miRNA–371a–3p 在睪丸生殖細(xì)胞腫瘤診療中的研究進(jìn)展

王西明 趙戰(zhàn)魁

1.濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院，山東濟(jì)寧 272013；2.濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科，山東濟(jì)寧 272013

睪丸生殖細(xì)胞腫瘤（testicular germ cell tumor，TGCT）主要起源于分化異常的胎兒性腺細(xì)胞瘤，TGCT 的經(jīng)典腫瘤標(biāo)志物包括甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）、β 人絨毛膜促性腺激素（β–human chorionic gonadotropin，β–hCG）和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH），盡管這些標(biāo)志物仍在臨床中發(fā)揮著作用，但并不能在早期明確診斷TGCT。目前，研究發(fā)現(xiàn)miR–371a–3p 是TGCT 的診斷和預(yù)后判斷的新型生物標(biāo)志物，本文對 miRNA–371a–3p 在TGCT 診療中的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 睪丸生殖細(xì)胞腫瘤

TGCT 是20～40 歲年輕男性常見的惡性腫瘤，也是為數(shù)不多的可以治愈的腫瘤，由于胚胎分化功能的多樣性以及異常分化導(dǎo)致TGCT具有表型異質(zhì)性的特點(diǎn)。男性TGCT 主要分為兩種類型：睪丸精原細(xì)胞瘤和睪丸非精原細(xì)胞瘤，兩者均起源于原位生殖細(xì)胞腫瘤（germ cell neoplasia in situ，GCNIS），該腫瘤起源于異常分化的胎兒性腺細(xì)胞瘤，在嚴(yán)重發(fā)育不良的性腺中，GCNIS 的病變稱為性腺母細(xì)胞瘤。TGCT 少見于嬰幼兒，且其發(fā)病機(jī)制與成人亦不同，但是他們的組織病理學(xué)與成人TGCT相似。老年男性的TGCT 發(fā)病率也很低，多起源于青春期后的精原細(xì)胞。

2 睪丸生殖細(xì)胞腫瘤的腫瘤標(biāo)志物

2.1 經(jīng)典TGCT 生物標(biāo)志物

目前臨床上常用的診斷TGCT 的腫瘤標(biāo)志物主要包括AFP、β–hCG 和LDH。盡管上述3 個(gè)標(biāo)志物在診斷TGCT 中發(fā)揮著重要作用，但在某些情況下也有其不確定性。只有不到30%的精原細(xì)胞瘤表達(dá)β–hCG，也只有50%～60%的非精原細(xì)胞瘤患者表達(dá)AFP；同時(shí)，一些與TGCT 無關(guān)的情況也會出現(xiàn)以上生物標(biāo)志物水平升高，即產(chǎn)生假陽性，如肝病、肝毒性、某些藥物和某些遺傳因素導(dǎo)致的AFP升高；而吸食大麻或體內(nèi)促性腺激素水平升高時(shí)人體內(nèi)的β–hCG 也會升高；LDH 是TGCT 中特異性較低的腫瘤標(biāo)志物，多種因素可導(dǎo)致血清LDH 水平升高，包括溶血或使用細(xì)胞因子類藥物等。

2.2 新型標(biāo)志物

由于經(jīng)典的TGCT 生物標(biāo)志物在臨床應(yīng)用中的局限性，微RNA（microRNA，miR）引起大家的關(guān)注。miR 是小型非編碼RNA 分子，約由22 個(gè)核苷酸組成，它們參與信使RNA（messenger RNA，mRNA）翻譯的表觀遺傳調(diào)控，從而影響細(xì)胞分化和其他生理過程，包括致癌，可作為致癌基因或腫瘤抑制因子。已有研究表明，特定的miR 與TGCT相關(guān)，如位于19 號染色體上的miR–371–3 簇（miR–371a–3p、miR372–3p 和miR–373–3p）及位于4 號染色體上的miR–337–3p 和miR–302 簇（miR–302a–3p、miR–302b–3p 和miR–302c–3p）。2006 年，Voorhoeve等首次在生殖細(xì)胞組織和細(xì)胞系中記錄了胚胎生殖細(xì)胞和干細(xì)胞的miR 簇特征。除畸胎瘤外，所有TGCT 組織學(xué)亞型，包括GCNIS，均有生殖細(xì)胞和干細(xì)胞特異性miR 的表達(dá)。此外，TGCT 組織中干細(xì)胞特異性miR 表達(dá)的研究可大大提高人們對TGCT 作為發(fā)育性癌癥的生物學(xué)認(rèn)識，并為探索這些miR 作為生物標(biāo)志物提供理論依據(jù)。一項(xiàng)近期研究顯示：①TGCT 組織中miR–371a–3p 的表達(dá)水平明顯高于對側(cè)睪丸組織和正常睪丸；②有明確證據(jù)表明miR–371a–3p 定位于TGCT 的腫瘤細(xì)胞內(nèi)；③TGCT組織中miR–371a–3p 的表達(dá)水平遠(yuǎn)高于血清；④在臨床Ⅰ期（clinical stageⅠ，CSⅠ）患者中，TGCT組織中的miR–371a–3p 水平與相應(yīng)的血清水平顯著相關(guān)；⑤TGCT 患者對側(cè)睪丸組織和正常睪丸組織中存在基線miR–371a–3p 表達(dá)?；紓?cè)TGCT 組織中的miR–371a–3p 表達(dá)水平明顯高于健側(cè)和正常人，這為更加精準(zhǔn)地診斷TGCT 提供了方法。Dieckmann等研究發(fā)現(xiàn)，與正常人和TGCT 患者健側(cè)睪丸組織相比，TGCT 睪丸靜脈血中miR–371a–3p 水平升高4 倍。

3 現(xiàn)有的新型標(biāo)志物的臨床研究

3.1 miR-371a-3p 作為TGCT 的診斷標(biāo)志物

2019 年，一項(xiàng)前瞻性研究納入616 例TGCT 患者和258 例男性對照者，通過檢測血清miR–371a–3p水平確認(rèn)其診斷的準(zhǔn)確性，結(jié)果顯示CSⅠ的曲線下面積為0.958（95%0.942～0.974），CSⅡ/Ⅲ的曲線下面積為0.998（95%0.995～1.000），診斷精原細(xì)胞瘤的敏感度為89.8%，特異性為96.1%，非精原細(xì)胞瘤的敏感度為95.0%，特異性為96.1%?？傮w陽性預(yù)測值為97.2%，陰性預(yù)測值為82.7%。該研究結(jié)果提示miR–371a–3p 或?qū)⒊蔀門GCT 的新型腫瘤標(biāo)志物。

腫瘤標(biāo)志物在血清中的水平變化反映疾病的變化，因此，有效的腫瘤標(biāo)志物應(yīng)具有較高的靈敏度，可以快速地反映疾病的變化和評價(jià)治療效果。miR–371a–3p 有助于鑒別適合保留睪丸手術(shù)的TGCT，90%的CSⅠ患者睪丸切除術(shù)后miR–371a–3p水平下降。此外，miR–371a–3p 血清濃度的半衰期很短，為3.67～7.01h。在目前使用的診斷TGCT 的標(biāo)志物中，β–hCG 半衰期也較短，約為36h，而AFP 的半衰期較長，為5～7d，特別是在AFP 水平升高的患者中，等待腫瘤標(biāo)志物血清水平下降不能及時(shí)評估患者病情變化。因此，miR–371a–3p 的半衰期<24h 是其作為TGCT 腫瘤標(biāo)志物的一個(gè)有利條件。

3.2 miR-371a-3p 與TGCT 的治療與預(yù)后

血清miR–371a–3p 水平可為TGCT 提供預(yù)后信息，化療前miR–371a–3p 水平升高的患者無進(jìn)展生存率和總生存率均較低。有研究者對118 例TGCT患者化療期間的miR–371a–3p 水平進(jìn)行了測量，結(jié)果顯示在第一個(gè)化療周期后，患者miR–371a–3p 水平顯著降低。即使在CSⅢ患者中，miR–371a–3p 水平也在化療后顯著下降；在治療周期結(jié)束后，大多數(shù)轉(zhuǎn)移患者的miR–371a–3p 水平也恢復(fù)正常。研究表明在CSⅠ非精原細(xì)胞瘤患者的隨訪中監(jiān)測miR–371a–3p 水平有助于早期發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)。因此，miR–371a–3p 有望在TGCT 患者的隨訪中發(fā)揮重要作用。通過檢測血清miR–371a–3p 水平可在節(jié)省成本的同時(shí)減少患者的累積輻射劑量；在沒有經(jīng)典腫瘤標(biāo)志物表達(dá)的TGCT 早期階段，可通過檢測miR–371a–3p 水平及早診斷從而避免不恰當(dāng)?shù)闹委?。此外，連續(xù)檢測miR–371a–3p 可能成為化療過程中監(jiān)測其療效的重要指標(biāo)，并為制訂個(gè)性化的臨床治療方案提供依據(jù)。miR–371a–3p 還可應(yīng)用于睪丸小腫物的初步診斷、化療后殘留腫物的診斷評估及標(biāo)志物陰性的淋巴結(jié)病和不明原發(fā)腫瘤的調(diào)查等。Vilela–Salgueiro等從福爾馬林固定的石蠟切片提取RNA 以評估TGCT 亞型中miR–371a– 3p 的表達(dá)水平，結(jié)果顯示miR–371a–3p 在除畸胎瘤外的所有TGCT 亞型中均有強(qiáng)表達(dá)?；チ霾槐磉_(dá)miR–371a–3p 的原因可能與TGCT 和人類胚胎發(fā)育相似。雖然大多數(shù)TGCT 亞型模仿胚胎發(fā)育的早期階段，但保留了它們的原始生物學(xué)特征，包括干細(xì)胞的miR圖譜，但畸胎瘤亞型代表一種更高級、更成熟的組織學(xué)亞型，它失去了干細(xì)胞的所有生化特征，特別是miR–371a–3p 的典型表達(dá)，從而可從中鑒別畸胎瘤與TGCT。

4 miR–371a-3p 研究的局限性

盡管目前的研究有力地證實(shí)miR–371a–3p 可作為TGCT 新的血清生物標(biāo)志物，且其在精原細(xì)胞瘤和非精原細(xì)胞瘤中都具有表達(dá)特異性，但這些研究多為回顧性研究，前瞻性研究數(shù)量不多，且招募的患者數(shù)量較少，不能很好地鑒別TGCT 與畸胎瘤。其他以miR 為基礎(chǔ)的腫瘤標(biāo)志物，也可能成為TGCT的特異性生物標(biāo)志物，但檢測成本較高，檢測方式還需進(jìn)一步規(guī)范。

5 總結(jié)與展望

血清中的miR，特別是miR–371a–3p 或許會成為新的TGCT 診治的生物標(biāo)志物?，F(xiàn)有證據(jù)均來自正在進(jìn)行的前瞻性試驗(yàn)，這些試驗(yàn)可能最終為miR–371a–3p 的臨床應(yīng)用打開大門。miR–371a–3p 有可能提高TGCT 的診斷準(zhǔn)確性，從而使診療更加及時(shí)、合理、有效，改善年輕TGCT 患者的生活質(zhì)量和預(yù)期壽命。目前miR–371a–3p 的研究尚處于初級階段，仍有許多不足之處，需要進(jìn)一步研究以規(guī)范其臨床應(yīng)用。