老年高脂血癥患者血脂水平與ADCY3基因rs10187348位點基因多態(tài)性的關(guān)系

甘福生 劉小梅 陳智華 盧磊 章燕 趙國榮

(江西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院 1檢驗科，江西 南昌 330012；2心腦血管科；3體檢科)

高脂血癥的典型臨床病理改變是血清中總膽固醇(TC)或三酰甘油(TG)水平顯著升高，實際臨床中也包括高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平下降，特別是老年人屬于高脂血癥的高發(fā)人群〔1〕。血脂水平改變與多種心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展存在緊密聯(lián)系，是冠脈粥樣硬化、冠心病及缺血性腦卒中等疾病的獨立危險因素〔2〕。血脂水平發(fā)生異常不僅與平時飲食和運動習慣具有密切聯(lián)系，遺傳因素在高脂血癥的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，某些基因突變或缺陷會導(dǎo)致機體的脂肪吸收、分解、合成代謝過程發(fā)生差異化改變，從而誘發(fā)嚴重的高脂血癥〔3〕。腺苷酸環(huán)化酶(ADCY)是人體細胞膜中廣泛存在的一種酶類，ADCY的9種亞型均在腺苷三磷酸(ATP)生成環(huán)磷酸腺苷(cAMP)過程中發(fā)揮關(guān)鍵催化作用，ADCY3 就屬于關(guān)鍵成員之一〔4〕?，F(xiàn)已有一些研究證實ADCY3基因多態(tài)性與肥胖和脂肪肝等疾病存在密切聯(lián)系，但它與機體脂質(zhì)代謝異常之間的關(guān)系特別是與高脂血癥各血脂異常種類或亞組之間的關(guān)系尚未見詳細報道。本文研究旨在探討高脂血癥患者血脂異常影響因素及該位點基因多態(tài)性與血脂異常易感性之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇江西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院于2018年1月至2020年3月收治的568例老年高脂血癥患者為研究組，并以同期128例健康體檢者作為對照組。納入標準：①研究組患者均符合高脂血癥診斷標準〔5〕：滿足高TG血癥組(TG≥1.70 mmol/L)或低HDL-C血癥組(HDL-C<1.04 mmol/L)或高TC血癥組(TC≥5.18 mmol/L)或混合型高脂血癥組(TG≥1.70 mmol/L、TC≥5.18 mmol/L)；②對照組各項檢查指標均符合要求；③知情同意并簽字。排除標準：①合并其他嚴重心、肝、腎等重要臟器功能異?；蚓窦膊≌?；②中途退出研究者；③3個月內(nèi)使用降血脂相關(guān)藥物者。所有患者在知情同意書上簽字，研究方案已得到醫(yī)院倫理委員會準許。

1.2一般臨床信息收集 對所有研究對象的一般臨床信息進行收集。包括性別、年齡、收縮壓、舒張壓、吸煙和飲酒史。其中吸煙者定義為曾經(jīng)吸煙總數(shù)≥100支；飲酒者定義為受試者每年的飲酒次數(shù)≥12次。

1.3DNA基因提取及ADCY3基因rs10187348位點基因分型檢測 分別于患者接受治療前抽取外周靜脈血3 ml并置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中保存，采用DNA提取試劑盒(型號：QIAGEN DNeasy Blood &Tissue)對基因組DNA進行提取，然后采用連接酶檢測反應(yīng)技術(shù)(LDR)對基因型進行SNP分型檢測。ADCY3基因rs10187348位點引物序列為上游引物：CCCGATCTCGCCTCTTTCAC，下游引物：TTCTGCTTGACATTCACCTAAAT。然后使用PCR試劑盒對cDNA進行PCR。PCR體系為：1.0 μl DNA樣本，1.5 μl GC-I緩沖液，1.5 μl MgCl2；1.0 μl dNTP，1.0 μl/條引物，加超純水補至10 μl。PCR條件為95℃ 1 min，94℃ 20 s，63℃ 45 s，72℃ 1.5 min；連續(xù)循環(huán)32次。最后采用測序儀(軟件GeneMapper4.1)對基因進行測序分型，分型為GG、CG及CC型。

1.4血脂等生化指標檢測 采集患者清晨空腹外周靜脈血標本。采用全自動生化分析儀(廠家：邁瑞醫(yī)療；型號：BS-330E)測定血脂指標〔TC、TG、HDL-C、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)〕及血糖(GLU)水平。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進行t檢驗、χ2檢驗、方差分析、LSD-t檢驗、Logistic回歸分析、Hardy-Weinberg平衡檢驗。

2 結(jié) 果

2.1兩組一般資料比較 研究組吸煙者比例、收縮壓、舒張壓、體重指數(shù)、TG、TC及LDL-C 水平均顯著高于對照組(P<0.05)，但兩組性別、飲酒者比例、年齡、GLU及HDL-C 水平之間無明顯差異(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2兩組基因分型比較 ADCY3基因rs10187348位點分布3種基因型：研究組和對照組中ADCY3基因rs10187348位點基因型(GG、CG、CC)期望值和觀測值符合Hardy-Weinberg平衡定律(χ2=1.466，P=0.481；χ2=2.854，P=0.240)；兩組基因型分布差異顯著,且研究組CC型基因頻率和C等位基因頻率明顯高于對照組，GG型基因頻率和G等位基因頻率明顯低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 ADCY3基因rs10187348位點基因型分布情況〔n(%)〕

2.3研究組各亞組的基因多態(tài)性分析 研究組各亞組C等位基因明顯高于對照組，除混合型高脂血癥組患者外，其他亞組的GG、CC基因頻率和和G等位基因頻率明顯低于對照組(均P<0.05)。見表3。

表3 高脂血癥組各亞組的血脂基因多態(tài)性分析〔n(%)〕

2.4各遺傳模型下基因多態(tài)性與血脂水平異常相關(guān)性的多元Logistic分析 對血脂水平可能產(chǎn)生影響的影響因素(高血壓、吸煙、體重指數(shù))等進行校正后，等位基因模型、加性模型、顯隱性模型及純合子模型下的DCY3基因rs10187348位點基因多態(tài)性均與血脂異常之間存在顯著相關(guān)性(P<0.05)。見表4。

表4 各遺傳模型下基因多態(tài)性與血脂水平異常相關(guān)性的多元Logistic分析

2.5血脂水平影響因素的多元線性回歸分析 以血脂水平(異常=1，正常=0)為因變量，以ADCY3基因rs10187348位點基因型為自變量進行多元線性回歸分析。結(jié)果顯示基因型GG和CC均與各血脂指標水平存在顯著線性相關(guān)性(P<0.05，P<0.001)。其中基因型GG是高脂血癥患者的血脂異常保護因素，基因型CC屬于血脂異常的獨立危險因素。見表5。

表5 血脂水平影響因素的多元線性回歸分析

3 討 論

高脂血癥的發(fā)生和發(fā)展過程與血脂代謝異常具有緊密聯(lián)系，是一個復(fù)雜的生物學(xué)過程。研究證實，高脂血癥的重要發(fā)病機制之一是與脂代謝有關(guān)的基因變異，進而導(dǎo)致脂蛋白降解酶活性下降，從而使機體內(nèi)的脂蛋白的代謝速度減慢或清除量降低，最終表現(xiàn)為各種類型的血脂指標水平異?！?〕。

ADCY3基因在染色體上的位置位于2p23.3上，共由26個外顯子構(gòu)成，ADCY酶3為該基因編碼生成的重要產(chǎn)物。ADCY3作為一種膜結(jié)合酶，其在機體組織中廣泛存在，在參與機體內(nèi)多種重要生理和病理代謝過程發(fā)揮關(guān)鍵作用〔7〕。多項全基因組關(guān)聯(lián)分析 (GWAS)研究結(jié)果證實ADCY3基因的多個位點均與肥胖或超重及高體質(zhì)指數(shù)之間存在密切相關(guān)性〔8，9〕。潘玲雁等〔10〕最近研究結(jié)果揭示肥胖所致的重要并發(fā)癥-脂肪肝也與ADCY3基因多態(tài)性之間具有密切聯(lián)系，認為ADCY3基因可能是通過影響TNF-α等炎性因子的濃度進而參與脂肪肝的發(fā)生發(fā)展。近來陳鋆等〔11〕結(jié)果顯示，rs10187348、rs6751537、rs11689546、rs4077678、rs7608976、rs13-44840位點的突變基因型均與TC發(fā)生顯著升高存在聯(lián)系及rs1344840、rs1127568、rs6751537位點的突變基因型與TG升高有關(guān)，rs1344840、rs7608976、rs4077678及rs11689546位點突變基因型與LDL-C的升高有關(guān)，提示ADCY3基因多態(tài)性與血脂水平異常之間存在關(guān)聯(lián)。且Saeed等〔12〕研究證實ADCY3基因的rs10187348位點CC基因型、rs4665273位點TT基因型、rs2278485位點的GG基因型等均屬于超重/肥胖的獨立危險因素。這為本文進一步研究ADCY3基因與高脂血癥血脂異常水平之間的關(guān)系提供新的研究方向。

本研究結(jié)果提示ADCY3基因rs10187348位點基因多態(tài)性與高脂血癥之間存在一定聯(lián)系。由于血脂代謝過程的調(diào)控機制非常復(fù)雜，血脂異常通常為多種血脂指標異常情況的統(tǒng)稱，且不同血脂指標如TG、TC的代謝途徑也存在差異〔13，14〕。

本研究多元線性回歸分析結(jié)果與Saeed等〔12〕研究顯示攜帶rs10187348位點CC基因型人群患發(fā)超重/肥胖風險更高具有一致性。Meng等〔15〕通過動物實驗研究進一步證實ADCY3基因參與大鼠下丘腦調(diào)控過程并發(fā)揮關(guān)鍵作用，而當下丘腦的信號傳導(dǎo)通路出現(xiàn)功能障礙時，就會影響機體的能量和脂肪代謝過程，導(dǎo)致體內(nèi)脂肪蓄積量增加，進而產(chǎn)生脂肪肝、高脂血癥等脂肪代謝性疾病。因此推測ADCY3基因rs10187348位點基因多態(tài)性對高脂血癥患者血脂水平的影響可能也與該基因參與機體脂質(zhì)代謝過程有關(guān)，但具體作用機制仍研究。

綜上，老年高脂血患者ADCY3基因rs10187348位點多態(tài)性與血脂異常之間存在顯著相關(guān)性，其中基因型CC屬于高脂血癥血脂異常的獨立危險因素?？梢栽谂R床中對發(fā)生該基因突變的人群采取進行進一步預(yù)防措施，以降低高脂血癥患發(fā)風險。