龍爪槐果實(shí)中異黃酮苷的分離與鑒定

陳釔潔，歐嘉瑤，王彩娥，孫思佳，劉思琦，全 程，李金喜

（北方民族大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，寧夏 銀川 750021）

龍爪槐別名垂槐，是槐樹的變種[1]，在我國(guó)廣泛種植[2]，花和果實(shí)都可入藥[3]，也可用于生產(chǎn)保健品、飼料添加劑等?；苯鞘驱堊钡墓麑?shí)，可入中藥，從槐角濃縮物中可分離出氨基酸類、黃酮、生物堿類、糖類等，其中的黃酮成分含量較高且生物活性明顯[4-7]，為此，我們對(duì)槐角的化學(xué)成分進(jìn)行分析，以分離出有活性的成分。

1 儀器與材料

儀器：XFB-500型粉碎機(jī)，P200Ⅱ型液相色譜儀，SB-800D型超聲波，R-1002N型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

材料：色譜甲醇，乙酸乙酯、二氯甲烷、石油醚（AR）。

2 提取與分離

2.1 實(shí)驗(yàn)流程

槐角→晾曬→粉碎→槐角粉→95%乙醇浸泡→超聲波提取→旋蒸→提取物原料

2.2 提取

采摘20kg龍爪槐槐角，自然晾干后用粉碎機(jī)粉碎。稱取槐角粉1kg，置于5L塑料桶中，加入95%乙醇1.5L浸泡12h，用超聲波進(jìn)行提取。設(shè)置水溫為40℃，超聲2h，用紗布過濾。將濾渣置于5L塑料桶中，加入95%乙醇1.5L，繼續(xù)超聲2h，過濾，重復(fù)1次，濃縮所得的乙醇提取液。

2.3 分子網(wǎng)絡(luò)化

采用固相萃取柱（反相C-18填料），分別用水、50%甲醇溶液、90%甲醇溶液洗脫，得到3種樣品，用LC-Ms/Ms進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)化分析，分析HPLC-MS/MS，繪制的分子網(wǎng)絡(luò)化圖如圖1所示，每個(gè)節(jié)點(diǎn)代表一個(gè)化合物，由圖1可知有100多個(gè)化合物。

2.4 粗產(chǎn)物的分離

向得到的100g濃縮液中加水，用乙酸乙酯萃取，濃縮，再向濃縮液中加水，用二氯甲烷萃取，濃縮。用柱層析進(jìn)行分離，先按V(二氯甲烷)∶V(石油醚)=1∶20進(jìn)行淋洗，然后逐漸加大極性，換成二氯甲烷和乙酸乙酯，繼續(xù)淋洗，繼續(xù)加大極性，用甲醇、二氯甲烷和乙酸乙酯三體系進(jìn)行粗分離，得到12瓶不同極性的混合物。取其中1瓶進(jìn)行柱色譜分離，用試管分別裝入不同的產(chǎn)物，部分TLC點(diǎn)板圖如圖2所示。

2.5 單體化合物的分離

用semi-液相色譜分離第2個(gè)試管的樣品，以分離純化出相應(yīng)的單體化合物。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1為淡黃色粉末，(+)-ESI-MS所得的分子離子峰為433.4[M+H]+。根據(jù)1H NMR(圖3)，可以看出 6.40(1H，H-8)和6.24(1H，H-6)是異黃酮中苯環(huán)上的特征信號(hào)，初步判斷為異黃酮。4.92(1H，H-1”)、3.70(1H ，H-4”)、3.46(2H，H-6”)、3.27(2H，H-2”，3”)、 3.17(1H，H-5”) 這5組特征信號(hào)為葡萄糖。由上述結(jié)果可以看出，該化合物應(yīng)為異黃酮苷。12.92(1H，5-OH)為異黃酮五位上的特征信號(hào)，是因?yàn)樗着c四位酮形成分子內(nèi)的氫鍵，特征信號(hào)出現(xiàn)在12.92。8.40(1H， H-2)為二位連氧烯鍵信號(hào)，7.49(2H，H-2’，6’)和 7.10 (2H， H-3’， 5’)是三位連苯環(huán)質(zhì)子信號(hào)。

碳譜(圖4)給出了所有的碳信號(hào)，包括低場(chǎng) 區(qū) 的 芳 基 碳：δ(×10-6) 164.4(C7)，162.0(C5)，157.6(C4’)，157.3(C9)，154.4(C2)，130.1(C2’,6’)，124.2(C3)，121.9(C1’)，116.1(C3’,5’)。104.4(C10)為十位季碳；99.1(C6)、93.8(C8)為苯環(huán)中六位、八位的碳；100.3(C1”)、77.1(C3”)、76.6(C5”)、73.2(C2”)、69.7(C4”)、60.7(C6”)為葡萄糖中的特征碳。

化 合 物1，黃 色 粉 末 狀 固 體，ESI-MS(m/z)：433.4[M+H]+。1HNMR(DMSO-d6，400MHz，δ)：12.92(1H，5-OH)，8.40(1H，H-2)，7.49(2H，H-2’，6’)，7.10(2H，J=8.0，H-3’，5’)，6.40(1H，H-8)，6.24(1H，H-6)，4.92(1H，H-1”)，3.70(1H，H-4”)，3.46(2H，H-6”)， 3.27(2H，3”)，3.17(1H，H-5”)。

13CNMR(100MHz，DMSO-d6，δ)：180.05(C4)，164.4(C7)，162.0(C5)，157.6(C4’)，157.3(C9)，154.4(C2)，130.1(C2’,6’)，124.2(C3)，121.9(C1’)，116.1(C3’,5’)，104.4(C10)，100.3(C1”)，99.1(C6)，93.8(C8)，77.1(C3”)，76.6(C5”)，73.2(C2”)，69.7(C4”)，60.7(C6”)。通過查閱文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)該化合物和Anti-oxidative Phenolic Compounds from Sophorae Fructus[8]中報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，因此可以確定，化合物為Genistein-4′-O-β-D-glucopyranoside（染料木黃酮-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷）。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用超聲波提取龍爪槐果實(shí)中的化學(xué)成分，采用柱層析、薄層色譜和高效液相色譜，對(duì)處理后的槐角提取物進(jìn)行高效有序的分離，利用分子網(wǎng)絡(luò)化系統(tǒng)，分析樣品中的化學(xué)成分。通過核磁分析，確定分離的產(chǎn)物為染料木黃酮-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。為了使槐角的藥用價(jià)值得到充分利用，仍需對(duì)槐角的藥用成分進(jìn)行進(jìn)一步的探索和研究。