種豬偽狂犬病凈化及綜合防控研究

段昌學，許建勛，趙 娟，王 陽，武果桃，翼新星，秦建國，耿一清，李樹文

（1.陜西省商洛市動物疫病預防控制中心，陜西 商洛 726000；2.山西農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院，山西 太原 030031；3.山西省運城市夏縣畜牧獸醫(yī)發(fā)展中心，山西 運城 044400）

豬偽狂犬病是一種由偽狂犬病病毒（PRV）引起的豬的急性傳染病。該病在豬中呈暴發(fā)性流行?？梢鹑焉锬肛i流產(chǎn)、死胎，公豬不育，新生仔豬大量死亡，肥育豬呼吸困難、生長停滯等，是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之一[1]。2011年以來，豬偽狂犬病再次在國內(nèi)暴發(fā)流行，導致許多豬場損失慘重，就近年來市獸醫(yī)實驗室監(jiān)測結果而言，陜西省豬群偽狂犬病野毒感染率呈上升趨勢，豬偽狂犬病的綜合防控迫在眉睫?！秶抑虚L期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》中明確要求，所有種豬場到2020年底達到凈化標準。為了按時完成這一任務，探索出全市動物疫病凈化工作經(jīng)驗，市動物疫病預防控制中心特選取在商洛市具有代表性的3家中大型規(guī)模種豬場來實施豬偽狂犬病凈化推廣項目。

1 試驗材料

1.1 試驗場情況及試驗周期

商洛市是貧困山區(qū)，養(yǎng)殖規(guī)模普遍較小，所選3家企業(yè)為省部級規(guī)模養(yǎng)殖場（表1），在選址、場地、設施、規(guī)模、人員、管理等方面都屬于較好的企業(yè)。試驗期為2017年1月至2020年12月。

表1 試驗豬場種豬數(shù)量統(tǒng)計

1.2 檢測樣品

感染率調(diào)查和監(jiān)測階段按后備、妊娠、哺乳母豬分類，每個類別最少采集30頭豬全血，不足30頭豬全采，種公豬全采，分離血清樣品；實施凈化階段100%采集母豬、種公豬全血，分離血清樣品。

1.3 檢測試劑盒

豬偽狂犬病病毒gE抗體ELISA檢測試劑盒-愛德士（IDEXX）；豬偽狂犬病病毒gB抗體ELISA檢測試劑盒-愛德士（IDEXX）；豬瘟病毒單重凝膠PCR檢測試劑盒-北京億森寶生物；高致病性豬藍耳病病毒單重凝膠PCR檢測試劑盒-北京億森寶生物；豬圓環(huán)病毒1型和2型雙重凝膠PCR檢測試劑盒-北京世紀元亨。

1.4 檢測方法及原理

1.4.1 gE抗體為野毒抗體，采用gE基因缺失疫苗免疫，采用gE-ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）方法可以對該病進行鑒別診斷。對于gE抗體陽性豬，可能為感染發(fā)病豬、感染康復豬或健康仔豬（母源抗體）3種情況。對于gE抗體陰性豬，可能為健康豬或剛剛感染野毒抗體尚未轉陽的豬[2-3]。

1.4.2 gB抗體為總保護性抗體，無法區(qū)分疫苗毒和野毒，且不能確定gB抗體水平高低與免疫時機、臨床發(fā)病之間的關系，僅在已知gE抗體水平下間接評估免疫效果[4]。

1.4.3 PCR病原檢測，對于感染豬瘟、藍耳病、圓環(huán)病毒病等免疫抑制病的帶毒豬，腦、腎、扁桃體、血液、淋巴等組織和體液PCR檢出率較高?？紤]到采樣的便利性，本試驗選取口腔黏液樣品用于PCR檢測，結果為陽性的無臨床癥狀豬，可視為隱性感染[5]。

2 試驗方法

2.1 豬偽狂犬病凈化技術路線[6]

豬偽狂犬病凈化技術路線見圖1。按照“調(diào)查（抽樣檢測）→首次檢測→撲殺/隔離→免疫→二次檢測→撲殺/淘汰→再次檢測→撲殺→監(jiān)測”等步驟進行凈化。

2.2 實施內(nèi)容

2.2.1 偽狂犬病感染率調(diào)查：分兩次進行，時間間隔為6個月。按后備、妊娠、哺乳母豬分類，每個類別最少采集30頭豬全血，不足30頭豬全采，種公豬全采。根據(jù)各種豬場豬偽狂犬病gE抗體陽性率來制定每個養(yǎng)殖場凈化實施方案。gE抗體陽性率≤5%，進行豬偽狂犬病凈化，gE抗體陽性率＞5%則繼續(xù)免疫，每隔6個月監(jiān)測gE抗體陽性率[7]。

2.2.2 100%檢測和淘汰：對全部種豬和后備豬作偽狂犬病野毒感染檢測，淘汰gE抗體陽性個體。間隔6個月再次進行一次gE抗體普檢，淘汰gE抗體陽性個體。

2.2.3 后續(xù)監(jiān)測：連續(xù)2次檢測gE抗體結果均為陰性者，以后每6個月進行一次抽檢，按后備、妊娠、哺乳母豬分類，每個類別最少采集30頭豬全血，不足30頭豬全采，種公豬全采。若出現(xiàn)gE抗體陽性者，則重新采取全群檢測并淘汰手段[8]。

2.2.4 為了數(shù)據(jù)準確性，每次樣品的采集、檢測、陽性豬的處理均保證在7 d內(nèi)完成。

2.3 結果指標

2.3.1 凈化標準：連續(xù)2次抽檢偽狂犬病野毒結果均為陰性且免疫抗體合格率≥70%，則該豬群為凈化豬群；否則按照凈化步驟循環(huán)進行。

2.3.2 驗收標準：連續(xù)2年無臨床病例，抗體合格率≥70%，且病原學監(jiān)測結果連續(xù)1年以上無陽性。

3 試驗結果

3.1 抽樣調(diào)查偽狂犬病感染率及免疫抑制類疫病結果

按照豬偽狂犬病抽樣調(diào)查方案，2017年4月開展了豬偽狂犬病感染率第1次調(diào)查，9月進行了豬偽狂犬病感染率第2次調(diào)查工作。結果見表2、表3。

表2 第1次抽樣調(diào)查檢測結果匯總

表3 第2次抽樣調(diào)查檢測結果匯總

3.2 調(diào)查免疫抑制類疫病

為了檢驗免疫抑制類疫病對免疫的影響，在8月運用圈舍懸掛棉繩采集口腔黏液的方法用熒光PCR檢測抗原做摸底調(diào)查（表4）。

表4 免疫抑制類疫病調(diào)查結果

3.3 凈化階段種豬全群采血檢測結果

按照豬偽狂犬病凈化方案，2018年5月和11月對A場進行了兩次種豬全群采血普查，同時對B和C兩個豬場進行了感染監(jiān)測，結果見表5、表6、表7。

表5 A場種豬偽狂犬病檢測結果（2018—2020年）

表6 B場種豬偽狂犬病監(jiān)測結果（2018—2020年）

表7 C場種豬偽狂犬病監(jiān)測結果（2018—2020年）

4 試驗分析及討論

4.1 試驗結果分析

4.1.1 A場兩次抽樣調(diào)查gE抗體陽性率都小于5%，滿足凈化條件，執(zhí)行種豬偽狂犬病凈化方案；種豬全群普查階段，第1次檢測gE抗體陽性率為0.79%（5/636），將5頭陽性種豬淘汰后，間隔6個月后的第2次全群檢測，gE抗體陽性率為0（0/627），再間隔6個月后的第3次全群檢測，gE抗體陽性率為0（0/562），連續(xù)兩次全群檢測gE抗體陽性率為0，且gB抗體都在70%以上，A場達到豬偽狂犬病凈化豬群標準。在2019—2020年每間隔6個月通過抽樣檢測，A場維持豬偽狂犬病陰性場。

4.1.2 B場在2018年兩次感染率抽樣調(diào)查時gE抗體陽性率分別為3.51%和2.52%，滿足凈化條件，本來計劃在2019年啟動凈化措施，可是非洲豬瘟在全國暴發(fā)，B場執(zhí)行更嚴格生物安全措施不讓外來人員進入，全群采血沒有人員執(zhí)行；毛豬價格上漲不愿淘汰母豬；擔心全群采血引起豬群應激；豬群穩(wěn)定，各項生產(chǎn)指標都不錯，對豬偽狂犬病的凈化需求不高。綜合上述幾方面因素，B場停止凈化方案繼續(xù)進行，執(zhí)行監(jiān)測方案。通過3年持續(xù)種豬偽狂犬病感染率監(jiān)測，陽性率維持在1.5%左右，為豬偽狂犬病穩(wěn)定控制場。

4.1.3 C場試驗前期的兩次抽樣調(diào)查時，gE抗體陽性率分別為80.22%和72.84%，陽性率太高無法開展后續(xù)的凈化措施，在抽樣調(diào)查后采取了偽狂犬病基因缺失苗免疫、感染抗體監(jiān)測的方式重點監(jiān)測母豬、保育豬和肥育豬的偽狂犬病抗體水平，減少偽狂犬病對企業(yè)生產(chǎn)效益的影響。在之后3年試驗期間持續(xù)種豬偽狂犬病感染率監(jiān)測，gE陽性率平均值維持在60%左右，為豬偽狂犬病感染凈化試驗場。

4.2 試驗小結與討論

4.2.1 應用豬偽狂犬病基因缺失疫苗，按照既定的免疫程序實施免疫，豬群能夠獲得很高的免疫抗體保護力，能夠降低偽狂犬病對豬群的危害，提高經(jīng)濟效益；同時結合對應的診斷試劑盒，能夠精準鑒別免疫抗體和感染抗體豬群，市面上常見的偽狂犬病基因缺失苗和相應診斷試劑盒可以滿足偽狂犬病凈化項目中相關技術指標的要求[9]。

4.2.2 豬瘟、豬高致病性藍耳病、豬圓環(huán)病毒病等免疫抑制類疫病可誘導機體產(chǎn)生明顯的免疫抑制，不利于偽狂犬病疫苗的免疫應答，因此實施偽狂犬病凈化時要配合實施豬群免疫抑制病的干預措施，包括不限于采取免疫、淘汰等措施，以保證偽狂犬病凈化方案順利施行。

4.2.3 對抽樣調(diào)查中豬群gE抗體陽性率低于5%的豬場開展偽狂犬病凈化，嚴格按照2.2.2—2.2.4程序操作，可以實現(xiàn)豬場偽狂犬病的凈化，對于商洛地區(qū)其他規(guī)模相似、生物安全設施處于同一水平的豬場可以借鑒A場模式主動開展偽狂犬病等重大動物疫病的凈化，凈化豬場疫病環(huán)境，徹底控制住豬偽狂犬病等重大動物疫病[10]。

4.2.4 種豬偽狂犬病凈化方案實施起來應因地制宜，針對不同的豬場制定合理的方案并在實施過程中適時調(diào)整。在非洲豬瘟疫情影響及全國穩(wěn)定生豬生產(chǎn)形勢下，符合條件的種豬場開展偽狂犬病凈化工作，野毒感染率過高導致無法開展凈化的豬場應采取加強免疫、加強監(jiān)測的方式減少偽狂犬病對豬場生產(chǎn)效益的影響[11]。

4.2.5 在非洲豬瘟背景下，豬場生物安全意識得到了極大提高，也都加強了生物安全體系建設，加強了對人員、物品、飼料、豬只、糞污流動的控制及管理，較大規(guī)模場也建立自己的獸醫(yī)實驗室，能夠及時監(jiān)測本場免疫抗體的消長和疫病感染情況，可以做到疫病早發(fā)現(xiàn)、早處理，把疫病控制在小范圍，把損失控制在很低。

4.2.6 豬偽狂犬病是影響我國生豬產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的最重要疫病之一，疫苗免疫只能解決當前疫病危機，長遠來看，隨著偽狂犬病等病毒新毒株的不斷出現(xiàn)和廣泛流行，不排除未來會出現(xiàn)“偽狂犬病超強毒”的情況，所以偽狂犬病凈化才是最終道路。而動物疫病凈化是一個系統(tǒng)性工作，需要政府、科研單位、疫控機構、養(yǎng)殖企業(yè)等各方共同努力，按照國家總體部署和要求，分區(qū)施策，從種源凈化。建議各級政府將“國家動物疫病凈化創(chuàng)建場/示范場”列入政策傾斜對象，在審批、監(jiān)管上提供便利，為種畜禽場凈化工作提供示范。