冷凍濃縮海鏈藻在南美白對(duì)蝦育苗中的應(yīng)用

彭小偉,王兆偉*，陳偉耀

(1.寧波浮田生物技術(shù)有限公司,浙江寧波 315700；2.湛江豐聯(lián)水產(chǎn)有限公司,廣東湛江 524200)

微藻是一類分布廣泛、營(yíng)養(yǎng)豐富的自養(yǎng)生物，通常含有30%～40%蛋白質(zhì)、10%～20%脂肪酸、5%～15%碳水化合物，富含EPA、ARA 和DHA等多不飽和脂肪酸，對(duì)幼苗發(fā)育具有重要作用，在魚(yú)、蝦、蟹、貝等水產(chǎn)動(dòng)物育苗中不可或缺。海鏈藻屬于硅藻門，含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素、脂肪酸和礦物質(zhì)，在育苗中海鏈藻能顯著促進(jìn)對(duì)蝦生長(zhǎng)發(fā)育和免疫力。

在對(duì)蝦育苗中，微藻餌料一般以鮮藻投喂。但鮮活海藻往往由于供應(yīng)不及時(shí)，與育苗進(jìn)度脫節(jié)，很難滿足育苗中對(duì)鮮活餌料的需求。冷藏濃縮藻(0～4 ℃)雖然可以部分緩解供應(yīng)脫節(jié)的問(wèn)題，但其保存時(shí)間有限，也不能徹底解決這個(gè)問(wèn)題。因此，筆者探索冷凍濃縮海鏈藻對(duì)南美白對(duì)蝦幼體培育中變態(tài)存活率的影響，以期為冷凍濃縮海鏈藻在對(duì)蝦育苗中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

將750萬(wàn)蝦卵放入20 m育苗池中孵化，約24 h后用配合飼料結(jié)合寧波浮田生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的冷凍濃縮海鏈藻(250 mL/包，10cells/mL， -20 ℃存儲(chǔ))經(jīng)200～250目篩網(wǎng)搓洗后投喂蝦苗；每4 h投喂上述餌料一次，配合飼料的量根據(jù)水體中餌料的殘留和蝦的攝食情況進(jìn)行調(diào)整，冷凍藻每次投1～2包。當(dāng)蝦苗進(jìn)入Z3階段后，不再投喂冷凍濃縮藻。在整個(gè)培育過(guò)程中，2～4 h取樣一次，鏡檢，確定蝦苗所處的時(shí)期和不同時(shí)期蝦苗的數(shù)量。整個(gè)試驗(yàn)階段水溫保持32 ℃左右。試驗(yàn)持續(xù)6 d。

將500萬(wàn)蝦卵分別放入2個(gè)15 m的育苗池中孵化，約24 h后分別用冷凍和冷藏濃縮海鏈藻(10cells/mL，存放約7 d，存儲(chǔ)溫度0～4 ℃)經(jīng)200～250目篩網(wǎng)搓洗后投喂蝦苗，直至蝦苗進(jìn)入Z3階段；進(jìn)入Z3后餌料投喂改為配合飼料。在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程，2～4 h取樣一次，鏡檢，確定蝦苗所處的時(shí)期和不同時(shí)期蝦苗的數(shù)量。整個(gè)試驗(yàn)階段水溫保持32 ℃左右。試驗(yàn)持續(xù)6 d。

上述2個(gè)試驗(yàn)是在廣東湛江市東海島志誠(chéng)苗廠開(kāi)展。

試驗(yàn)在廣東牧海生物技術(shù)有限公司徐聞縣下洋基地開(kāi)展。對(duì)照組投喂蝦片(簡(jiǎn)稱蝦片組)，試驗(yàn)組分別投喂鮮活非濃縮海鏈藻(濃度10萬(wàn)～20萬(wàn)/mL，簡(jiǎn)稱鮮活組)、冷凍濃縮海鏈藻(10cells/mL，低于-20 ℃存儲(chǔ)，簡(jiǎn)稱冷凍組)和冷藏普通濃縮海鏈藻(2×10cells/mL，0～4 ℃存儲(chǔ)，簡(jiǎn)稱冷藏組)。每個(gè)處理組2個(gè)平行，每個(gè)平行南美白對(duì)蝦幼體3萬(wàn)尾，育苗水體為400 L，試驗(yàn)周期為6 d(144 h)。

蝦卵孵化約24 h后開(kāi)始餌料投喂試驗(yàn)，此時(shí)蝦幼體基本進(jìn)入溞狀階段。幼體培育條件及投喂策略見(jiàn)表1。其中，濃縮藻和蝦片投喂時(shí)要經(jīng)200～250目篩網(wǎng)搓洗投喂。每天08：00 測(cè)量對(duì)蝦幼體密度， 并根據(jù)幼體密度調(diào)整投餌量。每天16:00 取一定數(shù)量幼體進(jìn)行鏡檢,并記錄幼體發(fā)育變態(tài)時(shí)間及幼體數(shù)量變化。試驗(yàn)過(guò)程中維持溫度在32 ℃左右。幼體密度采用直接取樣計(jì)數(shù)。

表1 南美白對(duì)蝦溞狀幼體各期投喂量Table 1 Feeding amount of daphnia larvae of Litopenaeus vannamei at each stage

2 結(jié)果與分析

在配合飼料中加入冷凍濃縮海鏈藻，蝦苗在6 d發(fā)育過(guò)程中經(jīng)過(guò)無(wú)節(jié)幼體(N，第一次投喂之前，即0 h之前)、Z1(0～32 h)、Z2(32～60 h)、Z3(60～116 h)和糠蝦(M)3個(gè)階段(圖1)。

圖1 不同階段幼體形態(tài)Fig.1 Larval morphology at different stages

無(wú)節(jié)幼體階段(N)，頭胸腹不分節(jié)，3對(duì)附肢，靠卵黃生活；溞1階段(Z1)，初步形成消化系統(tǒng)(腸道)，還沒(méi)有形成復(fù)眼(有雛形)；溞2階段(Z2)，復(fù)眼有眼柄、額劍；溞3階段(Z3)，尾部形成尾扇，但腹部無(wú)乳頭狀凸起；糠1階段(M1)，腹部形成乳頭狀凸起；糠2階段(M2)，乳頭上形成第2節(jié)。

蝦苗幼體各階段的存活率為溞狀成活率79.7%，糖蝦成活率78.8%。無(wú)節(jié)幼體是第一次投喂2～3 h前的數(shù)量；溞狀幼體基本上是Z3的數(shù)量，而糠蝦的數(shù)量是糠1的數(shù)量，到糠3時(shí)可能還會(huì)下降。

這表明冷凍藻添加到配合飼料中，不會(huì)抑制蝦苗的變態(tài)發(fā)育，蝦可以順利進(jìn)入Z3和糠蝦階段。

蝦卵放入育苗池約24 h時(shí)開(kāi)始投喂?jié)饪s海鏈藻。初始投喂6袋，隨后根據(jù)蝦苗池中藻細(xì)胞濃度來(lái)添加濃縮藻，使池中藻細(xì)胞濃度維持在5×10cells/mL左右。進(jìn)入Z3階段才開(kāi)始投喂配合飼料。

表2反映了冷凍組、冷藏組中蝦不同時(shí)期所處狀態(tài)。由于兩池外界條件基本一致，所以，兩池中蝦的狀態(tài)很大程度上可能是由投喂的餌料藻所影響。同時(shí)培養(yǎng)的蝦苗，冷凍組比冷藏組中蝦苗幼體更早進(jìn)入Z3和糠蝦階段。冷凍存儲(chǔ)的藻比冷藏存儲(chǔ)的藻更有利于蝦苗變態(tài)。

不同處理組蝦苗幼體不同階段存活率見(jiàn)表3。由表3可知，冷藏組溞狀幼體成活率和糠蝦成活率均比冷凍組低。這進(jìn)一步說(shuō)明冷凍濃縮海鏈藻可能比冷藏海鏈藻更適合作為對(duì)蝦的開(kāi)口料。

表2 不同池中蝦苗所處周期Table 2 Period of shrimp fry in different ponds

隨餌料培育南美白對(duì)蝦時(shí)間的增加，各組南美白對(duì)蝦存活率逐漸降低。6 d后，冷凍組、冷藏組和鮮活組及蝦片組南美白對(duì)蝦幼體存活率分別為(52.00±4.00)%、(54.00±2.00)%、(56.00±2.67)%、(38.00±0.67)%。其中， 蝦片組南美白對(duì)蝦幼體存活率明顯低于海鏈藻組，后三者之間差別不明顯(圖2)。鴻興蝦苗廠(湛江徐聞前山鎮(zhèn))在南美白對(duì)蝦幼體養(yǎng)殖階段(溞狀階段)，在配合飼料中添加冷藏普通濃縮海鏈藻2瓶/(池·d)，相比僅使用配合飼料的池子，南美白對(duì)蝦攝食率高，生長(zhǎng)速度快，活力強(qiáng)，成活率提高20%以上。

表3 南美白對(duì)蝦的孵化率和成活率Table 3 Hatching rate and survival rate of Litopenaeus vannamei

圖2 不同處理下蝦苗幼體存活率Fig.2 Survival rate of shrimp larvae under different treatments

微藻對(duì)南美白對(duì)蝦幼體各期變態(tài)的影響見(jiàn)表4。微藻處理組的變態(tài)時(shí)間明顯比僅投喂蝦片的處理組短。到第4天時(shí)，微藻處理組蝦苗幼體基本處于Z2向Z3的過(guò)渡，而蝦片組尚處于Z1、Z2階段；到第6天，微藻組處于向糠蝦過(guò)渡階段，此時(shí)蝦片組仍處于溞狀階段。

表4 南美白對(duì)蝦幼體在飼養(yǎng)下所處的周期Table 4 Cycle of shrimp larvae of Litopenaeus vannamei under feeding

在微藻處理組中，雖然各處理組對(duì)南美白對(duì)蝦幼體各期變態(tài)和存活率影響差別不大，但各組加入的藻液體積差別較大。尤其是添加鮮活海鏈藻的處理組，到第3天蝦苗計(jì)數(shù)時(shí)，加入的藻液體積幾乎是原始苗池水樣體積的50%。在實(shí)際生產(chǎn)育苗中，過(guò)多藻液體積的添加可能對(duì)育苗帶來(lái)風(fēng)險(xiǎn)，如可能引起應(yīng)急反應(yīng)等。

3 結(jié)論與討論

在水產(chǎn)動(dòng)物育苗過(guò)程中，餌料不合適或者營(yíng)養(yǎng)不足會(huì)影響幼體存活率和變態(tài)。在該試驗(yàn)條件下，綜合幼體變態(tài)和存活率等指標(biāo)表明，投喂海鏈藻的南美白對(duì)蝦幼體存活率相對(duì)較好，能較為順利地變態(tài)到下一期，且較直接投喂蝦片的南美白對(duì)蝦幼體變態(tài)時(shí)間更短。這說(shuō)明試驗(yàn)條件下的海鏈藻具有足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)促使蝦苗變態(tài)發(fā)育。微藻的總脂含量和各種脂肪酸的組成比率，是其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的主要指標(biāo)。試驗(yàn)中使用的威氏海鏈藻，其總脂含量約為8%，且含有20%的EPA和5%的DHA，符合南美白對(duì)蝦生長(zhǎng)對(duì)脂質(zhì)的需求(6.0%～7.5%)；而其具有的EPA 、DHA是許多魚(yú)類幼體、對(duì)蝦幼體和雙殼類幼體的必需脂肪酸，可以促進(jìn)幼體的生長(zhǎng)、發(fā)育，提高幼體的存活率。在對(duì)蝦育苗中，角毛藻是一種常用的優(yōu)質(zhì)開(kāi)口餌料。研究表明，威氏海鏈藻較角毛藻更能提高中國(guó)對(duì)蝦的成活率和蛻變率，并認(rèn)為該藻中有更高含量的DHA，且大的細(xì)胞個(gè)體(7～15 μm)，投喂的中國(guó)對(duì)蝦可以獲得更多的蛋白質(zhì)和脂類營(yíng)養(yǎng)。總之，威氏海鏈藻具有良好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，可以用作南美白對(duì)蝦的開(kāi)口餌料。該研究以威氏海鏈藻投喂日本對(duì)蝦的幼體同樣得到了較好的結(jié)果。此外，湛江豐聯(lián)水產(chǎn)有限公司(湛江雷州覃斗鎮(zhèn))用冷凍濃縮海鏈藻投喂沙蟲(chóng)也得到了良好的效果：分別用冷凍海鏈藻和配合飼料投喂沙蟲(chóng)30 d，投喂冷凍濃縮海鏈藻組的沙蟲(chóng)生物量相對(duì)投喂配合飼料組的沙蟲(chóng)生物量高約30%，且投喂冷凍濃縮海鏈藻組，沙蟲(chóng)攝食更快，活力更高。

微藻的營(yíng)養(yǎng)組成在保存和存儲(chǔ)過(guò)程中會(huì)發(fā)生變化，由于脂肪酸是主要營(yíng)養(yǎng)成分且容易被氧化，所以，脂肪酸尤其是多不飽和脂肪酸中的EPA和DHA變化尤其受人關(guān)注。朱葆華等在不同溫度下儲(chǔ)存等鞭金藻和綠色巴夫藻(4、-5、-22 ℃)，發(fā)現(xiàn)其不飽和脂肪酸不隨保存時(shí)間的延長(zhǎng)發(fā)生顯著變化，其多不飽和脂肪酸更是趨于穩(wěn)定，保存沒(méi)有減少藻細(xì)胞脂肪酸的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值；王培磊等研究表明，低溫保存150 d，小球藻和球等鞭金藻多不飽和脂肪酸含量變化不明顯，且濃縮保存藻投喂中國(guó)對(duì)蝦和輪蟲(chóng)的效果與普通藻無(wú)顯著差異。該研究表明，用冷凍的藻泥(低于-20 ℃)或普通濃縮的藻液(0～4 ℃)代替新鮮的藻液是完全可能的。但冷藏濃縮的海鏈藻(0～4 ℃)投喂蝦苗的效果較冷凍濃縮的效果差，推測(cè)，雖然其不飽和脂肪酸的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值沒(méi)有降低，但由于藻細(xì)胞濃度太高，胞間營(yíng)養(yǎng)豐富，在相對(duì)較高的溫度下(0～4 ℃)，細(xì)胞體內(nèi)反應(yīng)和胞外的微生物作用，可能產(chǎn)生了一些對(duì)對(duì)蝦幼體發(fā)育有害的物質(zhì)。藻泥在長(zhǎng)期保存后發(fā)黑，產(chǎn)生刺激性氣體似乎可以佐證這一點(diǎn)。因此，要想長(zhǎng)期維持高濃縮海鏈藻的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，對(duì)其采用低溫冷凍的方式是可行的也是必須的。

總之，將海鏈藻產(chǎn)品制成高濃縮的狀態(tài)，而后冷凍低溫存儲(chǔ)，可以較好地保存海鏈藻的影響價(jià)值，緩解海鏈藻生產(chǎn)與育苗環(huán)節(jié)的脫節(jié)。冷凍海鏈藻可以替代新鮮海鏈藻用作對(duì)蝦及其他一些海產(chǎn)動(dòng)物的良好餌料。