致積食物炭劑對(duì)食積小鼠模型治療效果探究

高 晴

河南中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院， 河南省鄭州市 450000

食積又稱(chēng)“積滯”，是臨床常見(jiàn)的脾胃病證。據(jù)調(diào)查統(tǒng)計(jì)，世界范圍內(nèi)功能性消化不良的患病率為19%～41%，我國(guó)功能性消化不良的患病率為10%～30%，占消化門(mén)診的50%左右。西醫(yī)對(duì)于功能性消化不良的治療效果不佳，臨床常用藥物存在副作用多及易復(fù)發(fā)等缺點(diǎn)。而中醫(yī)對(duì)食積的治療方式多種多樣且療效好。依據(jù)中藥炮制理論，將藥物炒焦、炒炭都能增強(qiáng)藥物消食健脾的功效。將食物制成炭劑治療食積是一種民間療法，在很多地方皆有此法針對(duì)食積的應(yīng)用。本研究旨在探索致積食物炭劑對(duì)食積的影響以及作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 清潔級(jí)昆明種雄性小鼠60只，體質(zhì)量(24.0±5.0)g。隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組、模型組、致積食物炭劑低劑量組、致積食物炭劑中劑量組、致積食物炭劑高劑量組和多潘立酮組，每組10只。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 多潘立酮片(修正藥業(yè)集團(tuán)長(zhǎng)春高新制藥有限公司，批號(hào)H20093061)、致積食物炭劑(由面粉、豆粉、奶粉、魚(yú)松按照1∶2∶1∶1的比例，加水混合、烘干制成的飼料炒炭而成)、炭末半固體膏(取羧甲基纖維素鈉8g，溶于200ml水中，分別加入口服葡萄糖6g、全脂奶粉12g、活性炭3g、可溶性淀粉6g，均勻攪拌，配制成200ml，約200g的炭末半固體膏)，5-羥色胺(HT)ELISA酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(上海聯(lián)碩生物科技有限公司，M20170417)。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 MR-96A型酶標(biāo)儀(南京貝登醫(yī)療股份有限公司)，HWIR200A型烘干機(jī)(山東科弘微波能有限公司)，2 500r/min型離心機(jī)(常州恩培儀器制造有限公司)BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)，HL-ZHQ型張力換能器(北京合力科創(chuàng)科技發(fā)展有限公司)，ZH-SX型HW-300型恒溫平滑肌槽(安徽正華生物儀器設(shè)備公司)。

1.4 方法

1.4.1 模型制備：除空白對(duì)照組正常飼養(yǎng)外，其余各組喂食精制飼料(奶粉、面粉、豆粉、魚(yú)松按1∶2∶1∶1的比例加少量蒸餾水做成短柱狀，形狀與普通小鼠顆粒飼料相似，烘干，制成飼料)[1]；每天每只小鼠0.2ml全脂牛奶灌胃[2]，空白對(duì)照組以等量生理鹽水灌胃，連續(xù)7d。相比于空白對(duì)照組，造模后小鼠精神萎靡、進(jìn)食量減少、體形消瘦，毛色無(wú)光澤，蜷縮聚堆，大便溏軟呈棕黃色; 用半固體膏檢測(cè)胃排空率和小腸推進(jìn)率，若相比于空白對(duì)照組，模型組小鼠胃排空率降低，小腸推進(jìn)率降低，說(shuō)明模型制備成功[3]。

1.4.2 藥物制備及給藥：(1)藥物制備：小鼠用中藥、西藥劑量相當(dāng)于國(guó)家藥典人體用量的9.01倍[4]，折算動(dòng)物給藥劑量時(shí)，按人的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量70kg計(jì)算小鼠按體表面積折算的等效劑量。小鼠精制飼料炒制成炭劑，根據(jù)炭劑藥物一般臨床劑量折算為小鼠灌胃劑量，按照低劑量組1.1g/kg，中劑量1.9g/kg，高劑量2.6g/kg；以蒸餾水為稀釋劑，各劑量炭劑分別用10ml蒸餾水煎至沸騰，當(dāng)溫度降至30℃左右時(shí)取0.2ml藥液給藥。按照多潘立酮成人1片/次,3次/d,70kg成人使用量是35mg,小鼠每日使用量即為4.5mg/kg，取蒸餾水將多潘立酮配置成為0.2ml藥液。(2)給藥:致積食物炭劑組小鼠，按各組藥劑劑量(低劑量組1.1g/kg，中劑量1.9g/kg，高劑量2.6g/kg)[5-7]給藥液0.2ml/只，1次/d；多潘立酮組小鼠按3.9mg/kg給藥液0.2ml/只，1次/d；空白對(duì)照組和模型組灌胃生理鹽水0.2ml/只，1次/d，連續(xù)7d。各組小鼠均正常飲水。

1.5 觀測(cè)指標(biāo)

1.5.1 小鼠一般狀態(tài)、進(jìn)食量考察：每天觀察小鼠的一般狀態(tài)，包括皮毛、活動(dòng)度、糞便狀態(tài)等。其間每日16:00對(duì)每只小鼠進(jìn)行稱(chēng)重，記錄，每日16:00每籠給予飼料60g，并記錄各組小鼠每日進(jìn)食量。1.5.2 胃排空率和小腸推進(jìn)率的測(cè)定：末次給藥后1h，將禁食不禁水18h的小鼠灌胃給予炭末半固體膏，0.3ml/只。30min后脫頸脫臼處死小鼠，剖開(kāi)腹腔，結(jié)扎胃賁門(mén)和幽門(mén)，剪取完整胃，濾紙擦干稱(chēng)胃全重。生理鹽水洗出胃內(nèi)容物后，濾紙擦干稱(chēng)胃凈重，與此同時(shí)取出小腸，輕輕剝離腸系膜后將小腸拉成直線，測(cè)量幽門(mén)至炭末半固體膏前沿的距離以及幽門(mén)至回盲部的小腸全長(zhǎng)。計(jì)算胃排空率和小腸推進(jìn)率[8]。胃排空率(%)=[1-(胃全重-胃凈重)/0.3ml炭末半固體膏質(zhì)量]×100%。小腸推進(jìn)率=幽門(mén)至炭末半固體膏前沿的距離/幽門(mén)至回盲部全長(zhǎng)×100%。

1.5.3 BL-420小鼠離體小腸平滑肌收縮力的評(píng)價(jià)：取實(shí)驗(yàn)組小鼠處死，取出小腸，制成離體小腸平滑肌標(biāo)本。調(diào)節(jié)好儀器，待系統(tǒng)穩(wěn)定后，開(kāi)始試驗(yàn)。當(dāng)小腸收縮曲線穩(wěn)定后，標(biāo)記、觀察、記錄收縮曲線。

1.5.4 血清中5-羥色胺(5-HT)水平的檢測(cè)：末次給藥后，空白對(duì)照組、致積食物炭劑組、多潘立酮組小鼠禁食不禁水18h，眼眶取血，于4℃，2 500r/min條件下離心，取上層血清。采用ELISA法測(cè)定血清中5-HT水平[9]，整個(gè)過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作程序進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 食積小鼠一般狀態(tài)觀察 造模成功后，空白對(duì)照組小鼠精神狀態(tài)良好，行動(dòng)活潑，皮毛有光澤，糞便色澤偏暗黃，質(zhì)干燥；而其余造模組小鼠食欲不振、精神狀態(tài)較差，活動(dòng)減少、蜷縮扎堆，皮毛無(wú)光澤，糞便偏黑紅，質(zhì)黏重。用藥7d后，與模型組相比，多潘立酮組脫毛程度低，其余給藥組脫毛程度無(wú)明顯變化。而糞便量及糞便質(zhì)量無(wú)明顯變化。

2.2 致積食物炭劑對(duì)食積小鼠進(jìn)食量的影響 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每組小鼠每天喂食60g飼料，定時(shí)稱(chēng)量剩余飼料，經(jīng)過(guò)計(jì)算得到每組小鼠7d進(jìn)食量。與空白對(duì)照組相比，模型組進(jìn)食量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，各給藥組進(jìn)食量增加，但組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 致積食物炭劑對(duì)食積小鼠進(jìn)食量的影響

2.3 致積食物炭劑對(duì)食積小鼠胃排空率和小腸推進(jìn)率的影響 與空白對(duì)照組相比，模型組胃排空率和小腸推進(jìn)率顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，提示造模成功；與模型組相比，致積食物炭劑中、高劑量組胃排空率和小腸推進(jìn)率顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比，致積食物炭劑低劑量組和多潘立酮組的胃排空率和小腸推進(jìn)率均升高，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 致積食物炭劑對(duì)食積小鼠胃排空率和小腸推進(jìn)率的影響

2.4 致積食物炭劑對(duì)食積小鼠小腸平滑肌收縮力的影響 與空白對(duì)照組相比，模型組小腸平滑肌收縮力降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比，致積食物炭劑低、中、高劑量組和多潘立酮組小腸平滑肌收縮力上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。詳見(jiàn)表3。

表3 致積食物炭劑對(duì)食積小鼠小腸平滑肌收縮力的影響

2.5 致積食物炭劑對(duì)食積小鼠血清5-HT水平影響 與空白對(duì)照組相比，模型組5-HT水平顯著降低(P<0.01)；與模型組對(duì)比，致積食物炭劑組和多潘立酮組5-HT水平顯著升高(P<0.01)。詳見(jiàn)表4。

表4 致積食物炭劑對(duì)食積小鼠血清5-HT水平影響

3 討論

3.1 致積食物炭劑治療食積的依據(jù) 《黃帝內(nèi)經(jīng)》首次記載“積”，常指各種病理因素，例如氣、血、痰、食等停滯并聚集不行的病癥。依據(jù)中藥炮制理論，將藥物炒焦、炒炭都能增強(qiáng)藥物消食健脾的功效[10]，如山楂炭、檳榔炭皆有較好消積效果。將食物制成炭劑治療食積是一種民間療法，在很多地方皆有此法針對(duì)食積的應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)民間療法，探索致積食物炭劑對(duì)食積的影響及作用機(jī)制。

3.2 造模方法的確定 食積是中醫(yī)學(xué)特有的說(shuō)法，是臨床常見(jiàn)的脾胃疾病，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)功能性消化不良及胃腸功能紊亂疾病較為接近。多因暴飲暴食、飲食不當(dāng)(包括過(guò)量進(jìn)食、進(jìn)食不易消化之物、饑飽不調(diào)、飲食不潔等)影響機(jī)體消化功能，使食物停滯而形成的一種胃腸道疾患[11]。查找文獻(xiàn)可知，小鼠食積模型建造方法大同小異。從處理因素分析來(lái)看，特制飼料結(jié)合牛奶灌胃的居多，但牛奶的濃度并不統(tǒng)一，50%、52%以及25%的牛奶均有報(bào)道，本次實(shí)驗(yàn)選擇給小鼠喂食高蛋白的精制飼料，并且每天給予小鼠1次等量全脂牛奶灌胃，以此建造小鼠食積模型。從動(dòng)物品種分析來(lái)看，以昆明小鼠居多，并且大部分研究者青睞于雄性小鼠，這可能與雌雄小鼠能量代謝存在差異性有關(guān)，因此本次小組實(shí)驗(yàn)中選擇60只雄性小鼠。從造模時(shí)長(zhǎng)分析來(lái)看[12]，食積小鼠模型造模時(shí)長(zhǎng)非常不統(tǒng)一，但以7d居多，所以此次實(shí)驗(yàn)小鼠造模時(shí)間為7d。

3.3 指標(biāo)討論

3.3.1 小鼠狀態(tài)、進(jìn)食量、糞便狀態(tài)觀測(cè)指標(biāo)的討論：觀察小鼠狀態(tài)、進(jìn)食量、糞便狀態(tài)是評(píng)價(jià)小鼠是否食積造模成功的重要依據(jù)。當(dāng)大量高蛋白、高脂肪的食物積滯于小鼠胃腸道，會(huì)造成小鼠胃腸蠕動(dòng)減慢，出現(xiàn)胃腸動(dòng)力障礙，導(dǎo)致小鼠糞便排泄障礙，進(jìn)食量減少，從而進(jìn)一步影響小鼠的精神活動(dòng)狀態(tài)。在此次實(shí)驗(yàn)中，記錄每天各組小鼠總的進(jìn)食量進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠進(jìn)食量日益減少，且精神狀態(tài)萎靡，喜扎堆；毛色灰暗，有少量脫毛現(xiàn)象；糞便排泄量少，整體黏膩質(zhì)軟,呈棕黃色。由此可見(jiàn)模型組小鼠食積表現(xiàn)明顯且日益加重，表示小鼠造模成功。

3.3.2 胃排空率和小腸推進(jìn)率指標(biāo)討論：胃腸的運(yùn)動(dòng)功能是消化系統(tǒng)最重要的生理功能之一，胃排空率是反映胃腸推動(dòng)力的最直觀指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，與模型組比較，致積食物炭劑中、高劑量組胃排空率和小腸推進(jìn)率顯著增高(P<0.01)，致積食物炭劑低劑量組胃排空率和小腸推進(jìn)率均增高，但結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？赡艹霈F(xiàn)的原因有：(1)用藥時(shí)間短：用藥組共只用了7d藥，且在用藥過(guò)程中仍然喂養(yǎng)小鼠精制飼料，可能導(dǎo)致對(duì)最終的胃排空率數(shù)據(jù)產(chǎn)生影響；(2)操作手法不夠嫻熟：給小鼠灌胃喂藥過(guò)程中藥物有一定損耗，導(dǎo)致最終喂藥量低于實(shí)際喂藥量，影響用藥組的胃排空率。

3.3.3 BL-420小鼠離體小腸平滑肌收縮力指標(biāo)的討論：平滑肌的緊張性收縮是小腸保持其基本形狀、進(jìn)行其他形式運(yùn)動(dòng)的基礎(chǔ)。當(dāng)小腸平滑肌的緊張性收縮增強(qiáng)時(shí)，有利于小腸內(nèi)容物的混合和運(yùn)送。但功能性消化不良時(shí)，會(huì)抑制小腸推動(dòng)和收縮，故可通過(guò)測(cè)定小鼠離體小腸平滑肌收縮力的強(qiáng)弱來(lái)比較各組致積小鼠的治療效果[13]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，相較于模型組，致積食物炭劑低、中、高劑量組和多潘立酮組小腸平滑肌張力上升(P<0.01)。提示致積食物炭劑和多潘立酮對(duì)食積動(dòng)物小腸平滑肌收縮功能改善有一定作用。

3.3.4 血清5-HT指標(biāo)的討論：5-HT既是一種神經(jīng)遞質(zhì)，又是一種血管活性物質(zhì)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周?chē)M織中起著多種生理作用，其本身也是強(qiáng)有力的腸道促分泌素。而5-HT受體的激活對(duì)胃腸道平滑肌張力也有著顯著的影響。臨床上一般將5-HT受體興奮劑如西沙必利、莫沙必利等作為治療功能性消化不良的胃腸動(dòng)力藥[14]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)小鼠血清中5-HT水平的檢測(cè)，探究致積食物的炭劑對(duì)食積小鼠的作用機(jī)制。結(jié)果顯示，與模型組對(duì)比，致積食物炭劑組和多潘立酮組5-HT水平顯著升高(P<0.01)。

本研究表明致積食物炭劑能夠增加食積小鼠的進(jìn)食量，可顯著升高食積小鼠的胃排空率和小腸推進(jìn)率，可使食積小鼠小腸平滑肌收縮力上升，可致食積小鼠血清5-HT水平顯著上升。綜上所述，我們得出初步結(jié)論，致積食物炭劑對(duì)食積小鼠的治療效果較為明顯。