益氣活血中藥組分對慢性腦缺血模型小鼠認(rèn)知功能的影響及機(jī)制Δ

韓富華，劉劍剛，孫林娟，李南南，官 杰，詹 敏，5，陳文潔，5（.中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院腦病科，北京 0009；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，北京 00029；3.中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院心血管病中心，北京 0009；.青島市海慈醫(yī)療集團(tuán)內(nèi)分泌科，山東 青島 266033；5.中國中醫(yī)科學(xué)院研究生院，北京00700）

慢性腦缺血（chronic cerebral ischemia，CCI）又稱慢性腦低灌注，是一種由多種原因?qū)е履X血流長期灌注不足進(jìn)而引發(fā)的慢性腦功能障礙綜合征，早期表現(xiàn)為認(rèn)知功能受損，隨后可發(fā)展為持久性或進(jìn)展性的認(rèn)知及神經(jīng)功能障礙[1]，是血管性認(rèn)知功能障礙（vascular cognitive impairment，VCI）的重要危險(xiǎn)因素[2]。神經(jīng)血管單元（neurovascular unit，NVU）是由神經(jīng)元、血腦屏障、星形膠質(zhì)細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)組成的復(fù)合體，可發(fā)揮復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)協(xié)同作用，共同維持神經(jīng)元微環(huán)境的穩(wěn)定[3]。NVU理論將NVU作為神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的基本單位進(jìn)行整體研究，把以往對單一神經(jīng)元的保護(hù)擴(kuò)展為對NVU 中各組成的全面保護(hù)[4]，這一研究策略與中藥多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、多維度全面保護(hù)和整體調(diào)節(jié)的作用特點(diǎn)相吻合。探究CCI 狀態(tài)下腦內(nèi)NVU 的病變情況，并基于此調(diào)節(jié)和促進(jìn)NVU 功能與結(jié)構(gòu)的恢復(fù)，對改善CCI 導(dǎo)致的認(rèn)知功能障礙具有重要意義。

既往研究表明，益氣活血中藥組分（人參總皂苷、銀杏總酮酯、西紅花總苷）能夠透過血腦屏障，可改善VCI患者的認(rèn)知功能、神經(jīng)元活動(dòng)和腦灌注損傷[5]；同時(shí)，又可調(diào)節(jié)多發(fā)梗死性癡呆大鼠腦內(nèi)與學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)水平，改善其認(rèn)知功能[6]。然而目前該中藥組分對CCI 所致認(rèn)知功能障礙的作用及機(jī)制尚不清楚。本研究基于NVU理論，從動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力、NVU超微形態(tài)結(jié)構(gòu)和相關(guān)蛋白[血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、血管生成素1（angiopoietin 1，Ang1）、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）、α7 煙堿型乙酰膽堿受體（α7 nicotinic acetylcholine receptor，α7 nAChRs）]表達(dá)等角度入手，探討益氣活血中藥組分對CCI模型小鼠認(rèn)知功能障礙的影響及作用機(jī)制，以期為臨床防治VCI 提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括BT87-3型體內(nèi)血栓形成測定儀（包頭市昆侖生物化學(xué)應(yīng)用技術(shù)開發(fā)研究所）、1049002 型跳臺(tái)儀（北京眾實(shí)迪創(chuàng)科技發(fā)展有限責(zé)任公司）、H-7500 型透射電鏡（日本Hitachi公司）、Fresco17-1型低溫冷凍離心機(jī)[賽默飛世爾科技（中國）有限公司]、Tanon 1600型凝膠成像系統(tǒng)（上海天能科技有限公司）、ABI 7500 型熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）儀（美國ABI公司）、Multisksn MK3 型全自動(dòng)酶標(biāo)儀（芬蘭Thermo Labsystems公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

益氣活血中藥組分[人參總皂苷（純度≥90%）、銀杏總酮酯（純度≥90%）、西紅花總苷（純度≥90%）混合物，質(zhì)量比5∶7∶1，批號090914]由神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供；阿司匹林腸溶片（批號018170704，規(guī)格100 mg/片）購自石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司；兔VEGF多克隆抗體（批號GTX50153）購自美國GeneTex 公司；兔α7 nAChRs多克隆抗體（批號ab216485）購自英國Abcam公司；ECL Western blot 底物試劑盒（批號WBKLS0500）購自美國Millipore 公司；大鼠β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）單克隆抗體（批號YM3028）購自美國Immunoway公司；辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G 二抗（H+L）和辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗鼠免疫球蛋白G二抗（H+L）（批號分別為S004、S001）均購自天德悅（北京）生物科技有限責(zé)任公司；TRNzol 總RNA 提取試劑（批號DP405-02）購自天根生化科技（北京）有限公司；VEGF、Ang1、bFGF酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（批號分別為20180519A、20180620A、20180625A）均購自北京欣博盛生物科技有限公司；其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格，水為純凈水。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級雄性C57BL/6J 健康小鼠64 只，8 周齡，體質(zhì)量為18～20 g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號為SCXK（京）2019-0008。所有小鼠均飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心屏障級動(dòng)物房（室溫23～25 ℃，相對濕度50%～70%）內(nèi)，并自由攝食和飲水。本實(shí)驗(yàn)方案遵循科技部《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》的動(dòng)物倫理要求，經(jīng)中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號2018XLC012-2）。

2 方法

2.1 CCI模型的建立

所有小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d 后，隨機(jī)分為假手術(shù)組（n＝16）和造模組（n＝48）。造模組小鼠術(shù)前禁食12 h，腹腔麻醉，仰臥固定后行頸部備皮消毒，剪開頸部皮膚，暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈（長度約1 cm），并在血管下墊玻璃紙以保護(hù)周圍組織。將體內(nèi)血栓形成測定儀的刺激電極、溫度感受器鉤于血管和玻璃紙之間，采用80 μA的溫控電流刺激動(dòng)脈血管7 min，若血管遠(yuǎn)端溫度突然下降則表明血管內(nèi)血栓形成，即CCI 模型復(fù)制成功[7]。然后縫合小鼠傷口，保溫飼養(yǎng)，術(shù)后連續(xù)3 d肌內(nèi)注射青霉素鈉20萬單位/d，以預(yù)防感染。取造模24 h后成功存活的小鼠（造模成功率100%）進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。假手術(shù)組小鼠按上述方法操作，但不通電。

2.2 分組與給藥

將造模成功的CCI模型小鼠隨機(jī)分為模型組、阿司匹林組（陽性對照，10 mg/kg）、中藥組（益氣活血中藥組分，33 mg/kg），每組16只。除模型組和假手術(shù)組小鼠灌胃水外，其余各組小鼠灌胃相應(yīng)藥液，每天1 次，連續(xù)8周。阿司匹林組和中藥組的給藥劑量均為臨床等效劑量[8-9]，且前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)該劑量是能引起（生物）等效反應(yīng)的相對藥物劑量。

2.3 小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的檢測

采用跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)檢測各組小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。實(shí)驗(yàn)前，將小鼠放入實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)，適應(yīng)環(huán)境5 min并進(jìn)行學(xué)習(xí)測試；24 h 后，進(jìn)行記憶能力測試，將小鼠放于平臺(tái)上，記錄從放上平臺(tái)至第1次跳下平臺(tái)所需的時(shí)間（即跳臺(tái)潛伏期）和5 min內(nèi)跳下平臺(tái)的次數(shù)（即跳臺(tái)錯(cuò)誤次數(shù)），以此作為學(xué)習(xí)記憶能力的評價(jià)指標(biāo)。

2.4 小鼠腦組織樣本的處理

跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，所有小鼠禁食12 h，于次日麻醉、處死后快速取出完整腦組織，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗干凈。每組隨機(jī)取5只小鼠的左側(cè)腦組織，剝離大腦皮層和海馬組織，分別置于4%中性多聚甲醛溶液中保存；剩余小鼠的腦組織以錫紙包裹并保存于液氮中，置于-80 ℃冰箱中保存。

2.5 小鼠大腦皮層和海馬組織中NVU超微形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察

取“2.4”項(xiàng)下小鼠的大腦皮層和海馬組織，分別用0.1 mol/L 磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，加入1%鋨酸溶液于4 ℃下染色2 h，切塊，脫水；然后放入100%樹脂中，常規(guī)包埋，切片（50 nm），于透射電鏡下觀察各組小鼠大腦皮層和海馬組織中NVU 的超微形態(tài)結(jié)構(gòu)，并隨機(jī)選取10個(gè)視野拍照。

2.6 小鼠腦組織中VEGF 和α7 nAChRs 蛋白表達(dá)的檢測

采用Western blot法進(jìn)行檢測。每組隨機(jī)選取“2.4”項(xiàng)下凍存的5只小鼠的腦組織，經(jīng)裂解、勻漿、靜置后，于4 ℃下以13 000 r/min 離心20 min，取上清液，測定蛋白濃度并于100 ℃下變性。取變性蛋白樣品，進(jìn)行電泳分離并轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜上，封閉后，分別加入VEGF、α7 nAChRs、β-actin 抗體（以含3%牛血清白蛋白的TBST 緩沖液稀釋，稀釋比例分別為1∶500、1∶300、1∶5 000），室溫孵育10 min，4 ℃過夜；加入相應(yīng)二抗（稀釋比例1：10 000），室溫孵育1.5 h；用TBST 緩沖液洗膜6次，每次3 min，隨后加ECL試劑反應(yīng)3～5 min，膠片曝光，顯影2 min，定影。使用Total Lab Quant V11.5 版圖像軟件計(jì)算灰度值，以目標(biāo)蛋白與內(nèi)參（β-actin）的灰度值比值為目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。

2.7 小鼠腦組織中VEGF 和α7 nAChRs mRNA 表達(dá)的檢測

采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法進(jìn)行檢測。每組隨機(jī)選取“2.4”項(xiàng)下凍存的5 只小鼠的腦組織，采用TRNzol 總RNA 提取試劑提取樣本腦組織的總RNA，測定RNA 濃度和純度后進(jìn)行cDNA 反轉(zhuǎn)錄。以所得cDNA 為模板，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。反應(yīng)體系如下：cDNA 模板適量（由1 μg mRNA反轉(zhuǎn)錄所得），2×Master Mix 10 μL，10 μmol/L的上/下游引物各0.5 μL，加水至總體積為18 μL。PCR反應(yīng)程序如下：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，60 ℃退火延伸40 s，共40個(gè)循環(huán)。采用2-ΔΔCt法，以β-actin為內(nèi)參，計(jì)算目標(biāo)基因的表達(dá)水平。各基因引物均由英杰生工生物技術(shù)（北京）有限公司設(shè)計(jì)、合成，引物序列和產(chǎn)物大小見表1。

表1 目標(biāo)基因的引物序列和產(chǎn)物大小

2.8 小鼠腦組織中VEGF、Ang1、bFGF含量的檢測

每組隨機(jī)選取“2.4”項(xiàng)下凍存的5只小鼠的腦組織，嚴(yán)格按照ELISA 試劑盒說明書操作，使用酶標(biāo)儀于450 nm波長處檢測腦組織中VEGF、Ang1、bFGF的含量。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有數(shù)據(jù)均用±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)、Student-Newman-Keuls 檢驗(yàn)或Tamhane’sT2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 益氣活血中藥組分對模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

與假手術(shù)組比較，模型組小鼠跳臺(tái)錯(cuò)誤次數(shù)顯著增多（P＜0.05），跳臺(tái)潛伏期顯著縮短（P＜0.05）。與模型組比較，阿司匹林組和中藥組小鼠跳臺(tái)錯(cuò)誤次數(shù)顯著減少（P＜0.05），中藥組小鼠跳臺(tái)潛伏期顯著延長（P＜0.05）。結(jié)果見表2。

表2 益氣活血中藥組分對CCI模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響（±s，n＝16）

表2 益氣活血中藥組分對CCI模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響（±s，n＝16）

a：與假手術(shù)組比較，P＜0.05；b：與模型組比較，P＜0.05

組別假手術(shù)組模型組阿司匹林組中藥組跳臺(tái)錯(cuò)誤次數(shù)1.27±0.16 2.20±0.37a 1.32±0.33b 1.22±0.45b跳臺(tái)潛伏期/s 226.45±53.12 179.23±55.29a 217.45±64.35 226.76±66.23b

3.2 益氣活血中藥組分對模型小鼠大腦皮層及海馬組織中NVU超微形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

假手術(shù)組小鼠大腦皮層細(xì)胞膜完整，胞漿內(nèi)線粒體、細(xì)胞核形態(tài)和分布基本正常。與假手術(shù)組比較，模型組小鼠大腦皮層內(nèi)線粒體嵴斷裂，微血管內(nèi)皮細(xì)胞周圍水腫，血管壁增生，血管內(nèi)皮細(xì)胞和基底膜正常結(jié)構(gòu)消失，內(nèi)皮細(xì)胞、基底膜和膠質(zhì)細(xì)胞之間的間隙增寬。與模型組比較，各給藥組小鼠細(xì)胞內(nèi)線粒體、內(nèi)皮細(xì)胞和基底膜結(jié)構(gòu)修復(fù)，血管內(nèi)皮細(xì)胞周圍水腫減輕。結(jié)果見圖1。

圖1 益氣活血中藥組分對CCI 模型小鼠大腦皮層中NVU超微形態(tài)結(jié)構(gòu)影響的顯微圖（×20 000）

假手術(shù)組海馬組織細(xì)胞膜完整，核仁形態(tài)正常，線粒體數(shù)量較多且結(jié)構(gòu)基本正常，偶見內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體。與假手術(shù)組比較，模型組小鼠海馬組織神經(jīng)元內(nèi)細(xì)胞器減少，胞質(zhì)固縮，線粒體數(shù)量減少，部分線粒體膜破裂，線粒體嵴模糊并有斷裂現(xiàn)象，基質(zhì)顆粒減少。與模型組比較，各給藥組小鼠海馬組織神經(jīng)元內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量增多，線粒體結(jié)構(gòu)明顯改善，線粒體膜總體清晰，線粒體嵴增多。結(jié)果見圖2。

3.3 益氣活血中藥組分對小鼠腦組織中VEGF 和α7 nAChRs蛋白及mRNA表達(dá)的影響

圖2 益氣活血中藥組分對CCI 模型小鼠海馬組織中NVU超微形態(tài)結(jié)構(gòu)影響的顯微圖（×20 000）

與假手術(shù)組比較，模型組小鼠腦組織中VEGF蛋白及mRNA 的 表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05），α7 nAChRs 蛋白及mRNA 的表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.05）。與模型組比較，中藥組小鼠腦組織中VEGF 和α7 nAChRs 蛋白及mRNA 的表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05）；阿司匹林組小鼠腦組織中VEGF蛋白及mRNA的表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見圖3、圖4。

圖3 益氣活血中藥組分對CCI 模型小鼠腦組織中VEGF、α7 nAChRs 蛋白表達(dá)影響的電泳圖和柱狀圖（n＝5）

圖4 益氣活血中藥組分對CCI 模型小鼠腦組織中VEGF、α7 nAChRs mRNA 表達(dá)影響的柱狀圖（n＝5）

3.4 益氣活血中藥組分對小鼠腦組織中VEGF、Ang1和bFGF含量的影響

與假手術(shù)組比較，模型組小鼠腦組織中VEGF的含量顯著升高（P＜0.05）；bFGF、Ang1 含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組比較，阿司匹林組和中藥組小鼠腦組織中Ang1、bFGF 的含量均顯著升高（P＜0.05），中藥組小鼠腦組織中VEGF的含量顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果見表3。

表3 益氣活血中藥組分對CCI 模型小鼠腦組織中VEGF、Ang1、bFGF 含量的影響（±s，n＝5,ng/mg）

表3 益氣活血中藥組分對CCI 模型小鼠腦組織中VEGF、Ang1、bFGF 含量的影響（±s，n＝5,ng/mg）

a：與假手術(shù)組比較，P＜0.05；b：與模型組比較，P＜0.05

組別假手術(shù)組模型組阿司匹林組中藥組VEGF 9.59±1.23 12.36±2.42a 10.36±2.26 14.38±1.54b Ang1 1.58±0.49 1.49±0.16 1.92±0.55b 2.88±0.70b bFGF 6.35±2.06 6.56±0.54 8.67±2.48b 9.63±2.53b

4 討論

CCI 作為一種腦整體水平血液供應(yīng)減少的病理狀態(tài)，不僅是多種缺血性腦血管疾病的發(fā)病原因，也是VCI的重要致病因素[10]。本研究采用溫控電流刺激小鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促使血小板黏附聚集，造成大腦低灌注，可較好地模擬患者前循環(huán)（頸內(nèi)動(dòng)脈系統(tǒng)）缺血導(dǎo)致CCI 的病理狀態(tài)[11]。因本研究所用CCI模型與血小板聚集致頸總動(dòng)脈血栓栓塞有關(guān)，結(jié)合《慢性腦缺血中西醫(yī)結(jié)合診療專家共識》的推薦（對于血栓形成導(dǎo)致的CCI，臨床應(yīng)重視阿司匹林抗血小板聚集治療）[12]，本研究以阿司匹林作為陽性對照藥物。本研究結(jié)果顯示，模型組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力較假手術(shù)組明顯減退，與既往文獻(xiàn)研究的發(fā)現(xiàn)一致[13]。

NVU理論既與中醫(yī)“整體觀”的思想一致，又強(qiáng)調(diào)了血管在神經(jīng)結(jié)構(gòu)和功能保護(hù)中的重要地位。王大鵬等[14]研究發(fā)現(xiàn)，CCI 發(fā)生時(shí)，NVU 的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生了顯著改變，可見神經(jīng)元凋亡、微血管完整性受損、血腦屏障功能失調(diào)等。本研究觀察到的小鼠腦組織中NVU超微形態(tài)結(jié)構(gòu)的異常改變與上述研究基本一致；同時(shí)，該病理變化伴有小鼠學(xué)習(xí)記憶能力減退。在給予益氣活血中藥組分干預(yù)后，小鼠腦組織病理改變和學(xué)習(xí)記憶能力均有恢復(fù)。這提示CCI致NVU超微形態(tài)結(jié)構(gòu)改變可能是CCI導(dǎo)致認(rèn)知功能受損的病理基礎(chǔ)，且益氣活血中藥組分對這種改變有一定的改善作用。

VEGF 作為NVU 的主要標(biāo)志蛋白之一，可促進(jìn)NVU重塑，對缺血大腦的NVU具有特殊的保護(hù)作用[15]。Ang1 與NVU 密切相關(guān)，當(dāng)腦缺血發(fā)生時(shí)，Ang1 能促進(jìn)微血管生成，維持血腦屏障的完整性，抑制神經(jīng)元凋亡，促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)[16]。bFGF 廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，不僅能營養(yǎng)和保護(hù)神經(jīng)元，還能促進(jìn)微血管的再生，誘導(dǎo)側(cè)支循環(huán)的建立[17]。α7 nAChRs 與記憶能力密切相關(guān)，激活后可減輕缺血腦組織的炎癥反應(yīng)，抑制細(xì)胞凋亡，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[18]。本研究結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組小鼠腦組織中VEGF蛋白和mRNA的表達(dá)均顯著升高，α7 nAChRs蛋白和mRNA的表達(dá)均顯著降低，表明CCI狀態(tài)可影響腦內(nèi)VEGF的表達(dá)，調(diào)控腦組織內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和微血管再生，同時(shí)可影響腦內(nèi)與記憶認(rèn)知功能密切相關(guān)的α7 nAChRs的表達(dá)，影響神經(jīng)元興奮性和神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞，最終直接損傷小鼠認(rèn)知功能。在給予益氣活血中藥組分干預(yù)后，小鼠腦組織 中VEGF、α7 nAChRs 蛋 白 和mRNA 的 表 達(dá) 以 及VEGF、Ang1、bFGF的含量均顯著升高，提示該中藥組分改善CCI 所致認(rèn)知功能障礙的機(jī)制可能與調(diào)控腦內(nèi)與NVU及記憶功能密切相關(guān)蛋白的表達(dá)有關(guān)。

與急性腦血管疾病相比，CCI的可干預(yù)時(shí)間窗更長，早期診治并有效逆轉(zhuǎn)CCI 進(jìn)展對防治VCI 具有重要意義[19]。本研究采用益氣活血中藥組分以臨床等效劑量干預(yù)CCI 模型小鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該中藥組分能夠顯著改善CCI 模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，促使腦內(nèi)與NVU 及記 憶 功 能 密 切 相 關(guān) 的 蛋 白VEGF、Ang1、bFGF、α7 nAChRs 的含量或表達(dá)顯著升高，此舉可促進(jìn)腦組織中血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和微血管再生，有利于腦血管側(cè)支循環(huán)的建立，保護(hù)血腦屏障，恢復(fù)受損的NVU，增強(qiáng)神經(jīng)元興奮性和神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞，從而改善CCI導(dǎo)致的認(rèn)知功能障礙。

綜上所述，益氣活血中藥組分能夠改善CCI所致的小鼠認(rèn)知功能障礙，其機(jī)制可能是通過保護(hù)腦內(nèi)NVU，恢復(fù)受損NVU的超微形態(tài)結(jié)構(gòu)，調(diào)控腦內(nèi)與NVU及記憶功能密切相關(guān)蛋白（VEGF、Ang1、bFGF、α7 nAChRs）的表達(dá)，進(jìn)而改善認(rèn)知功能。