豬場(chǎng)豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病的血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果及分析

王禮偉，周 剛，柏傳茂，唐 炎，崔宏如，楊生明，張建平

（1.江蘇徐淮地區(qū)淮陰農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，江蘇 淮安 223001；2.金湖縣呂良中心畜牧獸醫(yī)站，江蘇 淮安 211600）

動(dòng)物傳染病是危害養(yǎng)殖業(yè)最為嚴(yán)重的因素之一，它不僅可以造成動(dòng)物大批量死亡和動(dòng)物源性產(chǎn)品的損失，影響食品安全及進(jìn)出口貿(mào)易，而且某些人獸共患傳染病還能威脅人類的生命健康[1]。現(xiàn)代化集約規(guī)模的養(yǎng)殖業(yè)，由于動(dòng)物調(diào)運(yùn)移動(dòng)頻繁、飼養(yǎng)密度高度集中，更容易受到傳染病的侵襲，造成疾病的混合感染、繼發(fā)感染等。2018年8月暴發(fā)的急性烈性傳染病—非洲豬瘟，更是給我國的生豬市場(chǎng)和產(chǎn)業(yè)發(fā)展帶來巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)危害。因此，對(duì)動(dòng)物傳染病的防制和研究歷來受到世界各國的高度重視，并在獸醫(yī)科學(xué)研究領(lǐng)域居重要位置[2]。

免疫接種是養(yǎng)殖場(chǎng)防控傳染病發(fā)生最根本、最科學(xué)、最直接的措施[3]。開展血清免疫抗體檢測(cè)工作，是做好動(dòng)物免疫工作的前提和保證，能夠及時(shí)了解疫苗注射后動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生的免疫抗體水平和免疫效果，當(dāng)前規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)已經(jīng)廣泛開展血清抗體監(jiān)測(cè)工作[4-5]。本研究對(duì)某豬場(chǎng)不同生長階段豬群的豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、偽狂犬病血清抗體進(jìn)行檢測(cè)與分析，希望為養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行補(bǔ)免和開展各項(xiàng)防控措施提供科學(xué)依據(jù)，為政府主管部門科學(xué)制定動(dòng)物疫病預(yù)防控制規(guī)劃和疫病預(yù)警提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 樣品來源 2021年12月期間在金湖縣綠能生豬養(yǎng)殖合作社開展，根據(jù)某規(guī)?；i場(chǎng)（規(guī)模：經(jīng)產(chǎn)母豬500頭）生產(chǎn)管理情況需要，通過前腔靜脈采血，收集血清，于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｘi場(chǎng)豬瘟疫苗是傳代細(xì)胞苗，具體免疫方案為：種公豬、種母豬普免2次/年，仔豬30日齡免疫1次、保育豬70日齡免疫1次；豬繁殖與呼吸綜合征疫苗是ATCCVR-2332株疫苗，具體免疫方案為種公豬、種母豬普免3次/年，仔豬21日齡免疫；偽狂犬病疫苗是gE基因缺失疫苗（毒株Bartha-K61株疫苗），具體免疫方案為種公豬、種母豬普免4次/年，仔豬0日齡滴鼻免疫，50及80日齡肌注。

1.1.2 主要試劑和儀器 豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒、偽狂犬病gB抗體檢測(cè)試劑盒購自武漢科前生物制品有限責(zé)任公司；豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測(cè)試劑盒、偽狂犬病gE抗體檢測(cè)試劑盒購自北京愛德士元亨生物科技有限公司；MultiskanFC自動(dòng)酶標(biāo)儀購自Thermo公司；恒溫培養(yǎng)箱及平板震蕩儀購自常州金壇晨陽電子儀器廠；獸用一次性5 mL采血盛血器購自安徽弘牧防疫檢疫裝備制造有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 操作方法 樣品檢測(cè)方法及判定結(jié)果根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)分析 利用Office軟件對(duì)試驗(yàn)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行生物統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬場(chǎng)豬瘟血清抗體ELISA檢測(cè)分析結(jié)果

不同階段豬群豬瘟血清抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，豬瘟抗體陽性率均不低于80.00%，3周齡仔豬最低為80.00%，其抗體離散度卻最高為0.52，5周齡保育豬抗體平均值最低僅為59.4（表1）。

表1 豬瘟血清抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果

2.2 豬繁殖與呼吸綜合征血清抗體ELISA檢測(cè)分析結(jié)果

豬群豬繁殖與呼吸綜合征血清抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，只有10周齡、13周齡豬群抗體表現(xiàn)出S/P≤2.0，其余豬群抗體均表現(xiàn)出S/P＞2.0，5周齡、7周齡豬群抗體S/P表現(xiàn)出S/P≤2.5。S/P＞2.0的豬群類型比例為77.78%（7/9），S/P＞2.5的豬群類型比例為55.56%（5/9）（表2）。

表2 豬繁殖與呼吸綜合征血清抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果

2.3 豬場(chǎng)偽狂犬病gB、gE血清抗體ELISA檢測(cè)分析結(jié)果

豬群偽狂犬病gB、gE血清抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果綜合顯示，只有妊娠71～105 d母豬、7周齡、16周齡豬群偽狂犬病gB血清抗體陽性率不是100.00%，分別為60.00%、80.00%及20.00%，且7周齡抗體離散度最高為1.56。在豬群偽狂犬病gE血清抗體上，7周齡、16周齡豬群偽狂犬病gE血清抗體顯示為陰性（陽性率均為0.00%），而其他豬群偽狂犬病gE血清抗體均顯示陽性，且妊娠71～105 d母豬及公豬偽狂犬病gE血清抗體陽性率在所有陽性豬群中最低為20.00%。妊娠30～70 d母豬偽狂犬病gE血清抗體陽性率最高為60.00%（表3、表4）。

表3 偽狂犬病gB血清抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果

表4 偽狂犬病gE血清抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果

3 討論

3.1 豬瘟免疫效果還需加強(qiáng)

根據(jù)《2021年國家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》的通知，豬瘟不再列入重大動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫病種，但作為國家規(guī)定的一類動(dòng)物疫病，各級(jí)政府部門、養(yǎng)殖場(chǎng)主等行業(yè)人員仍然需要高度重視此類疫病的危害。該豬場(chǎng)豬瘟血清抗體整體合格率為96.67%，已經(jīng)達(dá)到國家強(qiáng)制性免疫傳染病70%的水平要求，說明豬場(chǎng)豬瘟免疫效果較好[6]。妊娠71～105 d母豬及3周齡仔豬存在抗體陽性率連續(xù)下降及離散度增加的現(xiàn)象，說明母豬自身的免疫抗體通過胎盤及乳汁傳遞與仔豬外源輸入抗體存在一定的關(guān)系。當(dāng)哺乳母豬無法提供足量的免疫抗體且仔豬自身沒有疫苗免疫時(shí)，仔豬抗體水平下降，因此需要加強(qiáng)對(duì)妊娠母豬的免疫[7-8]。

3.2 豬群豬繁殖與呼吸綜合征處于不穩(wěn)定狀態(tài)

作為豬繁殖與呼吸綜合征陽性場(chǎng)，豬場(chǎng)血清抗體S/P＞2.5的比例在母豬妊娠30～70 d、妊娠71～105 d階段已經(jīng)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，且公豬抗體S/P＞2.0的比例為40.00%，S/P＞2.5的比例為20.00%，說明在種公豬及繁殖母豬豬群類別上豬繁殖與呼吸綜合征已經(jīng)進(jìn)入不穩(wěn)定狀態(tài)。同時(shí)，5～13周齡豬群抗體S/P＞2.5為0，說明這種不穩(wěn)定狀態(tài)仍處于初始階段，尚未波及后續(xù)部分階段的仔豬，而16周齡豬群已經(jīng)存在抗體S/P＞2.5的比例。因此，豬場(chǎng)需要緊急進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查及病原學(xué)檢測(cè)綜合分析，判斷是否疫苗毒株存在變異重組或者外源野毒感染入侵[9]。針對(duì)當(dāng)前藍(lán)耳病進(jìn)入不穩(wěn)定狀態(tài)的初級(jí)階段且病毒尚未分離鑒定，可緊急采用泰萬菌素進(jìn)行防控，泰萬菌素能夠抑制藍(lán)耳病病毒在巨噬細(xì)胞復(fù)制傳播，縮短藍(lán)耳病病毒血癥周期，減少毒血癥危害，配合使用替米考星，可進(jìn)一步降低感染動(dòng)物的死亡率和減輕臨床癥狀[10-11]。在抗生素緊急防控后，再根據(jù)病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果，確定疫苗毒株和野毒毒株基因的異同，進(jìn)行特異性疫苗的加強(qiáng)免疫，并進(jìn)行該病的長期系統(tǒng)的檢測(cè)和監(jiān)測(cè)，確保S/P保持在合理健康水平。

3.3 豬偽狂犬病存在野毒感染的現(xiàn)象

通過偽狂犬病gB、gE血清抗體的檢測(cè)結(jié)果分析，可以初步確定偽狂犬病野毒已經(jīng)感染絕大部分豬群（7周齡、16周齡豬群除外），該場(chǎng)已經(jīng)成為野毒感染陽性場(chǎng)。在7周齡、16周齡豬群即使在野毒陽性率為0的情況下，血清gB抗體陽性率仍達(dá)不到100.00%，進(jìn)一步說明偽狂犬病gB血清抗體水平已經(jīng)不能代表Bartha-K61株疫苗免疫的水平，從而證明豬場(chǎng)當(dāng)前使用的Bartha-K61經(jīng)典毒株疫苗已經(jīng)不能夠抵制野毒入侵，導(dǎo)致免疫失敗。偽狂犬病野毒感染入侵在部分地區(qū)已經(jīng)成為常態(tài)，山東省在2013—2016年期間對(duì)規(guī)模豬場(chǎng)2 033份血清進(jìn)行偽狂犬病野毒抗體檢測(cè)及病毒分離，得出野毒抗體陽性率為57.8%，且分離鑒定出15株變異毒株，再次說明偽狂犬病變異性毒株已經(jīng)廣泛流行[12]。在變異毒株進(jìn)化上，楊濤等對(duì)多個(gè)廠家生產(chǎn)的Bartha-K61疫苗株與變異毒株在基因上進(jìn)行比較分析，證明疫苗株和變異株屬于不同的進(jìn)化分支，進(jìn)一步解釋了該豬場(chǎng)當(dāng)前使用的經(jīng)典Bartha-K61毒株疫苗無法提供足夠的免疫保護(hù)的原因[13]。因此，豬場(chǎng)需要緊急進(jìn)行偽狂犬病野毒分離鑒定，選擇與流行毒株同源性較高的疫苗，并持續(xù)開展偽狂犬病野毒凈化的工作[14]。

4 結(jié)論

通過本次血清學(xué)檢測(cè)及分析，該豬場(chǎng)存在豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病野毒感染，豬瘟疫苗有待加強(qiáng)免疫等系列問題，此外還需要進(jìn)行流行病學(xué)、解剖學(xué)及分子生物學(xué)等方法綜合確診。因此，長期化、動(dòng)態(tài)化、系統(tǒng)化和科學(xué)化的檢測(cè)和監(jiān)測(cè)是確保動(dòng)物傳染病發(fā)生后實(shí)現(xiàn)“早、快、嚴(yán)、小”解決處理的重要措施。