冷藏對米蛾卵繁育廣赤眼蜂的影響

林思誠，王 祥，冼子耀，卜蜜源

(茂名市林業(yè)科學(xué)研究所,廣東 茂名 525000)

黃野螟(Heortiavitessoides)屬鱗翅目螟蛾科，是一種以幼蟲取食土沉香樹葉的害蟲，廣泛分布于我國的廣東、廣西、海南和云南等省份[1-2]，在我國土沉香種植區(qū)普遍發(fā)生，茂名地區(qū)1年發(fā)生8代[3]，被害株率一般可達(dá)30%[2]，影響樹木健康生長，嚴(yán)重時吃光樹葉，啃食樹干及枝條皮層[3]，導(dǎo)致沉香樹木死亡，影響土沉香樹體結(jié)香，經(jīng)濟(jì)損失巨大。目前，林間主要使用噴灑化學(xué)藥劑滅殺幼蟲的方法減少黃野螟的危害，但存在操作不便、工作量大、增加害蟲抗藥性、降低天敵種群、環(huán)境安全和產(chǎn)品藥殘超標(biāo)等問題，不能滿足沉香產(chǎn)業(yè)綠色安全發(fā)展需求。研究人員圍繞植物提取物、生防菌、生物制劑、天敵、性信息素、殺蟲燈和蜜源植物誘殺等進(jìn)行了生物防治和物理防治黃野螟的研究，但尚未進(jìn)行大面積田間應(yīng)用。

廣赤眼蜂(Trichogrammaevanescens)是黃野螟的自然天敵之一[4]。作為一種可以寄生多種鱗翅目昆蟲卵的優(yōu)良天敵，在田間試驗(yàn)及大面積應(yīng)用中取得了很好的效果。由于溫度對赤眼蜂生長發(fā)育的影響非常重要，因此掌握合適的溫度對大量繁殖利用赤眼蜂尤為重要。廣赤眼蜂(菜白蝶型)的適溫范圍為22～30 ℃，最適溫度為24 ℃，發(fā)育起點(diǎn)溫度為11.41 ℃，有效積溫為129.76日度[5]。連梅力等[6]研究了溫濕度對廣赤眼蜂的影響，在35 ℃條件下羽化出蜂率為3.33%～4.32%，在15～32 ℃條件下羽化出蜂率為80%以上；相對濕度在45%以上時，羽化出蜂率為80%以上，相對濕度在33%～45%之間，羽化出蜂率為50%左右，相對濕度在23%時，羽化出蜂率為27.14%。蔡寧華等[7]試驗(yàn)得出，在溫度30 ℃，相對濕度70%組合下雌蜂日產(chǎn)卵量最高、r值最大，說明廣赤眼蜂在高溫及較大濕度條件下繁殖能力強(qiáng)。

在赤眼蜂大量繁殖及應(yīng)用過程中，為了延長替代寄主卵和赤眼蜂產(chǎn)品的保質(zhì)期、累積蜂量和調(diào)控放蜂時間[8-9]，主要有低溫冷藏替代寄主卵和滯育兩種技術(shù)措施[10]。但替代寄主卵冷藏超過30 d后羽化率降低，畸形蜂增加，赤眼蜂質(zhì)量受到嚴(yán)重影響[11]。廣東省昆蟲所(1982—1983)以廣赤眼蜂寄生經(jīng)液氮長期冷凍過的米蛾卵，寄生率高達(dá)42.08%[12]。朱滌芳等[13]對廣赤眼蜂滯育及貯存技術(shù)進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：15 ℃恒溫或11～23 ℃變溫處理，可誘導(dǎo)廣赤眼蜂滯育，在15～23 ℃下的滯育率為71.67%，在11～23 ℃下的滯育率為92.16%；在末齡幼蟲前進(jìn)行滯育的廣赤眼蜂貯存4～5個月羽化率最高，貯存10個月仍有一半左右的蜂能羽化，且發(fā)育正常。張俊杰等[10]報道，低溫是引起赤眼蜂滯育的最主要因素，光周期是誘導(dǎo)赤眼蜂滯育的另一重要因素，母代效應(yīng)、寄主、誘導(dǎo)時期等也影響赤眼蜂滯育。廣東省昆蟲研究所[14-15]對長期儲存赤眼蜂的研究結(jié)果表明，低溫保存方法不當(dāng)，常引起赤眼蜂的生存生活能力下降，影響繁蜂質(zhì)量、繁蜂速度和田間應(yīng)用效果。結(jié)合生產(chǎn)應(yīng)用需要，筆者試驗(yàn)研究了米蛾卵和廣赤眼蜂在不同溫度下及冷藏天數(shù)后的發(fā)育情況，以期延長米蛾卵及廣赤眼蜂產(chǎn)品的保質(zhì)期，為大量繁育和利用廣赤眼蜂防治黃野螟提供重要參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試米蛾卵和廣赤眼蜂來源于本單位繁殖。儀器設(shè)備為上海百典儀器設(shè)備有限公司PR X-450B智能人工氣候箱、上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠SW-CJ-1FD凈化工作臺、成都勵揚(yáng)精密機(jī)電有限公司LY-WN-YC600昆蟲超清顯微系統(tǒng)(像素207萬)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 米蛾卵滅活 將未滅活的1日齡米蛾卵單層平鋪在培養(yǎng)皿(直徑9 cm)中，置于凈化工作臺，單支30 W紫外燈距卵20 cm，照射45 min后，米蛾卵滅活率100%。

1.2.2 卵卡制作 用80 g·m-2的A4打印紙打印出卵卡底板(長4 cm×寬2 cm)，將剪下的雙面膠紙(長1.0 cm×寬0.5 cm)粘在底板某一面的正中央位置。然后揭開雙面膠紙上的離型紙，再用鑷子夾住底板，將米蛾卵均勻撒滿在雙面膠紙上，敲擊鑷子震落掉多余的米蛾卵，即制成載卵量約300?！?1的卵卡。

1.2.3 蜂卡制作 將滅活的米蛾卵制作的卵卡放入有近千頭廣赤眼蜂的指形管(直徑2.8 cm×12.0 cm)中進(jìn)行接蜂，24 h后取出，蜂卡制作完畢。

1.2.4 篩選保存米蛾卵和廣赤眼蜂的適宜溫度 將單張用未滅活的1日齡米蛾卵制成的卵卡放入塑料指形管(直徑2.8 cm×12.0 cm)，置于相對濕度為75%，溫度分別為25 ℃(CK)的養(yǎng)蟲室和10 ℃、7 ℃、5 ℃的智能人工氣候箱中，光周期L//D=16 h//8 h。每處理3個重復(fù)。在昆蟲超清顯微系統(tǒng)下，每天觀察一次卵卡孵出幼蟲情況，連續(xù)觀察7 d。將蜂卡在25 ℃養(yǎng)蟲室培育4 d后，再將單張蜂卡放入塑料指形管(直徑2.8 cm×12.0 cm)，置于相對濕度為75%，溫度分別為25 ℃(CK)的養(yǎng)蟲室和10 ℃、7 ℃、5 ℃的智能人工氣候箱中，光周期L//D=16 h//8h。每處理3個重復(fù)。在昆蟲超清顯微系統(tǒng)下，每天觀察一次蜂卡羽化出蜂情況，連續(xù)觀察7 d。

1.2.5 冷藏天數(shù)對廣赤眼蜂羽化的影響 將蜂卡在25 ℃養(yǎng)蟲室培育4日后，再將單張蜂卡放入塑料指形管(直徑2.8 cm×12.0 cm)，置于適宜溫度和相對濕度為75%的智能人工氣候箱中冷藏，光周期L//D=16 h//8 h。冷藏時間分別為0(CK)、7 d、14 d、21 d、28 d。每處理3個重復(fù)。冷藏后將蜂卡放置在25 ℃相對濕度為75%的養(yǎng)蟲室，在昆蟲超清顯微系統(tǒng)下，每天觀察一次，連續(xù)觀察7 d，記錄羽化歷期、羽化率、雌雄性比、發(fā)育狀況等。

1.2.6 不同冷藏天數(shù)后的米蛾卵對廣赤眼蜂羽化的影響 將單張用滅活的1日齡米蛾卵制成的卵卡放入塑料指形管(直徑2.8 cm×12.0 cm)，置于適宜溫度和75%RH的培養(yǎng)箱中冷藏，光周期L//D=16 h//8 h。冷藏時間分別為0(CK)、7d、14 d、21 d、28 d。每處理3個重復(fù)。冷藏后將卵卡接蜂24 h后，置于25 ℃相對濕度為75%的養(yǎng)蟲室，光周期L//D=16 h//8 h。每天觀察一次，連續(xù)觀察7 d，記錄蜂卡的羽化歷期、羽化率、雌雄性比、發(fā)育狀況等。

1.3 數(shù)據(jù)分析

用Excel 2007軟件和SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 保存米蛾卵和廣赤眼蜂的適宜溫度

試驗(yàn)觀察不同冷藏溫度下米蛾卵孵化和廣赤眼蜂羽化的情況，結(jié)果顯示：在5 ℃條件下冷藏7 d，未見有米蛾卵孵出幼蟲，未見有廣赤眼蜂羽化出蜂；7 d后置于25 ℃條件下，未見有米蛾卵孵出幼蟲，未見有廣赤眼蜂羽化出蜂。在10 ℃條件下冷藏7 d，有米蛾卵孵出幼蟲，有廣赤眼蜂羽化出蜂。在7 ℃條件下冷藏7 d，未見有米蛾卵孵出幼蟲，未見有廣赤眼蜂羽化出蜂；7 d后置于25 ℃條件下，有米蛾卵孵出幼蟲，有廣赤眼蜂羽化出蜂。因此，7 ℃是可以保存米蛾卵和廣赤眼蜂一段時間并使其具有一定發(fā)育能力的適宜溫度。

2.2 冷藏天數(shù)對廣赤眼蜂羽化的影響

不同冷藏天數(shù)后廣赤眼蜂羽化情況見表1。由表1可知：各處理與CK相比，在羽化歷期方面無顯著差異；在羽化率方面冷藏7 d無顯著差異，冷藏14 d、21 d和28 d有顯著差異，且呈不斷下降趨勢；在雌雄性比方面有顯著差異，且呈不斷增加趨勢；在發(fā)育狀況方面都是健康的。

表1 不同冷藏天數(shù)后廣赤眼蜂羽化情況Tab.1 EmergenceofTrichogrammaevanescensafterdif-ferentcoldstoragedays冷藏天數(shù)/d羽化歷期/d羽化率/%雌雄性比發(fā)育健康0(CK)10.0±0.00a89.07±2.63a1.9±0.26a是710.0±0.00a90.36±1.46a3.4±0.34b是1411.0±0.00a81.17±4.33b4.3±0.45b是2111.0±0.00a59.48±2.40c6.8±0.45c是2811.0±0.00a33.86±1.49d9.0±1.10d是 注:每24h觀察一次廣赤眼蜂發(fā)育情況,按四舍五入法統(tǒng)計羽化歷期;同列不同小寫字母表示不同處理間差異顯著( =0.05)。下同。

2.3 冷藏天數(shù)對米蛾卵繁育廣赤眼蜂的影響

不同冷藏天數(shù)后的米蛾卵繁育的廣赤眼蜂羽化情況見表2。由表2可知：各處理與CK相比，在羽化歷期方面無顯著差異;在羽化率方面，冷藏7d無顯著差異，冷藏14 d、21 d和28 d有顯著差異，且呈不斷下降趨勢；在雌雄性比方面，冷藏7d、14 d、21 d無顯著差異，冷藏28d有顯著差異，且呈增加趨勢;在發(fā)育狀況方面都是健康。

表2 不同冷藏天數(shù)后的米蛾卵繁育的廣赤眼蜂羽化情況Tab.2 EmergenceofTrichogrammaevanescensbredbyCorcyracephalonicaeggsafterdifferentcoldstor-agedays冷藏天數(shù)/d羽化歷期/d羽化率/%雌雄性比發(fā)育健康0(CK)10.0±0.00a87.58±2.03a3.3±0.33a是710.0±0.00a85.43±2.93ab3.2±0.41a是1411.0±0.00a82.40±2.49b3.7±1.02a是2111.0±0.00a52.64±3.25c3.4±0.57a是2811.0±0.00a43.08±4.67d5.5±0.57b是

3 結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明，7 ℃是保存米蛾卵和廣赤眼蜂的適宜溫度。與朱滌芳等[13]的15 ℃恒溫可誘導(dǎo)廣赤眼蜂滯育的研究結(jié)果有較大差異，可能原因是選擇開始冷藏的廣赤眼蜂的發(fā)育階段不同，本試驗(yàn)研究是預(yù)蛹期，后者是末齡幼蟲期。

廣赤眼蜂在7 ℃條件下冷藏后，其羽化率與CK(89.07%)相比，冷藏7 d、14 d、21 d和28d的羽化率分別為90.36%、81.17%、59.48%和33.86%，呈現(xiàn)出隨著冷藏時間增加，羽化率越來越低的趨勢。而羽化歷期和發(fā)育狀況無顯著影響，雌雄性比影響顯著。

米蛾卵在7 ℃條件下冷藏后，繁育的廣赤眼蜂的羽化率與CK(87.58%)相比，冷藏7 d、14 d、21 d和28 d的羽化率分別為85.43%、82.40%、52.64%和43.08%，呈現(xiàn)出隨著冷藏時間增加，羽化率越來越低的趨勢。而羽化歷期和發(fā)育狀況無顯著影響，雌雄性比影響顯著。

我們建議，在實(shí)際生產(chǎn)中，可以根據(jù)繁蜂、放蜂防治應(yīng)用、保種等不同目的選擇合適的冷藏天數(shù)，以保證廣赤眼蜂有適當(dāng)?shù)挠鸹屎徒】捣N群。關(guān)于冷藏其他發(fā)育期的廣赤眼蜂的繁育情況，有必要做進(jìn)一步的研究。