2019—2020年北疆部分地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒的抗體檢測與分析

常軍帥，李 娜，孫瓊飛，屈勇剛，梁 晏，張小玉，黨瑞瑩

（1.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆 石河子 832003；2.動物疾病防控兵團(tuán)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 石河子 832003）

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）又稱豬藍(lán)耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的，在世界范圍內(nèi)給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。PRRSV最早于1987年在美國被報(bào)道，由于該病毒既可垂直傳播，又可水平傳播，在短短的3～5年歐洲和亞洲也相繼出現(xiàn)PRRSV[1-2]。我國于1995年從北京某豬場流產(chǎn)胎兒內(nèi)首次分離出PRRSV[2]。之后的時(shí)間，經(jīng)典藍(lán)耳病毒株在我國各地蔓延，直到2006年夏季，我國多地豬群發(fā)生無名高熱病。該病主要以體溫升高（41 ℃）、呼吸困難、皮膚發(fā)紅為癥狀，死亡率高達(dá)30%，部分豬場死亡率接近100%，給養(yǎng)豬業(yè)造成了毀滅性的打擊，后經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)該毒株為經(jīng)典PRRSV的基因序列Nsp2區(qū)缺失了30AA，被命名為HP-PRRSV[3]。PRRSV可分為歐洲型和美洲型，在我國主要流行美洲型，但韓國、俄羅斯等國近幾年開始流行歐洲型PRRSV，我國也面臨著巨大的威脅[4]。豬場存在PRRSV后，很難徹底凈化，且一年四季均可發(fā)病。PRRSV不僅增加了豬只的死亡率，還嚴(yán)重?fù)p害患豬的繁殖和呼吸系統(tǒng)：母豬表現(xiàn)為發(fā)情推遲、久配不孕、死胎增多、妊娠后期流產(chǎn)；公豬精液帶毒、性欲下降；仔豬多成為僵豬，伴隨著呼吸困難、結(jié)膜水腫等癥狀；肥育豬的料重比增高[5]。對于PRRSV，生產(chǎn)中常采用疫苗免疫來進(jìn)行預(yù)防。PRRSV疫苗最常見的為弱毒苗和滅活苗，滅活苗可同時(shí)預(yù)防經(jīng)典PRRSV和HP-PRRSV，對母源抗體干擾性小，運(yùn)輸、儲存方便，是預(yù)防藍(lán)耳病的首選[6]。

為了解北疆部分地區(qū)PRRSV的免疫狀況，本試驗(yàn)在2019—2020年對采集的1 006份血樣進(jìn)行PRRSV抗體檢測，根據(jù)結(jié)果對各豬場、各豬群進(jìn)行免疫程序優(yōu)化，以減少PRRSV及其相關(guān)疾病的發(fā)生。

1 材料

1.1 樣品

2019年1月至2020年12月從新疆石河子市、伊犁哈薩克自治州、阿克蘇市、巴音郭楞蒙古自治州、奎屯市、塔城地區(qū)，按照各豬群總量5%～10%的比例隨機(jī)采集了1 006份血樣，立即分離血清，送至石河子大學(xué)動物科技學(xué)院進(jìn)行ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）抗體檢測。其中哺乳仔豬184份、保育豬112份、肥育豬96份、后備豬104份、繁殖母豬382份、種公豬128份。

1.2 材料和儀器

藍(lán)耳病病毒（PRRSV）抗體檢測試劑盒購自北京愛德士元亨生物科技有限公司；獸用一次性采血器5 mL為南昌市山力畜牧器械有限公司產(chǎn)品；自動酶標(biāo)儀購自青島智匯谷信息技術(shù)有限公司。

2 方法

2.1 樣品處理

取出試劑，室溫平衡30 min后震蕩混勻；血清樣放至室溫。

2.2 ELISA檢測方法

首先進(jìn)行樣品稀釋，吸取5 μL血清與195 μL樣品稀釋液吹打混勻后，吸100 μL到抗原包被孔內(nèi)。同時(shí)將陰、陽對照100 μL也加入抗原包被孔內(nèi)作為對照（各兩孔）。室溫下孵育30 min后，洗滌5次，拍干后每孔加100 μL酶標(biāo)抗體，相同的條件下再次孵育30 min。再次洗滌拍干，加入100 μL的TMB底物，室溫下放置避光處15 min，加入100 μL終止液，在OD650nm下測量數(shù)值并記錄。

2.3 結(jié)果判定

試驗(yàn)成立的標(biāo)準(zhǔn)為陰性對照平均值≤0.15，且陽性對照平均值-陰性對照平均值≥0.15，否則試驗(yàn)不成立，成立后才可計(jì)算S/P值。S/P中，S=樣品值-陰性對照平均值，P=陽性對照平均值-陰性對照平均值。當(dāng)S/P≥0.4判定為陽性，S/P＜0.40判定為陰性。

2.4 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算各組數(shù)據(jù)的差異。

3 結(jié)果

3.1 不同豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果

在采集的1 006份血清樣品中，874份為PRRSV抗體陽性樣品，陽性率達(dá)86.88%（874/1 006），S/P平均值為1.63。各豬場陽性率均超過了70%，其中A豬場陽性率最高，為92.50%（148/160）；B豬場陽性率最低，為76.60%（72/94）。A豬場的S/P平均值與B、C、D、E、F存在顯著差異（P＜0.05）；E豬場的S/P平均值與B、C、D場差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

表1 不同豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果

3.2 不同類別豬群PRRSV抗體檢測結(jié)果

各類別豬群P R R S V抗體陽性率均超過了70%，其中種公豬陽性率最高，為96.10%（123/128）；哺乳仔豬陽性率最低，為78.80%（145/184）。繁殖母豬的S/P平均值與哺乳仔豬、保育豬、后備豬、種公豬存在顯著差異（P＜0.05）；后備豬的S/P平均值與哺乳仔豬、保育豬、肥育豬、種公豬差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果見表2。

表2 不同類別豬群PRRSV抗體檢測結(jié)果

4 討論與分析

養(yǎng)豬業(yè)是新疆的支柱性產(chǎn)業(yè)之一，為新疆經(jīng)濟(jì)的持續(xù)增長做出了巨大貢獻(xiàn)。PRRSV可危害豬場各個豬群，為養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大損失。彭曉玲等[7]調(diào)查顯示，新疆地區(qū)規(guī)模化養(yǎng)豬場、散養(yǎng)戶及屠宰場均含有PRRSV，檢出率為0.65%。疫苗免疫作為預(yù)防PRRSV的首選，疫苗質(zhì)量、免疫途徑、免疫效果等就顯得尤為重要。免疫失敗不僅勞力傷財(cái)，還為豬場帶來巨大的生物安全隱患。ELISA抗體檢測方便快捷，可對免疫效果進(jìn)行評價(jià)，在生產(chǎn)中最為常見。

本試驗(yàn)檢測結(jié)果顯示，整體陽性率為86.88%（874/1 006），明顯高于國家規(guī)定的70%，說明各地區(qū)對PRRSV都給予了重視[8]。鄭丹陽等[9]檢測發(fā)現(xiàn)，2019年陜西省規(guī)?；i場的PRRSV抗體合格率為85.06%（5 324/6 259）；鄒秀明等[10]2016—2018年期間對懷化市豬場進(jìn)行的PRRSV抗體陽性率檢測結(jié)果為75.52%（2 462/3 260），這說明北疆地區(qū)對PRRSV的免疫效果要高于我國大部分地區(qū)。在各豬場中，B豬場的陽性率最低（76.60%），E豬場的S/P值最低（1.20），這說明這兩個豬場存在一定問題，可與A場進(jìn)行對比，及時(shí)找出漏洞，才能保證更加安全的持續(xù)生產(chǎn)。在各類別豬群中，種公豬和繁殖母豬的PRRSV的抗體陽性率均超過了90%，說明針對繁殖豬群免疫程序合理。相比而言，后備豬的陽性率有待提高。后備豬的健康與PRRSV抗體水平是豬場持續(xù)健康的保障，需維持豬群的高健康度，再配合優(yōu)秀的生產(chǎn)管理水平，才有可能發(fā)揮出后備豬的繁殖潛能，避免疾病的暴發(fā)，從而提升豬場效益。

對于PRRSV的預(yù)防，不僅需要疫苗的免疫，更需要嚴(yán)格管理和健康飼養(yǎng)。在生產(chǎn)中堅(jiān)持自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出的制度，不從PRRSV疫區(qū)引種，把好種源關(guān)頭。從母豬產(chǎn)前35 d開始飼喂?fàn)I養(yǎng)水平更高的飼料，更有助于增加胎兒對PRRSV的抵抗力。規(guī)范豬場消毒程序、進(jìn)場隔離制度，使PRRS的防控做到全面化、精細(xì)化，那么就能實(shí)現(xiàn)健康養(yǎng)殖、效益養(yǎng)殖。