雙孢蘑菇栽培基質(zhì)中線蟲分離方法評價

賈培松，賈文捷，羅 影，努爾孜亞·亞力買買提，王藝華，溫切木·阿布列孜，魏 鵬

(1.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所/農(nóng)業(yè)部西北荒漠綠洲作物有害生物綜合治理重點實驗室，烏魯木齊 830091；2.哈巴河縣自然資源局，新疆哈巴河 836700；3.阿勒泰市菜籃子工程辦公室，新疆阿勒泰 836500)

0 引 言

【研究意義】雙孢蘑菇(Agaricusbisporus)是栽培區(qū)域最廣、總產(chǎn)量最多的一類栽培菇種[1-2]，也是新疆栽培的主要菇種之一。食用菌栽培中每年因病蟲害帶來產(chǎn)量上的損失約30%，而其中由線蟲造成的損失約60%[3-5]。受線蟲危害的食用菌主要有：雙孢蘑菇、大肥菇、平菇、草菇、金針菇、黑木耳、毛木耳、銀耳等[6-9]。其中尤以雙孢蘑菇發(fā)生最普遍，危害最最重，線蟲危害時，床面菌絲生長受阻，嚴重萎縮死亡，料面發(fā)生黑褐色，料濕，發(fā)黏，出菇少，菇形小或不出菇，并有難聞的氣味，通常受害菇房的出菇期縮短，一般減少1～2潮菇，嚴重的生產(chǎn)季可縮短 1～2 個月，造成雙孢蘑菇減產(chǎn)20～50%[10-12]。在新疆，雙孢蘑菇產(chǎn)業(yè)是主要食用菌產(chǎn)業(yè)之一，每年栽培面積達60×104m2，多采用一次發(fā)酵或簡單的二次發(fā)酵生產(chǎn)方式，線蟲發(fā)生尤為普遍和嚴重。目前，在食用菌栽培過程中，線蟲危害問題往往比較突出，研究雙孢蘑菇栽培基質(zhì)中線蟲分離方法，雙孢蘑菇線蟲的有效防控有重要意義。【前人研究進展】雙孢蘑菇栽培基質(zhì)和覆土材料中線蟲分離方法主要為貝爾曼漏斗法。利用貝爾曼漏斗法分離培養(yǎng)料(堆肥)和覆土的線蟲，通過形態(tài)鑒定表明浙江省蘑菇生產(chǎn)中線蟲有3科(屬)5種，其中，主要為蘑菇菌絲線蟲(食菌莖線蟲)(DitylenchusmyceliophagusGoodey)、蘑菇堆肥線蟲(AphelenchoidescomposticolaFranklin)和小桿目線蟲(Rhabditata sp.)3種[13]。李發(fā)勇等[14]利用貝爾曼漏斗法分離培養(yǎng)料(堆肥)和覆土的線蟲，通過形態(tài)鑒定初步摸清了為害浙南地區(qū)蘑菇生產(chǎn)的主要線蟲種類為食菌莖線蟲、蘑菇堆肥滑刃線蟲和小桿線蟲；其發(fā)生條件和侵染途徑為舊菇房床架殘留線蟲以及后發(fā)酵溫控未能達到要求的培養(yǎng)料。【本研究切入點】新疆雙孢蘑菇生產(chǎn)方式多種多樣，生產(chǎn)用栽培基質(zhì)種類多樣，線蟲病發(fā)生情況較為復(fù)雜。不同栽培基質(zhì)類型中線蟲分離速率差異十分明顯，并且不同的生產(chǎn)方式和處理方法對線蟲發(fā)生數(shù)量影響很大，難以統(tǒng)一線蟲分離方法，按照文獻報道的線蟲分離和統(tǒng)計分析方法也難以反應(yīng)本地雙孢蘑菇線蟲實際發(fā)生情況。目前，未見對不同栽培基質(zhì)中線蟲分離速率和分離規(guī)律進行研究的報道。有關(guān)新疆雙孢蘑菇線蟲病的發(fā)生情況、發(fā)生規(guī)律等均未見報道。需確定分離雙孢蘑菇栽培基質(zhì)中線蟲的科學(xué)方法，研究新疆雙孢蘑菇線蟲病的分布情況和發(fā)生規(guī)律?！緮M解決的關(guān)鍵問題】研究不同栽培基質(zhì)中線蟲分離速率和分離規(guī)律，評價影響分離速率的關(guān)鍵因子，分析不同生產(chǎn)方式和栽培基質(zhì)處理方法對線蟲發(fā)生數(shù)量的影響，明確雙孢蘑菇線蟲分離的科學(xué)方法，為雙孢蘑菇線蟲病調(diào)查與研究提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材 料

分別收集感染線蟲的雙孢蘑菇培養(yǎng)料和覆土材料。采集地點為三坪農(nóng)場、阜康市九運街鎮(zhèn)、吉木薩爾縣、第六師共青團農(nóng)場、第六師軍戶農(nóng)場、溫泉縣等6個雙孢蘑菇主要種植區(qū)。表1

表1 樣品采集地點及生產(chǎn)方式

1.2 方 法

1.2.1 病樣采集

雙孢蘑菇培養(yǎng)料，分別采集雙孢蘑菇培養(yǎng)料發(fā)酵完成時和出菇期間的培養(yǎng)料；

雙孢蘑菇覆土材料，分別采集覆土材料消毒完成時和出菇期的覆土材料。

采用5點隨機取樣法，每個樣點取樣200 g，混勻后為1份樣品，用自封袋裝好帶回實驗室分離檢測。

1.2.2 基質(zhì)材料中線蟲分離

每份樣品充分拌勻后，用天平稱取3份，各100 g，采用貝曼漏斗法進行線蟲分離，每24 h取一次線蟲懸液，用滅菌蒸餾水稀釋定容至10 mL，放置于劃有方格線的90 mm培養(yǎng)皿中，于顯微鏡下鏡檢，在顯微鏡下觀察和計數(shù)，每種實驗處理設(shè)3個重復(fù)。計算線蟲分離速率：

分離速率(%)=(單次分離線蟲數(shù)/線蟲分離總數(shù))×100。

1.3 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用Excel 2010軟件對數(shù)據(jù)進行數(shù)據(jù)處理、單因素方差分析(AVNOA)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同材料類型中線蟲分離速率

研究表明，不同基質(zhì)材料類型中活體線蟲分離速率差異十分顯著，在分離24 h時，各基質(zhì)材料分離速率由大到小依次為棉稈、麥草、棉籽殼和土壤材料，分離速率分別為86.05%、70.91%、37.98%和28.03%。

不同基質(zhì)材料中線蟲分離速率達到最高的時間不同，其中，棉稈和麥草中線蟲分離速率均在24 h達到最高，分別為86.05%和70.91%，棉籽殼中線蟲分離速率在48 h達到最大，為37.98%，而土壤材料中線蟲分離速率在96 h達到最大，為28.03%。

不同基質(zhì)材料中死體線蟲分離速率趨勢較一致，均是在活體線蟲分離較完全時開始逐漸被分離出來，且隨著時間延長分離速率呈增加趨勢。不同基質(zhì)材料類型中線蟲分離速率差異顯著，活體線蟲先于死體線蟲被分離出來。圖1，圖2

圖1 不同基質(zhì)材料活體線蟲分離速率

圖2 不同基質(zhì)材料死體線蟲分離速率

2.2 不同材料類型中線蟲分離速率與材料孔隙度相關(guān)性

研究表明，不同基質(zhì)材料孔隙度差異顯著，孔隙度由大到小的材料依次為麥草、棉稈、棉籽殼和土壤材料，其孔隙度依次為3.36、2.48、2.02和1.24 mL/g；線蟲分離速率與材料孔隙度相關(guān)性高，相關(guān)系數(shù)為0.799，R2=0.638 9。不同基質(zhì)材料類型中活體線蟲分離速率與材料孔隙度相關(guān)程度很高，并呈正相關(guān)。表2，圖3

表2 不同基質(zhì)材料孔隙度

圖3 活體線蟲分離速率與材料孔隙度的相關(guān)性

2.3 雙孢蘑菇培養(yǎng)料不同處理方法下線蟲濃度

研究表明，發(fā)酵處理完成時，不同處理方式處理的培養(yǎng)料中，線蟲濃度差異十分顯著，其中，實行工廠化二次發(fā)酵處理方式的培養(yǎng)料中線蟲濃度最低，為0條/100g，其次為實行半工廠化二次發(fā)酵處理方式的，為2.67條/100g，實行農(nóng)法二次發(fā)酵處理方式的為33.33條/100g，而實行農(nóng)法一次發(fā)酵處理方式的培養(yǎng)料中線蟲濃度最高，為1556.33條/100g；蘑菇出菇期，不同處理方式處理的培養(yǎng)料中線蟲數(shù)量均有所增加，且差異十分明顯，其線蟲濃度普遍較培養(yǎng)料剛發(fā)酵處理后的高很多，且差異與培養(yǎng)料發(fā)酵處理后的趨勢相似，其中，實行工廠化二次發(fā)酵處理方式的材料中線蟲濃度最低，為59.21條/100g，其次為實行半工廠化二次發(fā)酵處理方式的，為112.33條/100g，實行農(nóng)法二次發(fā)酵方式的，為163.33條/100g而實行農(nóng)法一次發(fā)酵方式的最高，為5371.33條/100g，呈爆發(fā)式發(fā)生。雙孢蘑菇培養(yǎng)料中線蟲多少與培養(yǎng)料處理方式密切相關(guān)，發(fā)酵處理越徹底，線蟲濃度越低。表3

表3 不同處理方式的培養(yǎng)料中線蟲濃度變化

2.4 不同生產(chǎn)方式下雙孢蘑菇覆土材料中線蟲濃度

研究表明，各地收集的經(jīng)殺蟲處理后的雙孢蘑菇覆土材料中線蟲普遍存在，并差異顯著，活體線蟲濃度為每100g樣品中含線蟲12.00～79.00條；其中，三坪農(nóng)場實行工廠化生產(chǎn)，覆土材料處理十分嚴格，線蟲濃度最低，為12.00條/100g，其次第六師軍戶農(nóng)場實行半工廠化生產(chǎn)，覆土材料處理也較嚴格，為31.67條/100g，吉木薩爾縣實行農(nóng)法生產(chǎn)方式，覆土材料處理較為粗放，線蟲濃度為45條/100g，阜康市九運街鎮(zhèn)實行實行農(nóng)法生產(chǎn)方式，覆土材料處理最為粗放，其線蟲線蟲濃度最高，為79條/100g；蘑菇出菇后，各雙孢蘑菇覆土材料中線蟲數(shù)量普遍增加，且差異顯著，活體線蟲濃度為每100g樣品中含線蟲79.00～5 236.67條；其中，三坪農(nóng)場實行工廠化生產(chǎn)，覆土材料中線蟲濃度最低，為79.00條/100g，其次第六師軍戶農(nóng)場實行半工廠化生產(chǎn)方式，為132.53條/100g，吉木薩爾縣實行農(nóng)法生產(chǎn)方式，線蟲濃度為153.33，阜康市九運街鎮(zhèn)實行實行農(nóng)法生產(chǎn)方式，線蟲濃度最高，為5 236.67條/100g。雙孢蘑菇覆土材料中線蟲普遍存在，出菇后覆土材料中線蟲濃度普遍增加，且增加幅度與生產(chǎn)方式密切相關(guān)，生產(chǎn)方式越先進線蟲密度越小。表4

表4 不同生產(chǎn)方式下覆土材料中線蟲濃度

3 討 論

研究結(jié)果顯示，不同基質(zhì)材料類型中活體線蟲分離速率差異十分顯著，在分離24 h時，各基質(zhì)材料分離速率由大到小依次為：棉稈、麥草、棉籽殼和土壤材料，分離速率分別為86.05%、70.91%、37.98%和28.03%；不同基質(zhì)材料中線蟲分離速率達到最高的時間不同，其中，棉稈和麥草中線蟲分離速率均在24 h達到最高，棉籽殼中線蟲分離速率在48 h達到最大，而土壤材料中線蟲分離速率在96 h達到最大；(3)不同基質(zhì)材料孔隙度差異顯著，孔隙度由大到小的材料依次為：麥草、棉稈、棉籽殼和土壤材料，且不同基質(zhì)材料類型中活體線蟲分離速率與材料孔隙度呈顯著正相關(guān)。線蟲分離速率受基質(zhì)材料類型影響很大，應(yīng)根據(jù)材料類型確定分離時間。

研究結(jié)果顯示，培養(yǎng)基質(zhì)中線蟲濃度與生產(chǎn)方式和培養(yǎng)料處理方式密切相關(guān)，工廠化程度越高，培養(yǎng)料發(fā)酵處理越徹底，比如二次發(fā)酵，線蟲濃度越低；雙孢蘑菇覆土材料中線蟲普遍存在，出菇后覆土材料中線蟲濃度普遍增加，且增加幅度與生產(chǎn)方式密切相關(guān)，工廠化程度越高，線蟲密度越小。工廠化和半工廠化生產(chǎn)方式下，操作比較規(guī)范，對培養(yǎng)料、覆土材料、生產(chǎn)設(shè)施設(shè)備和房的殺蟲處理比較嚴格，出菇管理也比較科學(xué)，降低了蘑菇線蟲侵染的幾率，而農(nóng)法生產(chǎn)方式下，操作比較粗放，對培養(yǎng)料、覆土材料、生產(chǎn)設(shè)施設(shè)備和菇房的殺蟲處理不到位，出菇管理也較為粗放，提高了蘑菇線蟲侵染的幾率，處理不當(dāng)，往往會引起線蟲大爆發(fā)。改進雙孢蘑菇生產(chǎn)方式，改善培養(yǎng)料發(fā)酵方式(尤其是采用培養(yǎng)料二次發(fā)酵技術(shù))，是預(yù)防雙孢蘑菇線蟲發(fā)生的有效措施，

4 結(jié) 論

不同基質(zhì)材料類型中的活體線蟲分離速率差異十分顯著，且線蟲分離速率達到最高的時間不同，在分離24 h時，各基質(zhì)材料分離速率由大到小依次為棉稈、麥草、棉籽殼和土壤材料，分離速率分別為86.05%、70.91%、37.98%和28.03%；不同基質(zhì)材料類型中活體線蟲分離速率與材料孔隙度呈顯著正相關(guān)，孔隙度越大線蟲分離速率越快，線蟲分離速率達到最高的時間越早；培養(yǎng)基質(zhì)中線蟲濃度與生產(chǎn)方式和培養(yǎng)料處理方式密切相關(guān)，工廠化程度越高，培養(yǎng)料發(fā)酵處理越徹底，比如二次發(fā)酵，線蟲濃度越低。線蟲分離速率受基質(zhì)材料類型影響很大，應(yīng)根據(jù)材料類型確定分離時間；改進雙孢蘑菇生產(chǎn)方式，改善培養(yǎng)料發(fā)酵方式(尤其是采用培養(yǎng)料二次發(fā)酵技術(shù))，是預(yù)防雙孢蘑菇線蟲發(fā)生的有效措施。