濕酒糟中乙醇等9種成分分析及拮抗物質(zhì)的體外篩選

李前勇，張余蓬，朱瑞，張德志，張芝金，羅怡茜，郭靈君

（1.西南大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，重慶 榮昌 402460；

2.重慶市獸醫(yī)工程技術(shù)研究中心，重慶 榮昌 402460；3.重慶市肉牛工程技術(shù)研究中心，重慶 榮昌 402460）

0 引言

酒糟（Distillers grains，DG）是利用谷類(lèi)進(jìn)行釀酒發(fā)酵、蒸餾處理后的副產(chǎn)物，白酒、啤酒等釀造及燃料乙醇的生產(chǎn)均可產(chǎn)生酒糟[1]。我國(guó)白酒釀造歷史悠久，啤酒等各類(lèi)酒精飲料產(chǎn)業(yè)興旺發(fā)達(dá)；燃料乙醇行業(yè)發(fā)展迅速，已是世界第3大燃料乙醇生產(chǎn)和消費(fèi)國(guó)[2]。據(jù)記載，我國(guó)每年可產(chǎn)出的各類(lèi)酒糟在1億t以上[3]?；诰圃阒袣埓娴臓I(yíng)養(yǎng)及可利用物質(zhì)，人們已探索出利用酒糟生產(chǎn)細(xì)菌纖維素、活性炭、食用醋、食用菌、木糖醇、甘油、乳酸、沼氣及直接或青儲(chǔ)用作動(dòng)物飼料[4]等資源化利用的方法，其中，因酒糟中各類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)較為豐富[5-6]，用于動(dòng)物飼料比較普遍，并可以達(dá)到保護(hù)環(huán)境、節(jié)約糧食資源和酒糟的經(jīng)濟(jì)高效利用的目的。

酒糟中不僅含有可利用的營(yíng)養(yǎng)素，還含有乙醇、乙酸、甲醛等對(duì)動(dòng)物健康有一定傷害的物質(zhì)[7]。鄭玉梅等[8]分析指出，白酒糟中含有乙醇、乙酸、乳酸、脂肪酸、草酸等物質(zhì)，長(zhǎng)期使用可對(duì)動(dòng)物造成傷害，并引起慢性中毒。據(jù)記載，酒糟中的乙醇可引起中樞神經(jīng)功能紊亂、心肌變性和造血功能障礙，甲醇蓄積可造成視神經(jīng)萎縮，并對(duì)細(xì)胞質(zhì)造成毒性傷害；乙酸等有機(jī)酸可降低胃腸道PH值，引起消化紊亂、骨骼營(yíng)養(yǎng)不良等[7]。由此可見(jiàn)，開(kāi)展酒糟中毒性物質(zhì)含量的分析，對(duì)保障動(dòng)物的健康、維護(hù)動(dòng)物性食品的安全均有十分重要的意義。國(guó)外，已有關(guān)于小麥型及玉米型鮮酒糟和發(fā)酵酒糟中乳酸、乙酸、乙醇、丙酸等含量的報(bào)道[9-10]。我國(guó)白酒釀造歷史悠久，與西方國(guó)家比較擁有獨(dú)特的釀造技藝和工藝，釀酒原料方面與國(guó)外的單一原料（如小麥、玉米）比較，也顯得更加豐富，酒糟中常見(jiàn)的有毒成分及含量也存在差異，但卻尚未見(jiàn)這些成份含量的報(bào)道。對(duì)于動(dòng)物酒糟中毒的預(yù)防，已有的資料顯示酒糟中添加一定比例的碳酸氫鈉或石灰可有較好的效果[7，11]，但針對(duì)酒糟中可能的有害物質(zhì)開(kāi)展體外拮抗物質(zhì)篩選的研究，國(guó)內(nèi)外卻鮮有報(bào)道；酒糟中長(zhǎng)期添喂碳酸氫鈉，可能因動(dòng)物機(jī)體鈉離子的升高而誘發(fā)心力衰竭、水腫和堿中毒，并增加尿結(jié)石形成的機(jī)率；石灰中有硅、鐵、鋁、鎂等雜質(zhì)成分，具有腐蝕性和發(fā)熱效應(yīng)，常作為環(huán)境消毒劑使用，非食品級(jí)石灰在酒糟中長(zhǎng)期添加使用可能會(huì)導(dǎo)致較大的健康風(fēng)險(xiǎn)。

研究采用氣相色譜、高效液相色譜技術(shù)檢測(cè)和分析了國(guó)產(chǎn)濕酒糟（白酒糟、啤酒糟）中乙醇、乙酸、乳酸、甲醛等9種物質(zhì)的含量及存儲(chǔ)過(guò)程中變動(dòng)規(guī)律，并針對(duì)酒糟中乙醇、甲醛等含量較高的物質(zhì)開(kāi)展拮抗物質(zhì)的體外篩選試驗(yàn)，以期獲得國(guó)產(chǎn)酒糟中常見(jiàn)毒性成分的具體含量數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 酒糟樣品采集及處理

隨機(jī)采集川渝地區(qū)大酒廠、小酒廠高梁型鮮白酒糟及啤酒廠新鮮啤酒糟各35 kg，置于潔凈塑料袋內(nèi)運(yùn)回。然后每種類(lèi)型酒廠酒糟均隨機(jī)抽樣成鮮糟組、儲(chǔ)存7 d組、儲(chǔ)存15 d 組、存儲(chǔ)30 d 組，鮮糟組按每種類(lèi)型酒糟采集10份，150 g /份，置潔凈采樣袋內(nèi)，作好標(biāo)記后--80 ℃保存?zhèn)溆谩Ｃ糠N類(lèi)型酒糟存儲(chǔ)組再抽樣成5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1 000 g /份，置潔凈小型塑料桶內(nèi)，按照酒糟的塑料袋存儲(chǔ)法[12]，將酒糟裝入干凈的專(zhuān)用塑料袋內(nèi)，壓實(shí)后密封，分別于室溫下避光保存7、15、30 d，勿使樣品霉敗。再于各保存時(shí)間點(diǎn)按每個(gè)重復(fù)150 g/份隨機(jī)采樣2份，使每種類(lèi)型酒糟儲(chǔ)存組采樣為10份/組，置采樣袋內(nèi)--80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 儀器及藥品

氣相色譜儀（GC-6280）購(gòu)自美國(guó)安捷倫科技有限公司，高效液相色譜分析儀（Agilent-1100）購(gòu)自美國(guó)安捷倫科技有限公司，0.45μm濾膜（HVLP-1450）購(gòu)自美國(guó)MiliPore公司，超純水系統(tǒng)（Mili-Q）購(gòu)自美國(guó)MiliPore公司，電子天平（Secura125-1CN）購(gòu)自賽多利斯有限公司，無(wú)菌均質(zhì)器（Scientz-IIL）購(gòu)自寧波新芝生物科技有限公司，超聲震蕩器（KQ5200B）購(gòu)自昆山市超聲儀器有限公司。

磷酸（GR級(jí)）購(gòu)自MERCK公司，甲醇（色譜純）、乙醇（色譜純）、戊醇（色譜純）、正丙醇（色譜純）、異戊醇（色譜純）、異丁醇（分析純）、甲醛（分析純）、乳酸（分析純）、乙酸（分析純），均購(gòu)自于天津科密歐化學(xué)試劑有限公司。碳酸氫鈉（分析純）、氧化鎂（分析純）、氧化鈣（分析純）、膨潤(rùn)土、腐植酸鈉（精制）、蒙脫石（K-10）、分子篩（ZSM-5），均購(gòu)自于上海麥克林生化有限責(zé)任公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 酒糟中甲醇、乙醇、戊醇、正丙醇、異戊醇、異丁醇、甲醛含量測(cè)定

精確稱(chēng)取酒糟樣品10.0000 g，加超純水15 mL，然后均質(zhì)粉碎，振蕩混勻后置冰水溶液中60% P（P=400W）超聲提取1 h。再定容至20 mL，密封，4 ℃下冷浸過(guò)夜萃取，最后10 000 r/min 離心10 min，取上清過(guò)0.45 μm濾膜，續(xù)濾液待測(cè)。

樣品中甲醇、乙醇等7種成分均采用GC-6280氣相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)器為FID，色譜柱為DB-FFAP（30 m×0.25 mm，膜厚0.25 μm）。升溫程序?yàn)椋撼跏贾鶞?5 ℃保持8 min；8～12 min，以5 ℃/min升至60 ℃；12～20.5 min，以20 ℃/min升溫至230 ℃；保持2 min。進(jìn)樣口溫度為230 ℃；檢測(cè)器溫度為250 ℃；載氣為高純氮?dú)?，流量?.0 mL/min；進(jìn)樣口分流比為15∶1進(jìn)樣體積為1 μL。

取甲醇、乙醇、正丙醇、異戊醇、異丁醇標(biāo)準(zhǔn)品，均用超純水進(jìn)行稀釋、定容至2.5、5、10、25、50、100 μg/mL濃度；戊醇標(biāo)準(zhǔn)品稀釋定容至3、6、12、30、60 μg/mL濃度，甲醛標(biāo)準(zhǔn)品稀釋定容至0.012、0.06、0.12、0.24、0.3、0.6 μg/mL濃度，上機(jī)檢測(cè)，并以峰面積為橫坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液的濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，運(yùn)用EXCEL中的LINEST函數(shù)計(jì)算其斜率、截距、相關(guān)系數(shù)、截距標(biāo)準(zhǔn)誤，并利用公式“檢測(cè)限（LOD）=3.3δ/S、定量限（LOQ）=10δ/S”計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的LOD、LOQ。參照文獻(xiàn)[12]，進(jìn)行甲醇、乙醇、正丙醇、戊醇、異戊醇、異丁醇、甲醛測(cè)定的精密度、回收率試驗(yàn)。樣品組分測(cè)定所得峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式計(jì)算出待測(cè)液中相應(yīng)組分的濃度。

1.3.2 酒糟中乙酸、乳酸含量的測(cè)試

精確稱(chēng)取酒糟樣品10.0000 g，均質(zhì)機(jī)搗碎，轉(zhuǎn)移至20 mL容量瓶?jī)?nèi)，加入超純水15 mL，室溫避光60% P（P=400W）超聲提取30 min。取出，用超純水定容至20 mL，混勻，然后取上清液過(guò)0.45 μm濾膜，續(xù)濾液待測(cè)。

參照SN /T 2007-2007 規(guī)定的高效液相色譜法[13]，樣品中乙酸、乳酸均采用Agilent-1100高效液相色譜分析儀進(jìn)行檢測(cè)。色譜柱為T(mén)SKgel ODS-100V（4.6 mm×250 mm×5.0 μm），流動(dòng)相為0.1%的磷酸水溶液，流速1 mL/min；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm；柱溫為40 ℃，進(jìn)樣體積20 μL。

取乙酸、乳酸標(biāo)準(zhǔn)品均精確配制4、20、32、40、64、80μg/mL濃度梯度，上機(jī)檢測(cè)，并以峰面積為橫坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液的濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，按“1.3.1”計(jì)算相關(guān)系數(shù)、準(zhǔn)物質(zhì)的LOD、LOQ。參照文獻(xiàn)[14]，進(jìn)行乙酸、乳酸測(cè)定的精密度、回收率試驗(yàn)。樣品組分測(cè)定所得峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式計(jì)算出待測(cè)液中乙酸、乳酸的濃度。

1.3.3 酒糟中主要毒性成分體外拮抗物質(zhì)的篩選

取儲(chǔ)存7 d未發(fā)霉符合質(zhì)量要求的白酒糟（濕，小廠）隨機(jī)分為18組，1～17組為試驗(yàn)組，第18組為對(duì)照，500 g/組，試驗(yàn)組按組次序號(hào)以質(zhì)量百分比在酒糟中依次加入碳酸氫鈉1.5%、膨潤(rùn)土3%，氧化鎂0.5%、1%、1.5%，腐植酸鈉、氧化鈣、蒙脫石、分子篩均為1%、3%、5%，混勻后室溫作用2 h，再采集酒糟試樣，30 g/份，每個(gè)添加比例組10個(gè)重復(fù)，置潔凈樣品袋內(nèi)，同時(shí)采集對(duì)照組樣品，-- 80℃下保存?zhèn)溆谩Ｒ勒铡?.3.1”“1.3.2”測(cè)定樣品中乙醇、乙醇、乳酸、甲醛四種毒性成分的含量。

1.3.4 酒糟中水分的測(cè)定

精確稱(chēng)取白酒糟、啤酒糟樣品各10份，50 g/份，采用食品中水分的測(cè)定（GB5009.3—2016）標(biāo)準(zhǔn)中蒸餾法測(cè)定樣品中水分含量。

1.3.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2016整理，計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差SD，數(shù)據(jù)以±表示；用sPss19.0軟件下單因素方差分析、LSD多重比較法分析試驗(yàn)組間及組內(nèi)不同物質(zhì)間平均含量的差異，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間、線性方程、相關(guān)系數(shù)

由圖1、2、3可知，9種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)能得到良好的分離，而且峰形較好。表1顯示，各種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相關(guān)系數(shù)均大于0.998，表明9種物質(zhì)分別在其相應(yīng)的檢測(cè)方法下有良好的線性關(guān)系，可以很好地對(duì)6種醇、甲醛、2種酸進(jìn)行定量檢測(cè)；檢測(cè)限和定量限均能滿足試驗(yàn)的要求。

表1 9種物質(zhì)的保留時(shí)間、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢測(cè)限和定量限

2.2 精密度、回收率試驗(yàn)

利用試驗(yàn)所測(cè)的9種物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)工作液，按試驗(yàn)方法進(jìn)行精密度試驗(yàn)，結(jié)果顯示，9種物質(zhì)的RSD分別為甲醇0.28%、乙醇0.34%、正丙醇0.41、異丁醇0.35%、戊醇0.3%、異戊醇0.38%、甲醛0.36%、乙酸0.32%、乳酸0.24%，表明試驗(yàn)采用方法有良好的精密度。

取小酒廠鮮白酒糟，分別測(cè)定甲醇等9種物質(zhì)的本底值，再在樣品中添加2個(gè)濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行回收率試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。9種物質(zhì)的2種不同劑量添加其回收率在93%～102.5%，表明試驗(yàn)采用方法回收率高，符合試驗(yàn)要求。

表2 9種物質(zhì)回收率的測(cè)定

2.3 鮮酒糟中9種物質(zhì)含量

參試酒糟樣品中水分測(cè)定結(jié)果，大廠白酒糟水分含量為67.34%±5.71%、小廠酒糟為71.61%±7.83%、啤酒糟糟為83.75%±6.72%，該結(jié)果用于后續(xù)試驗(yàn)計(jì)算干酒糟各測(cè)定物質(zhì)的含量。由表3可知，同類(lèi)鮮酒糟中9種物質(zhì)的含量不同，大廠白酒糟、啤酒糟中乳酸＞乙酸＞乙醇＞甲醛（P＜0.05），甲醇和異戊醇含量均為最低，正丙醇、異丁醇、戊醇均未檢出；小廠的白酒糟中乳酸＞乙醇＞乙酸（P＜0.05），甲醛、異戊醇、正丙醇含量間無(wú)顯著差異（P＞0.05），但三者含量均顯著低于乙酸（P＜0.05），戊醇、甲醇含量為最低（P＜0.05），異丁醇未檢出。同種物質(zhì)在不同類(lèi)型酒糟中含量也不同，甲醇以啤酒糟中含量最高（P＜0.05），乙醇為小酒廠酒糟＞大酒廠酒糟＞啤酒糟（P＜0.05），正丙醇、戊醇為小廠白酒糟含量最高（P＜0.05），其余未檢出；異戊醇為小廠白酒糟＞大廠白酒糟＞啤酒糟（P＜0.05），甲醛為白酒糟＞啤酒糟（P＜0.05），乙酸則為大廠白酒糟＞小廠白酒糟＞啤酒糟（P＜0.01），大酒廠酒糟乳酸顯著高于其他2種類(lèi)型酒廠酒糟（P＜0.01）。所有酒糟中乙酸、乳酸、乙醇、甲醛的含量相對(duì)較高，乙醇含量范圍為299.64～11667.45 mg/kg.DM，乙酸含量范圍為1.80～7.11 g/kg.DM，乳酸含量為25.41～92.90 g/kg.DM，甲醛含量為9.64～18.79 mg/kg.DM。

表3 鮮酒糟樣品中9種物質(zhì)的含量

2.4 儲(chǔ)存酒糟中8種物質(zhì)含量的變化規(guī)律

由圖4至圖11可知，酒糟中甲醇含量隨著儲(chǔ)存時(shí)間的增加呈現(xiàn)顯著的增加，以啤酒糟最為明顯，儲(chǔ)存30 d達(dá)到26.78±1.93 mg/kg.DM；大廠的白酒糟和啤酒糟乙醇含量隨儲(chǔ)存時(shí)間的增加而呈現(xiàn)顯著的增加，儲(chǔ)存30 d分別達(dá)到5 331.53±1 138.48 mg/kg.DM、7 362.26±93.99 mg/kg.DM，但小廠白酒糟中乙醇含量在儲(chǔ)存15 d后有顯著下降；啤酒糟中正丙醇含量隨儲(chǔ)存時(shí)間的增加顯著增加，小廠白酒糟只是在儲(chǔ)存7 d時(shí)有顯著增加；小廠白酒糟中戊醇含量存儲(chǔ)15 d后呈現(xiàn)顯著下降；大廠白酒糟和啤酒糟中異戊醇含量在儲(chǔ)存7、15 d時(shí)顯著增加，小廠白酒糟異戊醇含量?jī)?chǔ)存7 d及以后顯著增加。

小廠白酒糟和啤酒糟中甲醛含量隨儲(chǔ)存時(shí)間增加而升高，以啤酒糟儲(chǔ)存15 d時(shí)達(dá)到最高（為208.62±5.87 mg/kg.DM），大廠白酒糟在儲(chǔ)存7、15 d顯著降低；大廠白酒糟和啤酒糟中乙酸含量隨儲(chǔ)存時(shí)間增加而升高，以大廠儲(chǔ)存15 d達(dá)到最高值（為12.73±0.13 g/kg.DM），小廠白酒糟乙酸隨儲(chǔ)存時(shí)間的增加而降低；3種類(lèi)型酒糟中乳酸含量均隨儲(chǔ)存時(shí)間的增加而出現(xiàn)顯著下降，以啤酒糟儲(chǔ)存30 d時(shí)含量最低（為1.98±0.42 g/kg.DM）。

2.5 酒糟主要毒性成分體外拮抗物質(zhì)的篩選

試驗(yàn)以酒糟中乙醇、乙酸、乳酸、甲醛四種主要檢出物為衡量對(duì)象，研究碳酸氫鈉、膨潤(rùn)土、氧化鎂等7種物質(zhì)體外拮抗酒糟中主要毒性成分的作用，結(jié)果顯示，與酒糟對(duì)照組中乙醇含量比較，7種物質(zhì)不同濃度處理后的酒糟中乙醇含量均顯著降低（P＜0.01），其中，1%蒙脫石和1%氧化鈣處理后乙醇的檢出量最低，其次是0.5%、1%的氧化鎂，而1.5%碳酸氫鈉、5%氧化鈣和1%、3%分子篩的作用最差；除5%的氧化鈣外，7種物質(zhì)的相應(yīng)試驗(yàn)濃度處理后酒糟中乙酸含量均顯著的降低（P＜0.05），其中，1.5%的碳酸氫鈉和1%、5%的蒙脫石以及1.5%的氧化鎂處理后乙酸的檢測(cè)量最低，其次是3%的膨潤(rùn)土、3%蒙脫石和0.5%、1%氧化鎂、1%腐植酸鈉，3%、5%的氧化鈣的作用最差；除3%蒙脫石、1%和5%分子篩外，7種物質(zhì)的其他濃度處理后的酒糟中乳酸含量均極顯著降低（P＜0.01），其中，1.5%的氧化鎂處理后乳酸檢出量最低，其次是1%的氧化鎂和3%、5%的氧化鈣，1%、5%的分子篩和3%、5%的蒙脫石的作用最弱；不同濃度的氧化鎂、氧化鈣、蒙脫石、分子篩處理后酒糟中甲醛含量均顯著降低（P＜0.01），其中，3%、5%的分子篩、3%、5%的氧化鈣處理后甲醛的檢出量最低，其次為1%、1.5%的氧化鎂、1%氧化鈣及1%分子篩，3個(gè)比例的腐植酸鈉、1.5%的碳酸氫鈉及3%膨潤(rùn)土的作用最弱。所篩選的物質(zhì)中，1%氧化鎂對(duì)酒糟中乙醇、乙酸、乳酸、甲醛4種毒性成分均能顯示較好的拮抗效果，1%氧化鈣、1%蒙脫石也可發(fā)揮一定的拮抗效果，見(jiàn)表4。

表4 7種物質(zhì)對(duì)酒糟中4種成分檢出量的影響

3 討論分析

谷物類(lèi)酒糟（干）中粗蛋白含量為26%～31.7%、脂肪9.1%～14.1%、酸性及中性纖維44.5%～64.7%，有必需和非必需氨基酸18種，微量元素Fe、Zn、Mn、P等含量豐富[1，5-6，15]，與其原料谷物比較通常高約3倍，是良好的動(dòng)物飼料資源，目前已廣泛應(yīng)用于奶牛[16]、肉牛[17]、豬[18]、羊[19]等動(dòng)物的飼養(yǎng)過(guò)程中。Firkins等比較了干、濕酒糟作為牛、羊蛋白、能量飼料的飼喂效果，結(jié)果表明牛羊日糧中至少可以飼喂50%（干物質(zhì)比例）的濕酒糟，并可保證其良好的生長(zhǎng)性能，干、濕酒糟中的氮、中性纖維的消化率無(wú)顯著差異，說(shuō)明濕酒糟用于動(dòng)物生產(chǎn)可以取得與干酒糟一致的飼喂效果。然而酒糟中不僅有動(dòng)物可利用的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還有乙醇、乙酸、乳酸、甲醛等物質(zhì)的殘存，長(zhǎng)期或超劑量飼喂可對(duì)動(dòng)物健康帶來(lái)?yè)p害[7，9，11]，尤其是濕酒糟更值得引起警惕。Pedersen等[9]采用高效液相測(cè)定等方法分析了小麥鮮濕酒糟中乙醇、乙酸、乳酸含量，結(jié)果乙酸、乳酸分別為1、17 g/kg.DM，乙醇未檢出；而儲(chǔ)存的小麥酒糟中3種物質(zhì)含量依次為5、12、88 g/kg.DM，三種物質(zhì)在存儲(chǔ)酒糟中均顯示明顯升高；Kamal Mjoun等[10]的研究顯示，鮮濕酒糟中乙醇、乙酸較低，未檢出，乳酸含量為9.0 g/kg.DM，但乙酸在存儲(chǔ)14 d升高到2.9 g/kg.DM，乳酸儲(chǔ)存14 d達(dá)到10.1 g/kg.DM，乙醇儲(chǔ)存129 d升高到10.0 g/kg.DM。目前關(guān)于酒糟中殘存的醇類(lèi)、醛類(lèi)、雜醇油、酸類(lèi)等的數(shù)量研究報(bào)道較少，且并不十分完善。本試驗(yàn)基于我國(guó)白酒、啤酒的現(xiàn)行生產(chǎn)工藝，以獸醫(yī)內(nèi)科教材記載的酒糟中的主要毒性成份為依據(jù)，檢測(cè)和分析了鮮濕高粱型白酒糟、儲(chǔ)存高粱型白酒糟及啤酒糟中9種毒性物質(zhì)的含量，結(jié)果表明，鮮啤酒糟、不同類(lèi)型酒廠的白酒糟中9種成分含量均不同，但所有酒糟中乙醇、乙酸、乳酸、甲醛的含量相對(duì)較高，乙醇含量范圍為299.64～1 1667.45 mg/kg.DM，乙酸含量范圍為1.80～7.11 g/kg.DM，乳酸含量為25.41～92.90 g/kg.DM，甲醛含量為9.64～18.79 mg/kg.DM，異戊醇在3種酒糟中均能很好檢出；存儲(chǔ)試驗(yàn)期內(nèi)，啤酒糟、大廠白酒糟中乙醇、乙酸含量隨儲(chǔ)存時(shí)間增加而顯著上升，小廠白酒糟則呈現(xiàn)顯著下降；3種酒糟中乳酸含量均隨儲(chǔ)存時(shí)間的增加而出現(xiàn)顯著下降；啤酒糟和小廠白酒糟中甲醛含量隨儲(chǔ)存時(shí)間增加而升高，大廠的白酒糟在儲(chǔ)存15 d內(nèi)顯著降低。試驗(yàn)結(jié)果與已有的報(bào)道有較大的差異，這主要與釀酒過(guò)程使用的谷物類(lèi)原料、接入菌種、蒸餾工藝等的差異有關(guān)，如國(guó)外一般以玉米、小麥等單一原料進(jìn)行釀酒，而國(guó)內(nèi)多為五谷雜糧為主，且成份混雜；國(guó)外多以先進(jìn)的發(fā)酵、蒸餾設(shè)備和規(guī)范科學(xué)的菌種植入，而國(guó)內(nèi)小酒廠釀造設(shè)施和技術(shù)等相對(duì)欠缺。值得說(shuō)明的是，我國(guó)幅員遼闊，各地白酒釀造的原料、工藝等差別較大，本試驗(yàn)所得結(jié)果并不能完全反映各地酒糟中已測(cè)成份的含量，還需作進(jìn)一步的研究。但在目前尚未見(jiàn)我國(guó)酒糟中9種毒性成分含量記載的情況下，本試驗(yàn)結(jié)果可為畜禽生產(chǎn)中科學(xué)、高效、安全利用酒糟提供有力的劑量計(jì)算依據(jù)。

動(dòng)物鮮酒糟可引起以乙酸中毒為主的癥狀；長(zhǎng)期大量乳酸攝入，可降低胃腸道內(nèi)容物的酸度，影響其微生物區(qū)系，降低消化機(jī)能和鈣的吸收，酒糟中加入1%～1.5%的碳酸氫鈉或0.1%～1%生石灰是目前預(yù)防動(dòng)物酒糟中毒的常見(jiàn)策略[7]，但尚未相關(guān)的試驗(yàn)研究報(bào)道。本試驗(yàn)選擇目前在動(dòng)物生產(chǎn)中廣泛使用的，并具有吸附、中和酒糟中酸類(lèi)、醇類(lèi)作用的膨潤(rùn)土、氧化鎂、腐植酸鈉、蒙脫石等物質(zhì)，研究其體外拮抗酒糟中主要毒性成分的效果，結(jié)果顯示，對(duì)乙醇拮抗作用最強(qiáng)的是1%蒙脫石和1%氧化鈣，對(duì)乙酸的拮抗作用最強(qiáng)的是1.5%的碳酸氫鈉和1%、5%的蒙脫石及1.5%的氧化鎂，對(duì)乳酸拮抗作用最強(qiáng)的是1.5%的氧化鎂，對(duì)甲醛拮抗作用最強(qiáng)的有3%、5%的分子篩、3%、5%的氧化鈣，但對(duì)測(cè)定的4種毒性物質(zhì)的綜合拮抗作用最好的是1%氧化鎂，1%氧化鈣、1%蒙脫石可發(fā)揮一定的拮抗效果。鎂是牛羊及其他動(dòng)物體的常量元素之一，飼料中添加0.8%的水平可調(diào)節(jié)瘤胃液pH 值、預(yù)防熱應(yīng)激、提高乳脂率，而飼料中不飽和脂肪酸含量增加時(shí)可通過(guò)皂化作用降低鎂的吸收，而酒糟中脂肪及酸類(lèi)物質(zhì)較高，1%的氧化鎂添加使用引起鎂風(fēng)險(xiǎn)并不大，從試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)0.5%～1%的氧化鎂均可有效降低酒糟中乙醇、乙酸、乳酸、甲醛的檢出率，實(shí)際生產(chǎn)中可適當(dāng)選擇使用。研究結(jié)果為人們尋求預(yù)防動(dòng)物酒糟中毒提供新的參考。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)分析川渝地區(qū)大、小白酒廠的高粱型白酒糟、啤酒糟中乙醇等9種物質(zhì)含量，鮮濕酒糟、啤酒糟中乙醇、乙酸、乳酸、甲醛的檢出量較高，按干物質(zhì)計(jì)算，乙酸、乳酸及乙醇含量可達(dá)克級(jí)水平；儲(chǔ)存30 d內(nèi)，啤酒糟中乙醇、乙酸、甲醛含量均呈顯著上升，大酒廠酒糟乙醇、乙酸含量呈顯著上升，而小酒廠因其鮮糟中乙醇、乙酸、甲醛及3類(lèi)酒糟中乳酸含量較高，在儲(chǔ)存過(guò)程中呈現(xiàn)顯著下降，但均高于其他5種物質(zhì)含量。提醒牛羊生產(chǎn)中使用時(shí)應(yīng)特別關(guān)注乙酸、乳酸、乙醇等4種物質(zhì)可能對(duì)動(dòng)物健康帶來(lái)負(fù)面影響。酒糟主要毒性成分體外拮抗物質(zhì)篩選結(jié)果，以1%的氧化鎂效果最好，考慮動(dòng)物鎂攝入過(guò)多的風(fēng)險(xiǎn)，結(jié)合體外篩選試驗(yàn)的結(jié)果，建議生產(chǎn)中氧化鎂的使用濃度選擇為0.5%～1%。