消腫止痛合劑藥效學(xué)及急性毒性試驗研究*

何志軍，何元旭，劉 濤，李盛華，馬歲錄，何 波

1 甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050；2 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)

消腫止痛合劑由川芎、桃仁、紅花、生地黃、赤芍、青皮、三七、木香、當(dāng)歸、澤蘭等組成，臨床應(yīng)用多年，不良反應(yīng)少，療效確切。本研究考察消腫止痛合劑的急、慢性抗炎作用與急性毒性情況，為其臨床應(yīng)用和進一步開發(fā)研究提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物SPF級SD成年大鼠180只，雌雄各半，體質(zhì)量（200±20）g，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SYXK（甘）2016-0012。大鼠自由飲水，飼養(yǎng)于恒濕、恒溫（22～25℃）、屏障環(huán)境中。

1.2 儀器721型分光光度計（上海第三分析儀器廠）；DGG9123AD烘箱（杭州卓馳儀器有限公司）；BS210S型電子天平（北京賽多利斯天平廠）；不銹鋼直尺（河北鼎盛隆華實驗儀器有限公司）；4～0慕絲線；剪刀、鑷子、灌胃針、注射器（1、5 mL）等。

1.3 試藥消腫止痛合劑（甘肅省中醫(yī)院院內(nèi)制劑；批號：20051122）；吲哚美辛腸溶片（山西云鵬制藥有限公司；國藥準字H14020771；規(guī)格：25 mg/片）；阿司匹林腸溶片（拜耳醫(yī)藥保健有限公司；國藥準字J20171021；規(guī)格：100 mg/片）；角叉菜膠（遼寧省藥物研究所；批號：BJ56007）；冰醋酸為分析純，水為去離子水。

1.4 方法[1-3]

1.4.1 急性毒性預(yù)實驗 取SD大鼠40只，適應(yīng)7天后隨機分為空白組及消腫止痛合劑高、中、低劑量組，每組10只，雌、雄各半；消腫止痛合劑高中、低、劑量組分別灌胃消腫止痛合劑25、12.5、6.25 mL/kg（體質(zhì)量）1次，空白組給予去離子水，連續(xù)觀察14天，觀察動物中毒或死亡、外觀、飲食、行為活動、排泄等情況。14天觀察期間除部分大鼠體質(zhì)量降低、稀便軟便外，其余大鼠無死亡，大鼠外觀、飲食、行為活動未見異常，無急性毒性反應(yīng)，無法測出其LD50，因此進行最大給藥劑量實驗。

1.4.2 最大給藥劑量試驗 取SPF級SD大鼠40只，適應(yīng)1周后隨機分為空白組和給藥組，每組20只，雌雄各10只。給藥前禁食不禁水12 h后，給藥組灌胃25 mL/kg（體質(zhì)量）消腫止痛合劑1次，空白組灌胃等體積去離子水1次，用藥后最初8 h內(nèi)每1 h觀察1次，之后每天觀察3次，持續(xù)2周，記錄各組大鼠體質(zhì)量，觀察大鼠一般活動及存活情況。見表1。

表1 最大給藥劑量實驗觀察項目

1.4.3 角叉菜膠致大鼠足趾腫脹實驗［7-8］取SD大鼠50只，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。模型組大鼠灌胃去離子水25 mL/kg（體質(zhì)量），阿司匹林組、陽性對照組大鼠自實驗第3天開始灌胃阿司匹林0.2 g/kg（體質(zhì)量），每日1次，共3天；消腫止痛合劑高、中、低劑量組大鼠分別灌胃25、12.5、6.25 mL/kg（分別為人用量的30、15、7.5倍），每日1次，連續(xù)4天。第5天給予角叉菜膠前先測大鼠左后足跖圍（用手術(shù)線在左后足跖同部位纏繞2周，剪下，量手術(shù)線的長度作為足跖圍）。末次給藥的同時，大鼠左后足皮下注射1%角叉菜膠0.05 mL，然后每隔1 h測左后足跖圍1次，共4次，作為腫脹值，腫脹值減去致炎前足跖圍即為腫脹度。

1.4.4 冰醋酸致大鼠疼痛實驗［2，9］取SD大鼠50只，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。分別為模型組、吲哚美辛組（陽性對照組）及消腫止痛合劑高、中、低劑量組。模型組大鼠灌胃去離子水20 mL/kg（體質(zhì)量），吲哚美辛組大鼠在實驗第5天灌胃吲哚美辛腸溶片1次［15 mg/kg（體質(zhì)量）］，消腫止痛合劑高、中、低劑量組大鼠分別灌胃消腫止痛合劑25、12.5、6.25 mL/kg（體質(zhì)量）；連續(xù)5天，末次給藥后30 min，腹腔注射0.8%冰醋酸0.2 mL，5 min后開始統(tǒng)計大鼠10 min內(nèi)的扭體次數(shù)（腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行），計算扭體反應(yīng)抑制率：

抑制率（%）=（模型組平均扭體次數(shù)-給藥組平均扭體次數(shù)）/模型組平均扭體次數(shù)×100%

1.4.5 棉球肉芽腫實驗［10］選取體質(zhì)量合格的SD大鼠50只，隨機分成5組，每組10只。分別為模型組、地塞米松組（陽性對照組）及消腫止痛合劑低、中、高劑量組。大鼠腹腔注射10%水合氯醛［0.35 mL/kg（體質(zhì)量）］麻醉后左腹股溝處剃毛并用碘伏消毒，各切開皮膚1 cm小口并用眼科鑷植入同等大小的高溫高壓滅菌棉球（5 mg/個，用10 g/L的注射用青霉素鈉浸泡，烘干），縫合皮膚，建立慢性炎癥模型。給藥方式：模型組大鼠灌胃去離子水25 mL，每日1次，連續(xù)給藥10天；消腫止痛合劑高、中、低劑量組大鼠分別灌胃消腫止痛合劑25、12.5、6.25 mL，每日1次，先連續(xù)給藥3天，于第3天給藥后造模，造模后再連續(xù)給藥7天；地塞米松組于造模后第4天開始灌胃地塞米松1 mL/kg（體質(zhì)量），每日1次，共給藥4天。造模后第8天，打開原切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織取出，剔除脂肪組織，放烘箱中60℃烘干20 h至恒重，精密稱取質(zhì)量，計算肉芽腫抑制率。

肉芽腫質(zhì)量（mg）=棉球肉芽干重-棉球原重量

肉芽腫脹抑制率（%）=（模型組肉芽腫平均質(zhì)量-給藥組肉芽腫平均質(zhì)量）/模型組肉芽腫平均質(zhì)量×100%

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 22.0軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以±s表示，采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠急性毒性實驗給藥后觀察14天，除部分大鼠體質(zhì)量降低、稀便軟便外，其余大鼠無死亡，小鼠外觀、飲食、行為活動未見異常，無急性毒性反應(yīng)，最終存活大鼠給藥14天后逐只處死、解剖，并肉眼觀察肝、心、肺、脾、腎、子宮、卵巢、前列腺、精囊、睪丸、腸胃等重要臟器，未見顏色、形態(tài)異常，無出血點或其他病理改變，胃黏膜顏色紅潤，無出血點或潰瘍，尸檢無異常。各組大鼠體質(zhì)量變化情況見表2。

表2 各組大鼠體質(zhì)量變化情況（±s）

表2 各組大鼠體質(zhì)量變化情況（±s）

注：與空白組比較，*表示P＜0.05

組別空白組消腫止痛合劑組鼠數(shù)20 20劑量（mL/kg）38 25第1天體質(zhì)量（g）200±2 200±2第3天體質(zhì)量（g）213±3 203±5*第7天體質(zhì)量（g）218±4 210±3*第11天體質(zhì)量（g）223±3 216±4*第14天體質(zhì)量（g）229±5 221±3*增重（g）29±3 21±2

2.2 大鼠足趾腫脹情況與模型組比較，阿司匹林組及消腫止痛合劑高、中、低劑量組大鼠足趾腫脹度降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。與阿司匹林組相比較，消腫止痛合劑高劑量組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 各組大鼠足趾腫脹度比較（±s）

表3 各組大鼠足趾腫脹度比較（±s）

注：與模型組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；與阿司匹林組比較，#表示P＜0.05

組別模型組阿司匹林組消腫止痛合劑低劑量組消腫止痛合劑中劑量組消腫止痛合劑高劑量組鼠數(shù)10 10 10 10 10劑量（mL/kg）10 0.20 6.25 12.50 25.00致炎后不同時間足腫脹度（mm）1 h 3.95±0.11 3.37±0.10**3.55±0.11**3.25±0.12**2.95±0.11**#2 h 4.75±0.17 4.05±0.18**4.25±0.17**3.95±0.19**3.75±0.18**#3 h 5.25±0.18 4.45±0.17**4.65±0.19**4.15±0.18**3.85±0.19**#4 h 4.55±0.17 4.30±0.20**4.45±0.19*4.05±0.18**3.80±0.21**#

2.3 大鼠扭體反應(yīng)情況與模型組比較，吲哚美辛組及消腫止痛合劑各劑量組大鼠扭體反應(yīng)降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。表明消腫止痛合劑能抑制冰醋酸引起的大鼠扭體反應(yīng)，但抑制率低于吲哚美辛組。見表4。

表4 各組大鼠扭體反應(yīng)情況（±s）

表4 各組大鼠扭體反應(yīng)情況（±s）

注：與模型組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；“-”表示無數(shù)據(jù)

組別模型組吲哚美辛組消腫止痛合劑低劑量組消腫止痛合劑中劑量組消腫止痛合劑高劑量組鼠數(shù)10 10 10 10 10劑量（mL/kg）10 12.50 6.25 12.50 25.00 10 min扭體次數(shù)（次）31.23±10.02 15.27±6.47**20.83±9.11**19.33±8.47**17.61±5.93**抑制率（%）-51.1 33.3 38.1 43.6

2.4 大鼠棉球肉芽腫情況與模型組比較，地塞米松組及消腫止痛合劑高、中、低劑量組大鼠棉球肉芽腫質(zhì)量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。表明消腫止痛合劑能抑制大鼠棉球肉芽腫形成，但抑制率低于地塞米松組。見表5。

表5 各組大鼠棉球肉芽腫形成情況（±s）

表5 各組大鼠棉球肉芽腫形成情況（±s）

注：與模型組比較，*表示P＜0．05，**表示P＜0.01“-”表示無數(shù)據(jù)

組別模型組地塞米松組消腫止痛合劑低劑量組消腫止痛合劑中劑量組消腫止痛合劑高劑量組鼠數(shù)10 10 10 10 10劑量（mL/kg）10 1 6.25 12.5 25肉芽腫質(zhì)量（mg）25.95±2.51 18.27±1.47**22.62±2.24*21.76±2.87**20.07±2.02**抑制率（%）-29.6 12.8 16.1 22.7

3 討論

消腫止痛合劑由臨床經(jīng)驗方加工制成。方中當(dāng)歸、川芎為君藥，活血祛瘀，消腫止痛；桃仁、紅花生新血、破瘀血，共為臣藥；三七消腫、鎮(zhèn)痛、化瘀；青皮、木香行氣散結(jié)止痛；生地黃、赤芍涼血消瘀。損傷早期組織處痙攣疼痛，有滲出、水腫等病理變化，故配澤蘭消散癰腫，減少滲出，促使腫脹消退，諸藥合用，共奏消腫止痛、活血化瘀之功［9-11］。

本研究通過大鼠經(jīng)口急性毒性實驗觀察消腫止痛合劑的用藥安全性。結(jié)果除部分大鼠體質(zhì)量降低及排泄軟便稀便外，其余無異常急性毒性反應(yīng)，無法測出其LD50。采用角叉菜膠致大鼠足腫脹和大鼠棉球肉芽腫實驗及冰醋酸致疼痛法考察消腫止痛合劑的急、慢性抗炎、鎮(zhèn)痛作用［12］。消腫止痛合劑高、中、低劑量組可降低模型大鼠足跖腫脹度和棉球肉芽腫質(zhì)量，降低大鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，說明該藥有急、慢性抗炎及鎮(zhèn)痛作用，前期相關(guān)實驗研究表明，消腫止痛合劑能促進皮瓣血管再生，減輕皮瓣缺血再灌注損傷，具有促進血管內(nèi)皮細胞再生的作用［13］，但對其深入的藥效學(xué)研究，長期毒性實驗及其抗炎、鎮(zhèn)痛機制有待進一步研究。