2022 年上半年河北省豬繁殖與呼吸綜合征病毒流行病學(xué)調(diào)查及分析

王福厚，葛生虎

（1.甘肅省畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，甘肅 武威 733006；2.河北銘諸生物科技有限公司，河北 邢臺(tái) 054000）

豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）又稱為豬藍(lán)耳病病毒，其感染豬后可引起豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）。不同發(fā)育階段豬群感染豬繁殖與呼吸綜合征后所表現(xiàn)的臨床特征差異明顯，但主要以妊娠母豬繁殖障礙和其它不同發(fā)育階段豬群高熱為主[1]，此外，該病原感染宿主后可造成嚴(yán)重的免疫抑制，導(dǎo)致疫苗免疫效果不佳，且容易出現(xiàn)繼發(fā)感染其它病原，給豬場(chǎng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2]。

PRRSV首次報(bào)道于美國（1987年），其后該病原受到廣泛關(guān)注，且其它地區(qū)相繼報(bào)道該病原的出現(xiàn)。1995年末我國首次報(bào)道PRRS的流行；2006年國內(nèi)諸多地區(qū)流行高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（HP-PRRS），感染該病豬群可出現(xiàn)極高的病死率，一度給部分養(yǎng)豬企業(yè)造成毀滅性打擊[1]。其后，2013—2014年，國內(nèi)再次流行NADC30-like毒株；且2017年我國遼寧省來源豬病料樣品中檢測(cè)到NADC34-like毒株的存在，這意味著目前國內(nèi)PRRSV流行毒株基因型具有很高的多樣性和復(fù)雜性[3]。不同基因型PRRSV毒株感染臨床表現(xiàn)和病理變化等存在較大差異，采用分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)PRRSV毒株進(jìn)行基因型鑒定十分必要，其可為PRRS的早期診斷與防控提供科學(xué)依據(jù)。

為了解當(dāng)前河北省PRRSV流行情況及基因型分布特征，本研究于2022年1—6月從河北8個(gè)市共采集疑似PRRS感染病豬組織樣品315份，采用熒光定量RT-PCR法檢測(cè)PRRSV流行情況，其后使用不同基因型PRRSV鑒別診斷熒光定量RT-PCR試劑盒對(duì)部分PRRSV陽性毒株基因型進(jìn)行鑒定，為該地區(qū)PRRS的防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2022年1—6月，從河北邢臺(tái)市（63份）、邯鄲市（87份）、石家莊（55份）、衡水市（38份）、保定市（16份）、滄州市（37份）、廊坊市（6份）和張家口市（13份）共采集疑似PRRS感染病豬組織樣品共315份，組織樣品包括淋巴結(jié)、肺臟、流產(chǎn)胎兒等。組織病料采集后保存于封口袋，低溫冷藏送至河北銘諸生物科技有限公司進(jìn)行病原檢測(cè)。

1.2 臨床樣品處理及檢測(cè)

采取常規(guī)操作流程處理組織樣品[4]，采用RNA/DNA基因組提取試劑盒提取組織樣品基因組，其后采用cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒將基因組中RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，保存于-20 ℃，待檢。

以cDNA基因組為模板，以商業(yè)化豬繁殖與呼吸綜合征病毒通用型熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒（洛陽萊普信息科技有限公司產(chǎn)品）檢測(cè)基因組中是否存在PRRSV核酸，每次檢測(cè)均設(shè)置陽性和陰性對(duì)照。操作步驟及反應(yīng)條件參考試劑盒說明書進(jìn)行。若樣品Ct值小于或等于35則判定為陽性；Ct值大于38則判定為陰性；Ct值為35～38，則為可疑。

1.3 部分PRRSV陽性毒株基因型確定

為確定河北省部分地區(qū)流行PRRSV毒株基因型特征，分別采用豬繁殖與呼吸綜合征病毒美洲型經(jīng)典株/高致病性/NADC30株核酸熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒（杭州博日科技股份有限公司產(chǎn)品）和NADC34株核酸熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒（杭州博日科技股份有限公司產(chǎn)品）對(duì)28份PRRSV陽性樣品毒株基因型進(jìn)行分型。檢測(cè)體系、操作流程及結(jié)果判定均嚴(yán)格參考各試劑盒說明書，且每次檢測(cè)均設(shè)置陽性和陰性對(duì)照。

2 結(jié)果

2.1 河北省部分地區(qū)PRRSV流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果

為初步調(diào)查當(dāng)前河北省PRRSV流行情況，本研究于2022年1—6月從河北部分地區(qū)采集疑似PRRS感染豬組織樣品共315份，采用熒光定量RTPCR法檢測(cè)樣品中是否存在PRRSV核酸。結(jié)果如表1所示，共58份樣品為PRRSV核酸陽性，平均檢出率為18.41%。不同地區(qū)均檢出PRRSV陽性樣品，但檢出率存在差異，其中以石家莊樣品檢出率最高，為30.91%（17/55），而邯鄲、滄州和張家口樣品檢出率較低，分別為12.64%（11/87）、13.51%（5/37）和7.7%（1/13）。

表1 河北省不同地區(qū)PRRSV分子流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果

2.2 不同類型樣品PRRSV核酸檢出情況

在本研究中，收集的315份臨床樣品按照流產(chǎn)胎兒（繁殖障礙性疾?。?、肺臟和淋巴結(jié)（呼吸障礙綜合征）進(jìn)行區(qū)分，對(duì)比不同類型臨床樣品PRRSV核酸檢出率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，妊娠母豬繁殖障礙性疾病來源組織樣品（流產(chǎn)胎兒）PRRSV核酸檢出率較呼吸障礙綜合征來源組織樣品（如肺臟和淋巴結(jié)）高，其陽性率分別為21.33%（45/211）和12.50%（13/104），見表2。

表2 不同類型樣品PRRSV核酸檢出情況

2.3 河北省部分地區(qū)PRRSV流行株基因型分布特征

為進(jìn)一步確定河北省部分地區(qū)流行PRRSV毒株基因型，筆者使用兩種試劑盒分別對(duì)28個(gè)PRRSV毒株基因型進(jìn)行鑒定。結(jié)果如表3所示，河北省同時(shí)流行4種不同基因型，分別為經(jīng)典型、高致病型、NADC-30 like毒株和NADC-34 like毒株，但所占比例差異較大，其中以高致病型和經(jīng)典型所占比例更高，分別為42.86%（12/28）和35.71%（10/28）；而NADC30-like毒株和NADC34-like毒株所占比例稍低，分別為17.86%（5/28）和3.57%（1/28）。

表3 河北省部分地區(qū)PRRSV流行株基因型分布特征

3 討論

近年來，河北省生豬養(yǎng)殖業(yè)無論是出欄量還是養(yǎng)殖模式都發(fā)生了很大的變化，同時(shí)對(duì)疫病防控也更加嚴(yán)格。然而，PRRS仍然還廣泛流行于河北省各地區(qū)，特別是近年來新的PRRSV基因型毒株頻發(fā)，且不同基因型毒株對(duì)患豬致病力存在差異，這無疑給當(dāng)?shù)厣i養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展帶來巨大的威脅，同時(shí)調(diào)查PRRSV流行情況和不同基因型分布情況對(duì)該病的防控也可提供科學(xué)的依據(jù)[2-3]。

本研究近期對(duì)河北省部分疑似感染PRRS豬病料樣品進(jìn)行PRRSV病原檢測(cè)。其結(jié)果發(fā)現(xiàn)，近20%臨床組織樣品為PRRSV核酸陽性，且各地區(qū)送檢樣品中均存在陽性樣品，說明目前該病原已廣泛流行于河北各地區(qū)。此外，這也說明目前河北省生豬養(yǎng)殖業(yè)面臨的豬病病原種類繁多，導(dǎo)致疑似PRRS感染臨床癥狀（如流產(chǎn)、高熱等）可能不是PRRSV感染引起，這也提示實(shí)驗(yàn)室診斷的必要性和可靠性。

為進(jìn)一步確定河北省部分地區(qū)流行PRRSV毒株基因型，筆者使用兩種試劑盒對(duì)部分PRRSV毒株基因型進(jìn)行鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，河北省同時(shí)流行4種不同基因型，分別為經(jīng)典型、高致病型、NADC-30 like型和NADC-34 like型毒株，但所占比例差異較大，其中高致病型和經(jīng)典型毒株仍然是優(yōu)勢(shì)毒株，而后兩種毒株比較少見，這可能與檢測(cè)樣品數(shù)量較少有關(guān)。以上結(jié)果說明，河北省流行PRRSV毒株基因型十分復(fù)雜，同時(shí)需要警惕新型毒株（如NADC-34 like株）的進(jìn)一步流行，也提示定期監(jiān)測(cè)河北省各地區(qū)或豬場(chǎng)流行PRRSV基因型特征是十分必要的。