非小細(xì)胞肺癌組織中腫瘤壞死因子-α、細(xì)胞角蛋白19片段抗原21-1的表達(dá)與疾病分期的相關(guān)性分析

王晨亮 張 菁 劉浩茹 李觀華

1.江西省九江市第一人民醫(yī)院病理科，江西九江 332000；2.江西省九江市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西九江 332000

非小細(xì)胞肺癌（nonsmall cell lung cancer，NSCLC） 是一種常見的發(fā)病率和死亡率極高的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤。因?yàn)镹SCLC 早期無特異性癥狀，一些患者在確診時(shí)已經(jīng)是晚期，早期診斷和早期治療對(duì)于改善肺癌預(yù)后尤為重要。腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）是重要細(xì)胞因子參與慢性炎癥反應(yīng)的，可刺激腫瘤生長(zhǎng)。目前有研究指出，TNF-α 的應(yīng)答基因——腫瘤壞死因子α 誘導(dǎo)蛋白2（TNF-α induced protein 2，TNFAIP2）在NSCLC 中高表達(dá)，并與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有密切的聯(lián)系。細(xì)胞角蛋白19 片段抗原（cytokeratin 19 fragment antigen，CYFRA21-1）是臨床常用的腫瘤標(biāo)志物，已有研究證實(shí)其對(duì)肺癌的診斷具有一定價(jià)值。本研究采用免疫組化法檢測(cè)TNF-α、CYFRA21-1 在癌組織中的表達(dá)情況及疾病分期的關(guān)系，并分析它們之間的相關(guān)性及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年10月至2021年11月九江市第一人民醫(yī)院收治的60 例NSCLC 患者為研究對(duì)象。其中男34 例，女26 例；年齡31～78 歲，平均（60.12±6.40）歲；TNM 臨床分期：Ⅰ期13 例，Ⅱ期16 例，Ⅲ期19 例，Ⅳ期12 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合指南中相關(guān)診斷及分期標(biāo)準(zhǔn)；②符合手術(shù)指征；③患者皆自愿參與研究并簽署相關(guān)文件以示同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①接受過放化療治療者；②合并其他惡性腫瘤者；③病理資料不全者。本研究已通過醫(yī)院倫理委員會(huì)審批。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 所有患者皆行手術(shù)切除NSCLC 組織。采集患者癌組織、癌旁組織（距離癌組織5 cm 以上）留作樣本，采用4%多聚甲醛固定樣本，并行常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片（厚度為3 μm），進(jìn)行免疫組化標(biāo)記。

1.2.2 免疫組化 樣本脫蠟、水化，浸泡在枸櫞酸緩沖液（0.01 mol/L、95℃）中，同時(shí)熱修復(fù)，培養(yǎng)后于3%HO的環(huán)境中，10 min 后加入山羊血清封閉，在25～27℃的溫度下孵育半小時(shí)，之后抽離封閉液，加入一抗，將其置于4℃的冰箱培養(yǎng)過夜，第二天加入二抗，并在恒溫箱培養(yǎng)半小時(shí)（溫度37℃），應(yīng)用PBS 沖洗2～4 次后，DAB 顯色、封片。陽(yáng)性、陰性表達(dá)分別為胞漿呈清晰棕色、細(xì)胞漿無棕色或與背景著色一致。采用1000 細(xì)胞計(jì)數(shù)，以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比判斷TNF-α表達(dá)分級(jí)：陰性（-）：≤10%；陽(yáng)性（+）：＞10%，其中弱陽(yáng)性：11%～50%，中度陽(yáng)性：＞50%～80%，強(qiáng)陽(yáng)性：＞80%。用已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS 代替一抗作為陰性對(duì)照。每張切片隨機(jī)選取10 個(gè)視野，通過Image J 軟件分析CYFRA21-1 表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 癌組織及癌旁組織中TNF-α、CYFRA21-1 表達(dá)的比較

癌組織中TNF-α 表達(dá)陽(yáng)性率及CYFRA21-1 表達(dá)水平均高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 癌組織及癌旁組織中TNF-α、CYFRA21-1 表達(dá)的比較

2.2 不同病理分期TNF-α、CYFRA21-1 表達(dá)情況的比較

病理分期Ⅲ～Ⅳ期患者的癌組織TNF-α、CYFRA21-1 表達(dá)均高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表2）。

表2 不同病理分期TNF-α、CYFRA21-1 表達(dá)情況的比較

2.3 不同病理分期TNF-α 表達(dá)陽(yáng)性度的比較

病理分期Ⅲ～Ⅳ患者TNF-α 的陽(yáng)性表達(dá)度強(qiáng)于Ⅰ～Ⅱ患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表3）。

表3 不同病理分期TNF-α 表達(dá)陽(yáng)性度的比較[n（%）]

2.4 TNF-α、CYFRA21-1 表達(dá)與病理分期的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析顯示，患者癌組織內(nèi)TNF-α 表達(dá)陽(yáng)性程度、CYFRA21-1 表達(dá)水平均與病理分期呈正相關(guān)（P＜0.05）（表4）。

表4 TNF-α、CYFRA21-1 與病理分期的相關(guān)性分析

3 討論

肺癌是目前全球范圍內(nèi)對(duì)人類生命威脅最大的惡性腫瘤之一，關(guān)于肺癌的病因?qū)W、預(yù)防、診斷、治療已經(jīng)成為全世界的重要課題。其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，有研究指出與廚房油煙、吸煙、遺傳、不良工作環(huán)境、電離輻射、肺部慢性疾病等因素有關(guān)，肺癌的病因多樣，至今尚不完全明確。持續(xù)性慢性炎癥在多種腫瘤（前列腺癌、肺癌、膀胱癌、結(jié)直腸癌等）的發(fā)生、進(jìn)展以及癌癥患者的預(yù)后中起到重要作用。TNF-α 是一種重要的多功能炎癥因子，其能夠?qū)е赂鞣N腫瘤發(fā)生出血性壞死，在腫瘤微環(huán)境中TNF-α 的促腫瘤作用已被廣泛證明，是惡性腫瘤與炎癥相互調(diào)控的中介分子之一。有研究指出，健康人群血清中往往檢測(cè)不出TNF-α 的表達(dá)，然而在多種癌癥如乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌等患者血清中卻能夠檢測(cè)到很高的TNF-α水平。腫瘤患者特別是預(yù)后較差的進(jìn)展性腫瘤患者血清中TNF-α 水平明顯升高，提示TNF-α 與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切的聯(lián)系。本研究結(jié)果顯示，TNF-α 在癌旁組織基本無表達(dá)，在癌組織組中表達(dá)總陽(yáng)性率為90%（54/60），高于癌旁組織（P＜0.05），提示TNF-α 高表達(dá)與NSCLC 發(fā)生發(fā)展有一定的聯(lián)系。且本研究結(jié)果還顯示Ⅲ～Ⅳ期患者癌組織TNF-α 表達(dá)陽(yáng)性率高于Ⅰ～Ⅱ期患者癌組織，相關(guān)系分析結(jié)果指出癌組織TNF-α 表達(dá)與NSCLC 疾病病理分析呈正相關(guān)（P＜0.05），提示TNF-α 表達(dá)陽(yáng)性程度越高，疾病惡化程度越高，提示癌組織TNF-α 表達(dá)作為臨床對(duì)NSCLC 疾病分期輔助診斷的應(yīng)用價(jià)值。

CYFRA21-1 主要存在于皮起源的腫瘤細(xì)胞，如食管癌、肺癌等的胞質(zhì)中，對(duì)NSCLC 的診斷有重要價(jià)值，多項(xiàng)研究中指出，NSCLC 患者中CYFRA21-1 呈現(xiàn)異常表達(dá)，CYFRA21-1 水平的變化與NSCLC 的發(fā)生發(fā)展具有密切聯(lián)系。段新春等在研究中指出，檢測(cè)CYFRA21-1 表達(dá)水平能夠NSCLC 患者治療效果，CYFRA21-1 的異常表達(dá)與NSCLC 患者的預(yù)后密切相關(guān)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NSCLC 癌組織較癌旁組織中CYFRA21-1 表達(dá)水平顯著增加，結(jié)果與既往研究吻合。本研究還對(duì)不同病理分期癌組織中CYFRA21-1 表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，Ⅲ～Ⅳ期NSCLC患者CYFRA21-1 表達(dá)相對(duì)較高，結(jié)果與扈成偉等、曾漢華等研究一致，表明CYFRA21-1 與NSCLC 患者腫瘤病理分期具有一定相關(guān)性。相關(guān)性分析結(jié)果指出NSCLC 患者癌組織CYFRA21-1 表達(dá)與腫瘤病理分期呈正相關(guān)（P＜0.05），提示NSCLC 癌組織CYFRA21-1 表達(dá)越高，病情越嚴(yán)重，為CYFRA21-1應(yīng)用于臨床NSCLC 病理分期的診斷提供數(shù)據(jù)支撐。本文旨在證明癌組織中TNF-α、CYFRA21-1 表達(dá)對(duì)臨床NSCLC 的鑒別及其疾病病理分期的意義，尚未對(duì)診斷效能進(jìn)行探究，本研究下一步將對(duì)兩者聯(lián)合檢測(cè)NSCLC 的診斷效能進(jìn)行研究，以期為TNF-α、CYFRA21-1 檢測(cè)作為臨床輔助診斷的推廣應(yīng)用，提供理論及數(shù)據(jù)支撐。

綜上所述，NSCLC 癌組織中TNF-α、CYFRA21-1呈現(xiàn)異常高表達(dá)，并與疾病病理分期具有一定相關(guān)性，與NSCLC 發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。