共載姜黃素/小檗堿自微乳給藥系統(tǒng)的制備及評價Δ

韓 華，梁綠圓，季 珂，魏炳琦，任翎嘉，蘇潔欣，關(guān)延彬#（.河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，鄭州 450040；.河南中醫(yī)藥大學(xué)兒科醫(yī)學(xué)院，鄭州 450040；.河南中醫(yī)藥大學(xué)仲景學(xué)院，鄭州 450040）

研究表明，多酚類化合物可通過多重機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用[1]。姜黃素（curcumin，CUR）是從姜黃屬植物姜黃Curcuma longaL.根莖中提取的一種多酚類化合物，可通過抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移和血管生成等發(fā)揮抗腫瘤作用[2]。小檗堿（berberine，BER）是從毛茛科、蕓香科等植物中分離出來的異喹啉類生物堿，可通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而發(fā)揮一定的抗腫瘤作用[3-4]。研究指出，與CUR、BER單用相比，兩藥聯(lián)用可更有效地抑制肝癌、乳腺癌、肺癌、骨癌細(xì)胞的生長和增殖[5-7]。本課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CUR 聯(lián)合BER 對前列腺癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖抑制作用，但由于溶解性差、生物利用度低等不足，二者的臨床應(yīng)用受到了限制。

利用納米技術(shù)共載抗腫瘤藥物，可有利于將藥物精準(zhǔn)地遞送到腫瘤組織，并可實(shí)現(xiàn)藥物的同時或連續(xù)釋放[8-9]。自微乳給藥系統(tǒng)（self-microemulsion drug delivery system，SMEDDS）是由藥物、油相、乳化劑和助乳化劑等組成的均一透明溶液，在室溫條件下遇水可自發(fā)乳化形成水包油型（O/W）微乳[10]。SMEDDS 可通過增加難溶性藥物溶解度、提高藥物胃腸道黏膜滲透性和淋巴轉(zhuǎn)運(yùn)能力等方式來改善藥物的口服吸收[11]?；诖?，本實(shí)驗(yàn)利用自微乳化技術(shù)，制備共載CUR/BER 的SMEDDS（CUR/BER-SMEDDS）以提高2 種藥物的溶解度和生物利用度；同時，本實(shí)驗(yàn)對其作用于人前列腺腫瘤細(xì)胞PC-3和DU-145的體外抑制活性進(jìn)行考察，旨在促進(jìn)2種藥物在抗腫瘤方面的臨床應(yīng)用。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器有T6型新世紀(jì)紫外-可光分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、Zatasizer Nano ZS90 型納米粒度分析儀（英國Malvern 公司）、Tecnai G2型透射電子顯微鏡（美國FEI公司）、BAS124S型萬分之一電子分析天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]、H1650W 型臺式微量高速離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

CUR原料藥（批號M13GS148382，純度＞97%）購自大連美侖生物技術(shù)有限公司；BER 原料藥（批號J12GS151377，純度＞95%）、中鏈甘油三酯、辛癸酸甘油酯、噻唑藍(lán)（MTT）均購自上海源葉生物科技有限公司；CUR對照品（批號110825-201804）購自中國食品藥品檢定研究院，BER對照品（批號RQ18R1031）購自上海瑞永生物科技有限公司，純度均大于98%；肉豆蔻酸異丙酯購自浙江物美生物科技有限公司；油酸乙酯購自上海飛祥化工廠；辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯（Labrasol）購自上海凱茵化工有限公司；聚氧乙烯40 氫化蓖麻油（RH40）購自阿拉丁試劑（上海）有限公司；吐溫-80、吐溫-20、聚乙二醇400（PEG400）等均為分析純，水為蒸餾水。

1.3 細(xì)胞

人前列腺腫瘤細(xì)胞PC-3、DU-145 均購自中國科學(xué)院上海生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所。

2 方法與結(jié)果

2.1 CUR/BER-SMEDDs的制備

按處方比例精密稱取油相、乳化劑、助乳化劑，混合后，加入過量的CUR 和BER 原料藥（摩爾比2∶1）混勻，轉(zhuǎn)移至含水100 mL 的燒杯中，在（37.0±0.2）℃的水浴條件下磁力攪拌，即得CUR/BER-SMEDDS。

2.2 CUR和BER含量測定方法的建立

采用紫外分光光度法測定CUR和BER的含量。

2.2.1 溶液的制備 精密稱取CUR 對照品8.45 mg 于20 mL量瓶中，加無水乙醇溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度為422.5 μg/mL 的母液。精密吸取上述母液5 mL 于50 mL量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，配制成質(zhì)量濃度為42.25 μg/mL的CUR對照品溶液，避光保存，備用。精密稱取BER 對照品11.93 mg 于100 mL 量瓶中，加無水乙醇溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度為119.3 μg/mL 的BER對照品溶液，備用。精密吸取某處方設(shè)計工藝制備的CUR/BER-SMEDDS 溶液1.5 mL，加無水乙醇稀釋至6 mL，超聲（功率500 W，頻率40 kHz，下同）破乳20 min，以12 000 r/min 離心10 min，取上清液0.5 mL，用無水乙醇定容至5 mL，即得供試品溶液。

2.2.2 方法學(xué)考察 參照2020 年版《中國藥典》（四部）“分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”進(jìn)行方法學(xué)考察[12]：分別將2種對照品溶液用無水乙醇稀釋后，置于紫外-可見分光光度計上進(jìn)行全波長掃描，最終確定CUR、BER 的檢測波長分別為425、352 nm。精密移取CUR 對照品溶液，分 別 用 無 水 乙 醇 稀 釋 至0.845、1.690、3.380、4.225、5.070、6.760、7.605 μg/mL，于425 nm 波長處測定吸光度。以吸光度（Y）對CUR 質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y＝0.158 4X-0.013 3（R2＝0.999 8），CUR 檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為0.845～7.605 μg/mL。精密移取BER 對照品溶液，分別用無水乙醇稀釋至2.386、4.772、7.158、9.544、11.930 μg/mL，于352 nm波長處測定吸光度。以吸光度（Y）對BER質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y＝0.059 3X+0.021 6（R2＝0.999 9），BER 檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為2.386～11.930 μg/mL。CUR、BER 精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性（12 h）試驗(yàn)的RSD 均小于5.00%，平均加樣回收率分別為99.8%～101.5%、99.4%～104.4%（RSD 均小于5.00%，n＝9）。

2.3 CUR和BER在不同輔料中溶解度的測定

將過量的CUR 和BER 原料藥（摩爾比1∶1）置于2 mL 離心管中，分別加入不同的油相、乳化劑、助乳化劑至體系總質(zhì)量為1 g，超聲40 min使充分溶解，以10 000 r/min 離心10 min，取上清液，用無水乙醇稀釋至適宜濃度，分別于425、352 nm波長處測定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量并計算溶解度。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果見表1。根據(jù)溶解度實(shí)驗(yàn)結(jié)果，優(yōu)選藥物溶解度較大的中鏈甘油三酯、辛癸酸甘油酯為油相；Labrasol、吐溫-80（同系列選最高值即可）、RH40 為乳化劑；PEG400、無水乙醇、1，2-丙二醇為助乳化劑進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

表1 藥物在不同輔料中的溶解度（n＝3，mg/g）

2.4 空白處方的單因素篩選

2.4.1 油相 固定乳化劑、助乳化劑分別為吐溫-80 和PEG400，將乳化劑與助乳化劑按質(zhì)量比2∶1 混合，形成混合乳化劑。將不同種類油相與上述混合乳化劑分別按質(zhì)量比1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1 混合，渦旋振蕩3 min。取此混合物1 g轉(zhuǎn)移至含水100 mL的燒杯中，在（37.0±0.2）℃的水浴中磁力攪拌，制備自微乳。按自乳化等級標(biāo)準(zhǔn)表（表2）進(jìn)行外觀評價，結(jié)果見表3。由表3 可知，以中鏈甘油三酯與辛癸酸甘油酯為油相時，自乳化效果相差不大；結(jié)合溶解度實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以中鏈甘油三酯為油相更佳；結(jié)合安全性考慮，當(dāng)油相占比為20%～55%時自乳化效果更理想。2.4.2 乳化劑 固定油相、助乳化劑分別為中鏈甘油三酯和PEG400，將不同乳化劑與助乳化劑按質(zhì)量比2∶1混合，形成混合乳化劑。將油相與上述混合乳化劑分別按質(zhì)量比1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1混合，再按“2.4.1”項(xiàng)下方法制備自微乳并進(jìn)行外觀評價，結(jié)果見表4。由表4 可知，RH40 的乳化能力優(yōu)于Labrasol 和吐溫-80，因此選擇RH40為乳化劑進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

表2 自乳化等級標(biāo)準(zhǔn)表

表3 油相與混合乳化劑各質(zhì)量比下不同種類油相對自乳化的影響

表4 油相與混合乳化劑各質(zhì)量比下不同種類乳化劑對自乳化的影響

2.4.3 助乳化劑 固定油相、乳化劑分別為中鏈甘油三酯、RH40，將乳化劑與不同助乳化劑按質(zhì)量比2∶1混合，形成混合乳化劑。將油相與上述混合乳化劑分別按質(zhì)量比1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1混合，再按“2.4.1”項(xiàng)下方法制備自微乳。分別以油相、乳化劑、助乳化劑的質(zhì)量百分比為頂點(diǎn)，繪制偽三元相圖，選擇能形成自微乳區(qū)域（以黑色表示）面積最大的助乳化劑，結(jié)果見圖1。由圖1可知，PEG400形成的自微乳區(qū)域面積最大，因此選擇PEG400為助乳化劑進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖1 不同助乳化劑所制空白自微乳的偽三元相圖

2.4.4 乳化劑與助乳化劑質(zhì)量比范圍 以中鏈甘油三酯為油相，RH40為乳化劑，PEG400為助乳化劑，將乳化劑與助乳化劑分別以質(zhì)量比3∶1、2∶1、1∶1混合，形成混合乳化劑；隨后，將油相與上述混合乳化劑分別按質(zhì)量比1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1混合，再按“2.4.1”項(xiàng)下方法制備自微乳，按“2.4.3”項(xiàng)下方法繪制偽三元相圖，結(jié)果見圖2。由圖2可知，當(dāng)乳化劑與助乳化劑質(zhì)量比為2∶1時，乳化效果相對最佳，故綜合考慮將二者質(zhì)量比范圍設(shè)為3∶1～1∶1進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.5 CUR/BER-SMEDDS處方的優(yōu)化

采用星點(diǎn)設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)化CUR/BER-SMEDDS的處方。

圖2 乳化劑與助乳化劑不同質(zhì)量比所制空白自微乳的偽三元相圖

2.5.1 載藥量的計算 精密稱取各處方自微乳，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液后，分別于425、352 nm波長處測定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算CUR、BER 的含量，并計算載藥量（%）：載藥量（%）＝（W1/W2）×100%（式中，W1為包載藥物的總質(zhì)量，W2為自微乳和藥物的總質(zhì)量）[13-14]。

2.5.2 處方的優(yōu)化 根據(jù)空白處方的單因素篩選結(jié)果，以粒徑（Y1）和載藥量（Y2）為評價指標(biāo)，采用星點(diǎn)設(shè)計-效應(yīng)面法對油相的質(zhì)量百分比（X1）、乳化劑與助乳化劑的質(zhì)量比（X2）進(jìn)行優(yōu)化。星點(diǎn)設(shè)計的因素與水平見表5，星點(diǎn)設(shè)計的安排與結(jié)果表見表6。

表5 CUR/BER-SMEDDS星點(diǎn)設(shè)計的因素與水平

表6 CUR/BER-SMEDDS星點(diǎn)設(shè)計的安排與結(jié)果

使用Design-Expert 12 軟件對表6 數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，得Y1和Y2的二次多項(xiàng)式回歸方程分別為：Y1＝59.26+16.87A-8.19B-3.3AB+34.36A2-0.463 0B2（R2＝0.797 0），Y2＝90.62-4.200A-0.045 7B-0.727 5AB-4.090A2-1.150B2（R2＝0.729 8），且P均小于0.05，表明上述方程擬合度均較高；失擬項(xiàng)的P大于0.05，表明未知因素干擾很小，所考察因素可用于分析和預(yù)測Y1與Y2的變化。

使用Design-Expert 12 軟件繪制三維效應(yīng)面圖，結(jié)果見圖3。由圖3可知，Y1隨著因素A的增加先減小后增大，隨著因素B的增大而緩慢減??；Y2隨著因素A的增加先增大后快速減小，而隨著因素B的變動較小。使用Design-Expert 12軟件對上述二次多項(xiàng)式回歸方程求解，確定最優(yōu)工藝為油相的質(zhì)量百分比30.97%、乳化劑與助乳化劑的質(zhì)量比2.10∶1；該條件下，粒徑預(yù)測值為57.24 nm，載藥量預(yù)測值為94.81 mg/g。

圖3 粒徑和載藥量的三維效應(yīng)面圖

2.5.3 最優(yōu)處方的驗(yàn)證 按“2.5.2”項(xiàng)下最優(yōu)處方，即油相（中鏈甘油三酯）質(zhì)量百分比為30.97%，乳化劑（RH40）與助乳化劑（PEG400）的質(zhì)量比為2.10∶1（換算得三者的質(zhì)量比分別為30.97%、46.77%、22.26%），制備3 批CUR/BER-SMEDDS，測得其平均粒徑為（58.90±5.41）nm，與預(yù)測值的相對偏差為-2.90%，平均載藥量為（94.94±3.87）mg/g，與預(yù)測值的相對偏差為-0.14%，表明所建模型預(yù)測性好、準(zhǔn)確度高，最優(yōu)工藝穩(wěn)定、可行。

2.6 CUR/BER-SMEDDS的表征

2.6.1 外觀和微觀形態(tài)觀察 取按“2.5.2”項(xiàng)下最優(yōu)處方制得的CUR/BER-SMEDDS，在室溫下觀察其外觀；同時，取該制劑適量，加水于37 ℃乳化后，加少量磷鎢酸染色，于透射電子顯微鏡下觀察其微觀形態(tài)。結(jié)果顯示，該制劑為黃色透明液體，加水乳化后為淡黃色澄清透明液體；在透射電子顯微鏡（圖4）下，其微粒呈圓球形。

圖4 CUR/BER-SMEDDS的透射電子顯微鏡圖

2.6.2 粒徑測定 取按“2.5.2”項(xiàng)下最優(yōu)處方制得的CUR/BER-SMEDDS，加水于37 ℃乳化后，用激光粒度儀測定其平均粒徑。結(jié)果顯示，其平均粒徑為（58.90±5.41）nm，多分散性指數(shù)為0.17±0.03。

2.7 CUR/BER-SMEDDS體外溶出實(shí)驗(yàn)

按2020年版《中國藥典》（四部）“溶出度與釋放度測定法第三法（小杯法）”進(jìn)行溶出度考察[12]。分別以人工胃液、人工腸液（均含1%吐溫-80）100 mL 為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度為（37.0±0.5）℃。精密稱取按“2.5.2”項(xiàng)下最優(yōu)處方所制CUR/BER-SMEDDS 的濃縮液（未加水乳化）、CUR 原料藥、BER 原料藥各100 mg，分別裝入0 號膠囊殼內(nèi)，投入溶出介質(zhì)中[15]。分別于溶出的5、10、15、30、60、90、120 min 時取樣5 mL（同時補(bǔ)加等溫空白溶出介質(zhì)5 mL），于30 s 內(nèi)過0.22 μm 微孔濾膜，濾液稀釋后測定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算CUR、BER 的濃度，并按下式計算累積溶出度（Q）：Q＝×100%（式中，Cn為第n個取樣點(diǎn)的藥物濃度；V0為溶出介質(zhì)總體積；V為每次取樣體積；W為藥物總量）；同時，繪制溶出曲線，結(jié)果見圖5。由圖5 可知，120 min 內(nèi)，在人工胃液中，BER 原料藥和CUR/BER-SMEDDS 濃縮液中BER 的累積溶出率相近，而CUR/BER-SMEDDS濃縮液中CUR在2種溶出介質(zhì)中的累積溶出率均明顯高于原料藥。10 min時，CUR/BER-SMEDDS 濃縮液中CUR 和BER 在人工腸液中的累積溶出率分別為90.54%、90.71%，在人工胃液中的累積溶出率分別為84.20%、59.45%，而對應(yīng)CUR和BER原料藥在人工腸液中的累積溶出率分別為51.09%、75.92%，在人工胃液中的累積溶出率分別為54.58%、54.22%，表明該自微乳體系釋藥更迅速完全，有助于解決藥物溶解度低的問題。

圖5 CUR、BER、CUR/BER-SMEDDS的體外溶出曲線

2.8 CUR/BER-SMEDDS 對前列腺腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用考察

采用MTT 法進(jìn)行檢測。將前列腺腫瘤細(xì)胞PC-3、DU-145分別培養(yǎng)于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中，于5%CO2、37 ℃條件（后同）下培養(yǎng)。分別取對數(shù)生長期的PC-3、DU-145細(xì)胞，按5×103個/mL、200 μL/孔接種至96 孔培養(yǎng)板中，待細(xì)胞融合至70%～80%后，棄去上清液，分別加入濃度均為10、20、30、40、50、60 μmol/L的游離CUR培養(yǎng)液（CUR組）、游離BER培養(yǎng)液（BER組）、CUR和BER藥物混合培養(yǎng)液（CUR+BER組，兩藥摩爾比為2∶1）和CUR/BER-SMEDDS培養(yǎng)液（CUR/BER-SMEDDS 組），給藥濃度參考前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置，同時設(shè)置空白SMEDDS 組，每組各濃度設(shè)置6 個復(fù)孔。培養(yǎng)24 h 后，每孔加入5 mg/mL MTT 試劑20 μL，孵育4 h 后棄去上清液，以3 500 r/min 離心10 min，加DMSO 150 μL 振搖后，采用酶標(biāo)儀于490 nm 波長處檢測各孔的光密度（OD）值，計算細(xì)胞存活率和半數(shù)抑制濃度（IC50）。細(xì)胞存活率（%）＝（OD藥物-OD空白對照）/（OD陰性對照-OD空白對照）×100%（以空白細(xì)胞作為陰性對照，空白培養(yǎng)液作為空白對照）。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以±s表示，采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

細(xì)胞存活率檢測結(jié)果（圖6）顯示，空白SMEDDS對PC-3、DU-145細(xì)胞的生長有微弱影響，但細(xì)胞生存率基本都在80% 以上（圖略）；CUR+BER 與CUR/BERSMEDDS對PC-3、DU-145細(xì)胞均有明顯抑制作用，且作用有隨濃度增加而增強(qiáng)的趨勢。IC50計算結(jié)果（表7）表明，與CUR/BER-SMEDDS 組比較，CUR、BER 組中2 種細(xì)胞的IC50均顯著升高（P＜0.05），說明與單藥比較，CUR/BER-SMEDDS 能更有效地抑制前列腺腫瘤細(xì)胞生長。

圖6 CUR/BER-SMEDDS對前列腺腫瘤細(xì)胞存活率的影響（±s，n＝6）

表7 各種藥物對PC-3、DU-145 細(xì)胞的IC50（±s，n＝6，μmol/L）

表7 各種藥物對PC-3、DU-145 細(xì)胞的IC50（±s，n＝6，μmol/L）

a：與CUR/BER-SMEDDS組比較，P＜0.05

組別BER組CUR組BER+CUR組CUR/BER-SMEDDS組PC-3細(xì)胞52.48±3.24a 57.54±2.89a 20.89±2.14 17.38±2.84 DU-145細(xì)胞42.66±2.95a 36.31±3.29a 22.39±2.44 20.89±1.26

3 討論

研究表明，CUR 和BER 可通過多種機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用，可增強(qiáng)常規(guī)化療藥物對腫瘤細(xì)胞的敏感性[7]。抑制腫瘤生長需要大量游離藥物，但因?yàn)镃UR、BER 的溶解度和生物利用度問題，口服給藥很難將足量的藥物遞送至腫瘤細(xì)胞。已有研究表明，兩藥聯(lián)用可通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和自噬來抑制乳腺癌細(xì)胞生長[5-7]。結(jié)合CUR和BER 獨(dú)特的化學(xué)性質(zhì)、良好的抗癌活性、較低的毒性及豐富的資源，本課題組設(shè)想將CUR 和BER 共同包載于SMEDDS 中以發(fā)揮更強(qiáng)的抗腫瘤作用。結(jié)合文獻(xiàn)報道，在處方設(shè)計前，本課題組通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)考察了不同摩爾比CUR 和BER 混合溶液（摩爾比分別為1∶1、2∶1、3∶1、4∶1）對前列腺腫瘤細(xì)胞PC-3、DU-145 存活率的影響發(fā)現(xiàn)，當(dāng)兩藥摩爾比為1∶1時，細(xì)胞存活率最低，提示兩藥聯(lián)用有較強(qiáng)的抑制活性，為其聯(lián)合抗前列腺癌作用研究提供了一定的理論基礎(chǔ)。在實(shí)際制備過程中，如果兩藥按摩爾比1∶1投料，所制自微乳并非按1∶1載藥，原因可能與藥物在載體中溶解度及親和力不同有關(guān)。結(jié)合載藥量及細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)，在實(shí)際制備過程中，本研究將CUR 和BER 的投藥摩爾比設(shè)為2∶1，結(jié)果顯示，在適當(dāng)提高CUR 的投藥量后，可保證SMEDDS 所包載的藥物比例接近于發(fā)揮最強(qiáng)抗腫瘤活性的藥物比例。

本研究首先通過溶解度實(shí)驗(yàn)篩選出對藥物具有較強(qiáng)溶解能力的油相（中鏈甘油三酯、辛癸酸甘油酯）、乳化劑（吐溫-80、Labrasol、RH40）和助乳化劑（PEG400、1，2-丙二醇、無水乙醇），進(jìn)而通過繪制偽三元相圖與星點(diǎn)設(shè)計-效應(yīng)面法對處方進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)合數(shù)據(jù)模型進(jìn)行擬合預(yù)測，確定最優(yōu)處方如下：中鏈甘油三酯、RH40、PEG400 的質(zhì)量百分比分別為30.97%、46.77%、22.26%。所制CUR/BER-SMEDDS 粒徑均一、穩(wěn)定，對CUR 和BER 均有較好的包載能力，且其溶出度優(yōu)于CUR、BER原料藥。

本研究進(jìn)一步探討了CUR/BER-SMEDDS 對人前列腺腫瘤細(xì)胞PC-3、DU-145 的體外抑制作用。結(jié)果表明，CUR+BER 與CUR/BER-SMEDDS 對PC-3、DU-145細(xì)胞均有明顯的抑制作用，且作用有隨濃度增加而增強(qiáng)的趨勢；此外，CUR/BER-SMEDDS 對2 種細(xì)胞的IC50均顯著低于CUR、BER 單藥，提示CUR/BER-SMEDDS 對腫瘤細(xì)胞仍有抑制作用，與CUR+BER 無顯著差別且優(yōu)于任一單藥。這可能是因?yàn)樗幬锝?jīng)納米乳包載后仍具有一定的長效釋放作用，且劑型的改善可提高藥物的溶解度，并有助于藥物在腫瘤組織的靶向富集，但具體作用有待后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，本研究采用自微乳化技術(shù)制備了CUR/BER-SMEDDS，所得制劑具有較高的載藥能力，并有利于提高藥物在胃腸道中的溶出速度，且對前列腺腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用有所增強(qiáng)。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，課題組將就CUR/BER-SMEDDS 體內(nèi)抗腫瘤作用、藥動學(xué)等開展更全面、深入的研究，為制備具有良好載藥能力和靶向性的納米給藥系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)精確遞藥提供更多的理論依據(jù)。