子酸、蘆丁、染料木苷、槲皮苷和槐角苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成分別含30.85 μg/mL 5-羥甲基糠醛、47.35 μg/mL沒食子酸、55.07 μg/mL蘆丁、57.39 μg/mL染料木苷、50.10 μg/mL槲皮苷和53.04 μg/mL槐角苷的混合對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取樣品粉末（過三號(hào)篩）約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率300 W，頻率10 kHz）處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，以50%甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，采用0.22 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 精密度試驗(yàn) 精密稱取編號(hào)為M9的樣品1份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。選取峰面積較大且為槐角指標(biāo)性成分[1]的21號(hào)峰槐角苷峰作為參照峰，計(jì)算各特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.01%～0.06%，相對(duì)峰面積的RSD為0.02%～2.19%。

2.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取編號(hào)為M9的樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于室溫放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以21號(hào)峰槐角苷為參照峰，計(jì)算各特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.01%～0.16%，相對(duì)峰面積的RSD為0.11%～3.76%。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取編號(hào)為M9的樣品6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以21號(hào)峰槐角苷為參照峰，計(jì)算各特征峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.01%～0.09%，相對(duì)峰面積的RSD為0.01%～4.47%。

2.5 UPLC特征圖譜研究

2.5.1 UPLC特征圖譜的建立 按“2.3”項(xiàng)下方法分別制備16批槐角和蜜槐角供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。采用國家藥典委員會(huì)頒布的《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》對(duì)色譜圖進(jìn)行匹配，建立槐角和蜜槐角的特征圖譜。分別以H1和M1圖譜作為參照?qǐng)D譜，設(shè)置時(shí)間窗寬度為0.1 min，通過多點(diǎn)校正、全譜峰匹配分別生成16批槐角和蜜槐角的共有特征圖譜，同時(shí)采用中位數(shù)法分別生成對(duì)照特征圖譜。16批槐角共有特征圖譜中共標(biāo)定了23個(gè)共有峰，16批蜜槐角中共標(biāo)定了24個(gè)共有峰，其中24號(hào)峰為槐角炮制后生成。共有特征圖譜見圖1，對(duì)照特征圖譜見圖2。

圖1 槐角(A)和蜜槐角(B) 的UPLC特征圖譜

圖2 槐角(a) 和蜜槐角(b) 的對(duì)照特征圖譜

2.5.2 色譜峰的指認(rèn) 取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，見圖3。通過對(duì)比圖3與圖2，指認(rèn)出槐角和蜜槐角UPLC特征圖譜中的2號(hào)峰為沒食子酸、15號(hào)峰為蘆丁、16號(hào)峰為染料木苷、20號(hào)峰為槲皮苷、21號(hào)峰為槐角苷，蜜槐角UPLC特征圖譜中的24號(hào)峰為5-羥甲基糠醛。

2.5.3 UPLC特征圖譜的相似度評(píng)價(jià) 根據(jù)《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2012版）分析軟件，計(jì)算每批樣品特征圖譜相似度，每批槐角與其對(duì)照特征圖譜相似度分別為0.993、0.997、0.996、0.999、0.997、0.997、0.996、0.999、0.998、0.996、0.997、0.999、0.988、0.999、0.999、0.988，蜜槐角與其對(duì)照特征圖譜相似度分別為0.995、0.997、0.997、0.998、0.997、0.998、0.996、0.998、0.998、0.998、0.999、1.000、0.987、0.998、1.000、0.987，表明不同批次槐角與蜜槐角質(zhì)量一致性較好；每批槐角與蜜槐角對(duì)照特征指紋圖譜相似度分別為0.993、0.997、0.996、0.999、0.997、0.997、0.996、0.998、0.998、0.995、0.996、0.998、0.988、0.998、0.998、0.988，每批蜜槐角與槐角對(duì)照指紋圖譜相似度分別為0.995、0.996、0.996、0.997、0.996、0.996、0.996、0.998、0.998、0.998、0.998、0.999、0.986、0.998、0.999、0.986，同批次槐角與蜜槐角相似度分別為1.000、0.997、0.998、0.999、0.999、0.998、0.999、0.999、0.999、0.998、0.999、0.998、0.999、0.999、0.998、0.999，且槐角對(duì)照特征圖譜與蜜槐角對(duì)照特征圖譜相似度為0.999，相似度均高于0.98，根據(jù)特征圖譜相似度結(jié)果，完全無法區(qū)分槐角與蜜槐角。

2-沒食子酸 15-蘆丁 16-染料木苷 20-槲皮苷 21-槐角苷 24-5-羥甲基糠醛

2.6 槐角與蜜槐角UPLC特征圖譜多元統(tǒng)計(jì)分析

2.6.1 方差分析 采用SPSS 20.0軟件對(duì)16批槐角和蜜槐角共有特征峰的單位峰面積進(jìn)行單因素方差分析。結(jié)果顯示，槐角與蜜槐角的2、10、23號(hào)峰的單位峰面積差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05），1、22號(hào)峰的單位峰面積差異有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.01）。經(jīng)過炮制后，1、2號(hào)峰的單位峰面積顯著增加，10、22、23號(hào)峰的單位峰面積顯著下降，其余各特征峰單位峰面積無顯著變化，24號(hào)峰在16批槐角中未檢出，經(jīng)炮制后產(chǎn)生，增長率為100%。16批槐角和蜜槐角特征圖譜共有峰單位峰面積的方差分析結(jié)果見表2。

2.6.2 聚類分析 聚類分析是一種無監(jiān)督模式識(shí)別方法，將槐角和蜜槐角樣本數(shù)據(jù)在沒有先驗(yàn)知識(shí)的前提下，基于樣品所表現(xiàn)的各特征峰單位峰面積的變量特征，按照相似度進(jìn)行歸類，可直觀地得到槐角和蜜槐角的樣本分類結(jié)果[15]。以24個(gè)共有峰單位峰面積為變量，采用Origin 2018軟件以Ward連接法結(jié)合Euclidean距離進(jìn)行聚類分析。結(jié)果顯示（圖4），槐角和蜜槐角樣品無法較好地聚類，其中H1與M1、H5與M5、H7與M7、H8與M8樣品完全聚在一起，其余槐角樣品、蜜槐角樣品部分批次可分別聚在一起，表明槐角和蜜槐角樣品相似度高，區(qū)分不明顯。

2.6.3 PCA與OPLS-DA分析 PCA是一種無監(jiān)督的多元統(tǒng)計(jì)分析方法，其主要是通過數(shù)學(xué)降維的原理，從槐角和蜜槐角原數(shù)據(jù)中提取幾個(gè)具代表的綜合性指標(biāo)，根據(jù)貢獻(xiàn)率大小代替多個(gè)原始變量，因此在相似度分析的基礎(chǔ)上，可進(jìn)一步采用主成分分析對(duì)槐角炮制前后進(jìn)行比較[15-16]。

以24個(gè)共有峰單位峰面積為變量，采用SIMCA（14.0）軟件對(duì)槐角和蜜槐角樣品進(jìn)行PCA分析，結(jié)果提取到6個(gè)特征值大于1的主成分（PC），可用于反映槐角和蜜槐角UPLC特征圖譜91.75%以上信息，其中PC1貢獻(xiàn)率為45.29%，貢獻(xiàn)率最大，PC2貢獻(xiàn)率為16.30%，PC3貢獻(xiàn)率為12.09%，見表3。由前3個(gè)主成分建立坐標(biāo)系，得到槐角和蜜槐角的PCA得分圖（圖5），由圖可見，在相似度大于0.9的基礎(chǔ)上，槐角和蜜槐角樣品能夠分別集中地聚在一起，說明提取到的前3個(gè)主成分已能反映出槐角炮制前后的主要特征，可區(qū)分槐角和蜜槐角樣品。

PCA可以直觀地區(qū)分出槐角和蜜槐變量間的差異程度，但為更好地觀察2組間的差異，基于PCA結(jié)果，采用監(jiān)督模式識(shí)別法進(jìn)行兩組間OPLS-DA分析，繪制OPLS-DA模型得分圖，計(jì)算出對(duì)差異貢獻(xiàn)較大的因素，尋找槐角炮制前后主要的差異成分。通過OPLS-DA得分圖發(fā)現(xiàn)，槐角與蜜槐角明顯集中分布在2個(gè)象限，槐角在模型得分圖的左側(cè)，蜜槐角在右側(cè)，與PCA分析結(jié)果較為一致，表明其化學(xué)成分具有一定差異性。

表2 槐角和蜜槐角特征圖譜共有峰單位峰面積方差分析結(jié)果()

與槐角比較*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01

圖4 槐角和蜜槐角聚類分析樹狀圖

表3 特征值和累積方差貢獻(xiàn)率

Table 3 Eigenvalues and cumulative variance contribution rates

成分特征值方差貢獻(xiàn)率/%累積方差貢獻(xiàn)率/% 110.86945.28945.289 2 3.91316.30361.592 3 2.90112.08973.681 4 1.674 6.97480.654 5 1.562 6.50887.162 6 1.101 4.58691.748

圖5 槐角和蜜槐角的PCA分析得分圖

OPLS-DA模型中的擬合參數(shù)2＝0.791，2＝0.920，模型預(yù)測(cè)參數(shù)（2）＝0.842，均大于0.5，表明所建模型穩(wěn)定且預(yù)測(cè)能力較強(qiáng)[15]。以模型變量投影（VIP）值為指標(biāo)對(duì)引起槐角和蜜槐角組間差異的成分進(jìn)行分析，篩選貢獻(xiàn)較大的6個(gè)變量（以VIP值＞1為標(biāo)準(zhǔn)），分別為1號(hào)峰（VIP＝1.932 7）、24號(hào)峰（VIP＝1.901 8）、22號(hào)峰（VIP＝1.417 9）、10號(hào)峰（VIP＝1.332 5）、23號(hào)峰（VIP＝1.128 9）和2號(hào)峰（VIP＝1.120 4），提示上述6個(gè)成分是引起槐角和蜜槐角間成分差異的主要標(biāo)志性成分，其余峰VIP值小于1，對(duì)樣品的區(qū)分影響較小，與方差分析結(jié)果一致。見圖6、7。

2.7 槐角與蜜槐角色度值分析

取16批槐角和蜜槐角粉末適量，壓制于載玻片上，壓制厚度約為1 mm，以國際照明委員會(huì)認(rèn)可的D65光源作為光源，白色作為背景，對(duì)粉末圖像進(jìn)行色彩采集，采用Adobe Photoshop CS6軟件讀取飲片粉末色度值（、、），平行3次，取平均值，色度值見表4。Lab色彩模式中L值表示物體明度指數(shù)，（紅-綠軸）、（黃-藍(lán)軸）值代表色品指數(shù)，樣品顏色可用總色值（）表達(dá)。

圖6 槐角和蜜槐角的OPLS-DA得分圖

圖7 槐角和蜜槐角24個(gè)共有峰的VIP值

＝(2＋2＋2)1/2

明度差（Δ）與色差（Δ）用于表達(dá)生品到炮制品的顏色變化，當(dāng)Δ為負(fù)值代表樣品顏色明度低、顏色深，為正值則相反；Δ值越大，代表炮制品與生品色度值相差越大，Δ＞3.5時(shí)，其色差可被肉眼識(shí)別。由表4可知，Δ中正負(fù)值均有，無法明顯區(qū)分16批次的生品與炮制品，炮制品中整體上較生品明度下降，顏色加深；Δ范圍為5～13，即色差可被肉眼識(shí)別，可用于輔助區(qū)分同批次槐角生品與炮制品。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)考察了甲醇、70%甲醇、50%甲醇、50%乙醇、70%乙醇等提取溶劑，結(jié)果表明，選擇乙醇系統(tǒng)作為提取溶劑時(shí)，1和24號(hào)峰5-羥甲基糠醛的色譜峰峰形內(nèi)陷，以甲醇作為提取溶劑系統(tǒng)且以50%甲醇作為提取溶劑時(shí)各色譜峰的分離效果好且響應(yīng)值高，故選擇50%甲醇作為提取溶劑；同時(shí)考察了不同柱溫（25、30、35 ℃）及不同體積流量（0.2、0.3 mL/min）條件下樣品的UPLC特征圖譜。結(jié)果發(fā)現(xiàn)柱溫25 ℃、體積流量0.2 mL/min時(shí)，樣品分離度較高、峰形對(duì)稱，能夠滿足分析要求。

本研究從槐角和蜜槐角共有特征圖譜中直觀得知炮制后1、2號(hào)峰的峰面積明顯增加，經(jīng)方差分析證實(shí)1、2號(hào)峰的增加具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，24號(hào)峰5-羥甲基糠醛為槐角炮制后產(chǎn)生?；苯桥谥魄昂蟾髋螛悠烽g的相似度均大于0.98，依據(jù)相似性進(jìn)行無監(jiān)督模式聚類分析和PCA，聚類分析顯示槐角炮制前后區(qū)分不明顯，PCA分析提取前3個(gè)主成分時(shí)可以將槐角和蜜槐角大致分為2類，表明在各樣品相似度極高的基礎(chǔ)上通過化學(xué)計(jì)量學(xué)方法進(jìn)行分析，可有效區(qū)分槐角和蜜槐角樣品間的細(xì)微差別。通過監(jiān)督模式識(shí)別法進(jìn)行2組間OPLS-DA分析，能將原始數(shù)據(jù)中與因變量不相關(guān)的信息去除，提高類內(nèi)聚集性，使類與類之間的差異性得到最大化，結(jié)果顯示槐角和蜜槐角明顯區(qū)分為2類，且1、2、10、22、23、24號(hào)峰是引起槐角和蜜槐角間成分差異的主要標(biāo)志性成分，與方差分析結(jié)果一致。在外觀顏色上通過色差Δ＞3.5，可輔助識(shí)別槐角和蜜槐角?；瘜W(xué)成分是中藥發(fā)揮療效的物質(zhì)基礎(chǔ)，槐角炮制前后所含各種成分信息無法直觀地通過個(gè)體之間的差異展現(xiàn)，本研究所采用的多模式識(shí)別結(jié)合UPLC特征圖譜和色度值分析模式可區(qū)分槐角和蜜槐角樣品間的細(xì)微差別，用以解釋測(cè)量值與槐角炮制前后體系狀態(tài)之間的聯(lián)系，可為槐角和蜜槐角質(zhì)量整體性評(píng)價(jià)提供依據(jù)，也為其他炮制品種的研究提供參考。

表4 槐角和蜜槐角色度值數(shù)據(jù)

Table 4 Chromatic value data of Sophorae Fructus and its processed products

批次槐角色度值蜜槐角色度值差值 LabELabEΔLΔaΔbΔE 1403274953 32960 130113 2442295244 83155 162 6 3403274942113355 28610 4347234238 92848 435 7 5368274640103051 423 6 6412274942 93153 174 8 7414244739102547 ?261 6 8510305956 43064 430 5 9434285143 93153 053 6 10445285245 93156 244 5 11435295243112953 060 6 12464275441102951 ?562 8 13435305341113253 ?252 6 14434285143 93153 053 6 15464275441102951 ?562 8 16435305341113253 ?252 6

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Comparative study on UPLC characteristic chromatogram combined with multiple chemical pattern recognition and chromatic value ofand its processed products

DENG Li-hong, WANG Shou-fu, CHEN Shi-yan, KUANG Min, HUANG Gui-fa, LIN Wei-xiong, ZHANG Zhi-peng

Guangdong Provincial Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Formula Granule, Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd., Foshan 528244, China

To determine Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC) characteristic chromatogram and chromatic value ofand its processed products, and to compare their difference according to multiple chemical pattern recognition method, and to provide reference for quality control and evaluation of Huaijiao () and its processed products.and its processed products were determined by UPLC. According to the(2012 edition), the chromatograms were matched to generate the UPLC characteristic chromatogram ofand its processed products, and the chromatic value (,,) before and after fried with honey was determined. The chromatograms ofand its processed products were analyzed according to multiple chemical pattern recognition by variance analysis, cluster analysis, principal component analysis (PCA) and orthogonal partial least squares discriminant analysis (OPLS-DA).UPLC characteristic chromatogram ofand its processed products were established respectively, and 23 common peaks were confirmed for; 24 common peaks were confirmed forstir-fried with honey. No. 2, 15, 16, 20, 21 peaks were identified as gallic acid, rutin, genistin, quercitrin and sophoricoside respectively, and the new component No. 24 peaks were identified as 5-hydroxymethylfurfural after fried with honey. The results of similarity analysis showed that the similarity ofand its processed products was greater than 0.98. Cluster analysis showed that there were only a small part of distinctions ofand its processed products, and PCA can roughly divideand its processed products into two categories respectively. PLS-DA can distinguishand its processed obviously, and showed that No. 1, 2, 10, 22, 23, and 24 peaks were the main marker components that caused the differences of chemical components ofand its processed products, which is consistent with the results of variance analysis. The ΔE range of chromatic value was 5—13, and the color difference ofand its processed products can be recognized by the naked eye.The characteristic chromatogram of multiple indicators and chromatic value identification method established in this study has vital significance for to the quality control and overall evaluation ofand its processed products.

;stir-fried with honey; UPLC characteristic chromatogram; variance analysis; cluster analysis; gallic acid; rutin; genistin; quercitrin; sophoricoside; 5-hydroxymethylfurfural

R286.2

A

0253 - 2670(2022)21 - 6881 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.21.027

2022-03-03

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2018B030323004）；“廣東特支計(jì)劃”科技創(chuàng)業(yè)領(lǐng)軍人才項(xiàng)目（2017TY04R197）

鄧?yán)罴t（1995—），女，學(xué)士，從事中藥飲片及配方顆粒工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。Tel: (0757)85128603 E-mail: denglihongyz@163.com

林偉雄Tel: (0757)85128603 E-mail: linwx2020@163.com

[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]