基于月季蠟葉標(biāo)本顏色量化研究的方法探討

王麗 吳闖 李翔 黃萍 何丹丹

（南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥學(xué)部；江蘇省中醫(yī)藥研究院藥學(xué)部 南京 210028）

中藥蠟葉標(biāo)本需有根、莖、葉、花、果實(shí)和種子等器官以便于鑒定。壓制過程中受溫度、濕度、壓力等外界環(huán)境因素影響，葉綠素易發(fā)生氧化降解而變色和退綠，花色素含量減少，使得植物特征難以辨別，在教學(xué)、科研、中醫(yī)藥文化宣傳研究中帶來困難[1]。目前，對(duì)中藥蠟葉標(biāo)本顏色的評(píng)價(jià)主要通過目測(cè)法鑒定，這種方法操作簡(jiǎn)單，但主觀因素影響過大，且相關(guān)的研究鮮有報(bào)道。

本研究對(duì)象月季為薔薇科植物月季（Rosa chinensisJacq.）全株，屬于直立株型、重瓣、花徑3～5 cm的紅色系月季[2-3]。采用目測(cè)評(píng)價(jià)法、色差儀檢測(cè)法、紫外分光光度法測(cè)定色素含量，對(duì)月季蠟葉標(biāo)本顏色進(jìn)行量化分析比對(duì)，以提高精確度和準(zhǔn)確率，驗(yàn)證傳統(tǒng)目測(cè)評(píng)價(jià)法判斷蠟葉標(biāo)本顏色的可行性、準(zhǔn)確性。

1 材料和方法

1.1 材料

JZ-350色彩色差計(jì)（深圳市金準(zhǔn)儀器設(shè)備有限公司）；HE53水分檢測(cè)儀（梅特勒-托利多儀器（上海）分公司）；Cary 60 紫外可見分光光度計(jì)（美國(guó)安捷倫公司）；AL204電子天平、FE28ph計(jì)（梅特勒-托利多儀器有限公司）；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（國(guó)華電器有限公司）。試劑均為市售化學(xué)品。

1.2 方法

1.2.1 目測(cè)評(píng)價(jià)法

外觀評(píng)價(jià)專家小組由具有副主任中藥師資格的5人組成。以植物園中新鮮相同種屬紅月季作為參照，觀察、對(duì)比10株干燥月季花、葉的顏色變化、完整度、是否有斑點(diǎn)三個(gè)方面，用5、3、1評(píng)分法評(píng)分：5分表示優(yōu)，標(biāo)本接近于鮮品；3分表示中等，標(biāo)本較鮮品輕微變化；1分表示差，標(biāo)本較鮮品變化較大[4]。將5位專家評(píng)分均值作為評(píng)分值。

1.2.2 色差儀檢測(cè)法

取月季藥用植株中部附近葉片、花瓣各10片，葉片和花瓣無損傷，測(cè)量部位為葉正面中間葉肉部分和花瓣中心顏色均勻的位置。測(cè)定前對(duì)儀器進(jìn)行零位和白板較準(zhǔn)，較準(zhǔn)完畢后進(jìn)入測(cè)試。選擇光源條件D65/10°，色彩空間選擇數(shù)據(jù)L*a*b*值。需要測(cè)定的指標(biāo)如下：L代表顏色的明度，即顏色的亮度，L=0時(shí)指示為黑色，?L+表示偏白，?L-表示偏黑。a代表紅綠色軸，?a+表示偏紅，?a-表示偏綠。b代表黃藍(lán)色軸，?b+表示偏黃，?b-表示偏藍(lán)。選取每株月季中部形態(tài)完整、色澤均勻的10片葉，做好標(biāo)記。用色差計(jì)在葉片中心重復(fù)測(cè)量3次，取平均值，記錄L、a、b值。

1.2.3 紫外分光光度法

參照先前月季葉綠素[5-6]、月季花紅色素[7]的制備工藝條件制備待測(cè)樣品，分別采用紫外分光光度法掃描其在200～800 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的紫外-可見吸收?qǐng)D譜，通過月季葉樣品在663.6 nm和646.6 nm波長(zhǎng)處的吸光度值，計(jì)算樣品中葉綠素含量；通過測(cè)定月季花樣品在525 nm波長(zhǎng)處的吸光度值，比較樣品中紅色素的變化趨勢(shì)。

2 結(jié)果

2.1 目測(cè)評(píng)價(jià)

按照5、3、1打分法，5名專家對(duì)月季標(biāo)本鮮品及用傳統(tǒng)方法壓制的標(biāo)本進(jìn)行打分，通過表1得出，月季葉、花鮮品評(píng)價(jià)得分均值均高于干品。

表1 月季（葉、花）目測(cè)法評(píng)價(jià)得分

2.2 色差儀檢測(cè)

月季蠟葉標(biāo)本在制作過程中，極易發(fā)生褪色和變色，影響著標(biāo)本的品質(zhì)。新鮮的月季葉和花L值最大，a值最小，b值最大，色澤較為鮮亮。干品月季葉和花L值變小，說明干品色澤變暗；干品月季葉a值變大，說明綠色損失嚴(yán)重，干品月季花a值變小，說明干品花偏紅；干品月季葉和花的b值均變小，說明干品月季顏色沒有變黃（表2）。

表2 月季蠟葉標(biāo)本顏色值測(cè)定（±s，n=10）

表2 月季蠟葉標(biāo)本顏色值測(cè)定（±s，n=10）

月季部位△L △a △b葉 40.61±0.83 9.61±0.37 22.18±1.00 40.47±0.71 2.57±0.52 19.96±0.92 0.14±0.54 7.04±0.70 2.22±1.05花 58.82±2.76 38.41±3.50 77.01±7.17 49.05±2.85 13.61±1.14 42.03±2.86 9.77±2.08 24.80±2.67 34.97±7.28鮮品 干品 差值L a b Lab

2.3 紫外分光光度檢測(cè)

計(jì)算得出月季葉鮮品葉綠素含量均值為（31.46±1.92） mg/g，干品含量均值為（9.82±0.55）mg/g，干品葉綠素含量較鮮品顯著降低。紫外分光光度法掃描顯示，月季花鮮品紅色素在525 nm波長(zhǎng)處的吸光度均值為0.65±0.07，干品紅色素的吸光度均值為0.24±0.06。月季花干品紅色素吸光度值較鮮品顯著減弱（圖1）。

3 討論

顏色是中藥蠟葉標(biāo)本最直觀的外觀質(zhì)量評(píng)價(jià)因素[8]。目測(cè)法觀察月季葉的顏色亮度變暗，由墨綠色變?yōu)闇\綠色；色差法測(cè)得干品月季葉和花均變暗，月季葉綠色損失嚴(yán)重，月季花偏紅；紫外分光光度法測(cè)得干品的葉綠素含量小于鮮品、紅色素吸光度值較鮮品顯著減弱。三種方法測(cè)得的結(jié)果一致，目測(cè)法主觀因素影響大，誤差大；色差法操作簡(jiǎn)便，數(shù)據(jù)客觀精確，但需要重復(fù)測(cè)量來減少誤差；紫外分光光度法掃描葉綠素、紅色素吸光度，操作復(fù)雜，提取耗時(shí)長(zhǎng)，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果精確，誤差小。

葉綠素含量高低是評(píng)價(jià)葉片衰老的標(biāo)志，月季葉的綠色來源于葉綠素，葉綠素是非常不穩(wěn)定的非親水性色素物質(zhì)，標(biāo)本鮮品的顏色常因產(chǎn)地、種屬、種植養(yǎng)護(hù)等因素變化而變化，標(biāo)本制作過程中由于溫度、濕度、壓力、光線等外界因素引起組織細(xì)胞中葉綠素結(jié)構(gòu)被破壞。紅月季花的顏色鮮艷，花色素極易受溫度、壓力、光照的影響而變色，花瓣質(zhì)地輕薄，標(biāo)本換紙的時(shí)候，容易損傷花瓣。本研究中，在外觀判定顏色的基礎(chǔ)上對(duì)月季葉、花的顏色進(jìn)行科學(xué)量化分析，顏色值的量化分析與視覺顏色判定結(jié)果相吻合，說明月季的顏色值能較好地反映外觀判定結(jié)果。

蠟葉標(biāo)本顏色的保持是蠟葉標(biāo)本制作、儲(chǔ)存中一個(gè)亟待解決的問題，本研究探討不同方法量化研究蠟葉標(biāo)本顏色，為蠟葉標(biāo)本保色研究提供有利的測(cè)定方法。