酸棗仁泡騰片的制備及藥效評價

王澤龍 徐建豪 吉訓娟 譚玉瑩 李傳樂 張巳奇 何 穎

（吉林農業(yè)科技學院中藥學院 吉林市 132109）

由于現代社會生活節(jié)奏加快，外界壓力的逐漸增加，睡眠障礙已經成為困擾現代人的普遍問題[1]。中藥作為治療失眠的傳統手段，其臨床效果為人們所認可，而其中的酸棗仁湯更是因其顯著的睡眠改善效果獲得大量睡眠障礙人群的青睞[2]。

酸棗仁湯為漢代張仲景的《金匱要略·血痹虛勞病》中的經典方。各種藥物的配伍使用不僅可以滋養(yǎng)肝臟和血液以舒緩心靈，還可以清除體內熱量消除煩惱，滋養(yǎng)血液和安撫神經。

目前酸棗仁湯的研究主要集中于傳統湯劑，國家食品藥品監(jiān)督管理總局批準的酸棗仁湯同方制劑主要有酸棗仁合劑和酸棗仁糖漿兩種。傳統湯劑制備要求較高，攜帶不易且飲用不方便。糖漿劑和合劑均為液體制劑，不利于分劑量和攜帶不方便，易破碎和污染衣物。中藥泡騰片是這些年才開發(fā)出的一種中藥劑型，方便隨身攜帶和分劑量。另外溶于水變成溶液服用即能迅速起效，也可以提高生物利用度。處方中含有檸檬酸和甜味劑，口感酸甜易于接受，該劑型也越來越受到年輕患者的歡迎。

因此本研究欲在酸棗仁湯處方基礎上，開發(fā)酸棗仁泡騰片，確定其最佳處方和制備工藝，并通過協同睡眠實驗考察其鎮(zhèn)靜安神的藥理作用。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試藥：酸棗仁（河北荷花池藥業(yè)公司）；知母（河北福君堂藥業(yè)有限公司）；川芎（河北福君堂藥業(yè)有限公司）；茯苓（河北全泰藥業(yè)有限公司）；甘草（河北福君堂藥業(yè)有限公司）；碳酸氫鈉（食品級、睢縣優(yōu)寶嘉食品有限公司）；無水檸檬酸（食品級、睢縣優(yōu)寶嘉食品有限公司）；乳糖（食品級、睢縣優(yōu)寶嘉食品有限公司）；無水乙醇（食品級、河南鑫河陽酒精有限公司）；聚乙二醇600（食品級、佳佳生物科劑有限公司）；阿斯巴甜（食品級、睢縣優(yōu)寶嘉食品有限公司）；氨基甲酸乙酯（分析純、國藥集團化學試劑有限公司）。

1.1.2 實驗動物：本研究所用小鼠均為健康的雄性小鼠（昆明種、清潔級、購買于遼寧省實驗動物資源中心），體重在20g±2g左右，共50只。對小鼠進行常規(guī)喂養(yǎng)，保持室溫在25±2℃，通風良好，及時更換墊料，保證小鼠正常生長。

1.1.3 儀器設備：密封型手提式粉碎機（ZH200A、西安寶正實業(yè)有限公司）；分析天平（JYT-2、上海醫(yī)用激光儀器廠）；循環(huán)水式真空泵（SHB-III、上海豫康科教儀器設備有限公司）；旋轉蒸發(fā)儀（N-1100，上海愛朗儀器有限公司）；OA型恒溫鼓風干燥箱（DHG-914、常州諾基儀器有限公司）；單沖式壓片機（TDP-15、長沙市中南制藥機械廠）；片劑硬度測試儀（YD-1、天津市精拓儀器科技有限公司）；pH計（FE20、梅特勒-托利多儀器有限公司）。

2 實驗方法

2.1 工藝研究

2.1.1 制法：酸棗仁粗粉500g、茯苓200g、川芎200g、知母200g、甘草100g，浸泡30分鐘加9倍水加熱回流提取3次，每次1.5h，然后過濾并合并濾液。通過旋轉蒸發(fā)濃縮濾液至黏稠狀，鼓風干燥粉碎過100目篩得到浸膏粉。通過酸堿分開制粒法制備：取一半浸膏粉加檸檬酸、乳糖、阿斯巴甜，混勻后加適量無水乙醇制成顆粒；PEG6000加熱熔融后加入碳酸氫鈉混勻，放冷凝固后粉碎成細粉，加入剩余浸膏粉、適量乳糖、阿斯巴甜，混勻后加適量無水乙醇制成顆粒，與上述顆?；靹?，壓制成1000片，每片0.5g。以每組壓制20片、每片0.5g為標準進行單因素實驗。

2.1.2 輔料添加量的選擇：按“2.1.1制法”項下所述方法，其他條件不變分別以泡騰劑添加量，泡騰劑酸堿比，甜味劑添加量，潤滑劑添加量等進行單因素實驗。以泡騰片的外觀、口感、色澤、風味和崩解時限為標準。感官評分標準見表1，從而篩選酸棗仁湯泡騰片的最佳輔料添加量。

表1 感觀評分標準Tab.1 Sensory scoring criteria

2.2 質量評價：根據單因素實驗結果選擇出最佳的泡騰劑添加量、泡騰劑酸堿比、甜味劑阿斯巴甜添加量和PEG6000添加量，按照“2.1.1制法”中規(guī)定的制法制備三批酸棗仁泡騰片，按照中國藥典2020年版四部制劑通則中規(guī)定的項目檢測其外觀性狀、pH值、硬度、崩解時限及重量差異，以驗證泡騰片的處方及工藝的可行性、重復性和穩(wěn)定性。

2.3 藥效評價：通過小鼠協同睡眠實驗對酸棗仁泡騰片的安全性及睡眠改善作用進行評價。

2.3.1 實驗分組及模型建立：將已經正常喂養(yǎng)7天的實驗小鼠隨機分為5組，每組10只。分別為空白對照組（攝入水，0.2mL/20g）、陽性對照組（攝入酸棗仁湯，相當于原藥材6g/kg，人用量10倍）、低劑量組（攝入酸棗仁泡騰片，相當于原藥材3g/kg，人用量5倍）、中劑量組（攝入酸棗仁泡騰片，相當于原藥材6g/kg，人用量10倍）、高劑量組（攝入酸棗仁泡騰片，相當于原藥材12g/kg，人用量20倍）。分別灌胃給藥，每天1次，每次0.2mL，連續(xù)給藥7天。同時保證其正常進食進水，末次給藥前12h禁食禁水。

2.3.2 一般觀察：試驗期間每天觀察各組小鼠給藥后的皮毛、自主行為、精神狀況、排便及給藥首末體重的變化。

2.3.3 直接睡眠實驗：末次給藥30min后，觀察各組小鼠是否出現睡眠情況。觀察并記錄每組60min內小鼠入睡數量和睡眠時間。以小鼠翻正反射消失做入睡判定指標，以小鼠消失翻正反射到恢復正常的時間作為小鼠的睡眠時間。以高、中、低劑量給藥組小鼠的入睡只數及睡眠時間來判定酸棗仁湯泡騰片對直接睡眠的影響。并與空白對照組和陽性對照組實驗數據對比，來判斷酸棗仁湯泡騰片與原劑型湯劑在直接睡眠促進作用上的區(qū)別。

2.3.4 氨基甲酸乙酯協同睡眠實驗：末次給藥后60min，各組小鼠均腹腔注射氨基甲酸乙酯，注射劑量為1.0g/kg（0.2mL/20g）。從給藥到小鼠翻正反射消失時間記錄為睡眠潛伏期；以翻正反射消失到恢復翻正反射時間作為睡眠持續(xù)時間。記錄給藥組小鼠和對照組小鼠睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時間，考察酸棗仁泡騰片的協同睡眠作用，并與酸棗仁湯對比，考察劑型改變對藥理作用的影響。

3 結果與分析

3.1 處方研究結果分析：將所得單因素分析數據繪制成圖，可得如圖1、2、3、4。

圖1 泡騰劑添加量對泡騰片崩解時限的影響Fig.1 Effect of effervescent dosage on disintegration time of effervescent tablets

圖2 泡騰劑酸堿比對泡騰片崩解時限、感官評分的影響Fig.2 Effect of acid-base ratio of effervescent tablets on disintegration time limit and sensory score of effervescent tablets

圖3 阿斯巴甜添加量對口感的影響Fig.3 Effect of aspartame addition on taste

圖4 潤滑劑對崩解時間和觀感評分的影響Fig.4 Effects of lubricants on disintegration time limit and sensory score

由圖可優(yōu)選泡騰劑添加量為40%，酸堿比為1.2:1，潤滑劑PEG6000添加量為5%，甜味劑添加量為0.3%。以此做為制法最佳配比。

3.2 質量評價結果分析：按此制法制備3批泡騰片進行工藝驗證，按照2020版《中國藥典》附錄0101片劑制劑通則，檢查外觀光、重量差異、崩解時限、pH值、硬度，測定結果如下。

由表2數據可知，制備的三批泡騰片，各檢測項均符合規(guī)定。

表2 工藝驗證結果Tab.2 Process validation results

3.3 藥效評價結果分析

3.3.1 一般觀察結果：試驗期間每天觀察各組每只小鼠的外表如毛色體重等均無明顯差異，行為、精神情況也都正常，給藥組和對照組排便情況無明顯異常。

3.3.2 對直接睡眠影響結果：不同實驗組小鼠的直接睡眠的影響觀察中，60min內各實驗組小鼠都沒有出現睡眠情況，低中高劑量組及陽性對照組的部分小鼠出現閉眼、安靜現象，但翻正反射都沒有消失。以此判斷酸棗仁泡騰片溶液對直接睡眠無影響作用。3.3.3氨基甲酸乙酯協同睡眠實驗結果分析：采用氨基甲酸乙酯協同睡眠實驗考察不同實驗組小鼠的睡眠潛伏時間和睡眠持續(xù)時間，詳細結果見表3。

表3 泡騰片溶液對小鼠睡眠時間的影響Tab.3 Effect of effervescent tablet solution on sleep time of mice

由表3數據可知，在對縮短小鼠rem和延長睡眠持續(xù)時間的影響中，高劑量組＞中劑量組＞陽性對照組＞低劑量組＞空白對照組，與空白對照相比，陽性對照組、高劑量組、中劑量組具有顯著差異，可見對縮短睡眠潛伏時間和延長睡眠持續(xù)時間酸棗仁湯和酸棗仁泡騰片均有顯著效果。跟陽性對照組相比，中劑量組差異不顯著，其余組均差異顯著，可見相同給藥量的泡騰片和湯劑縮短小鼠入睡時間和延長睡眠持續(xù)時間作用相近，無明顯差異。以此判斷酸棗仁泡騰片溶液對縮短睡眠潛伏時間、睡眠持續(xù)時間有顯著影響作用，藥效與湯劑相似。

4 結論

本研究在酸棗仁湯的基礎上，開發(fā)出了改良型新藥酸棗仁泡騰片。通過單因素考察確定了酸棗仁泡騰片泡騰劑添加量、泡騰劑酸堿比例及甜味劑阿斯巴甜的用量，從而確定了泡騰片的處方和工藝。采用該制法制備三批成品，按2020版中國藥典制劑通則中的要求檢測制品，結果均符合規(guī)定。通過工藝驗證證明酸棗仁泡騰片制備工藝穩(wěn)定，能夠持續(xù)制備出合格產品。

通過一般觀察，給藥后的小鼠與陰性對照組和陽性對照組對比，皮毛、排便及體重無明顯改變，證明該泡騰片無明顯毒性和不良反應。陽性對照組和高、中、低劑量給藥組小鼠均出現不同程度的安靜、活動減少等外觀行為的改變。通過小鼠直接睡眠和協同睡眠實驗，高、中、低劑量酸棗仁泡騰片給藥均能夠縮短rem、增加睡眠持續(xù)時間，中劑量組與陽性對照酸棗仁湯效果相當，表明酸棗仁湯制成泡騰片后藥理作用未發(fā)生明顯改變。

酸棗仁湯作為我國治療睡眠問題的名方，制備成酸棗仁湯泡騰片后保留了酸棗仁湯原本的藥效，還使其攜帶、飲用變得更方便。將傳統中藥與現代制備工藝相結合，使傳統中藥煥發(fā)生機，更具市場前景。