蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)

佟艷瓊，王光鴻

（羅平縣板橋鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，云南 羅平 655808）

農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中蔬菜安全性問(wèn)題以農(nóng)藥殘留超標(biāo)最為常見(jiàn)和嚴(yán)重，其中以有機(jī)磷和氨基甲酯類農(nóng)藥殘留超標(biāo)最為突出。蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)可通過(guò)農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀快速對(duì)蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酯農(nóng)藥殘留含量進(jìn)行科學(xué)檢測(cè)并分析得出數(shù)據(jù)，最終得知蔬菜農(nóng)藥殘留量是否超標(biāo)，從而監(jiān)控蔬菜農(nóng)藥的合理使用和杜絕農(nóng)藥殘留超標(biāo)蔬菜上市銷售。下面主要從采樣、制樣、檢測(cè)、結(jié)果判定等技術(shù)步驟介紹幾種常見(jiàn)蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)方法。

1 快速檢測(cè)方法及原理

方法為GB/T 5009.199—2003酶抑制率法。

在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)關(guān)系。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物(乙酰膽堿)水解，其水解產(chǎn)物顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過(guò)抑制率可以判斷出樣品中是否含有有機(jī)磷或氨基甲酯類農(nóng)藥的存在。

2 采 樣

2.1 大田采樣

依據(jù)《國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 8855—88新鮮水果和蔬菜的取樣方法》，針對(duì)羅平縣板橋鎮(zhèn)蔬菜生產(chǎn)現(xiàn)狀，在板橋菜園蔬菜生產(chǎn)基地隨機(jī)對(duì)大白菜、小瓜、豆莢、萵苣、生菜、菠菜、青菜各采樣2 kg，結(jié)球甘藍(lán)采樣3～5個(gè)。

2.2 采樣卡登記

依據(jù)采樣順序邊采樣邊在蔬菜農(nóng)殘快速抽樣記錄卡上準(zhǔn)確填寫大白菜、小瓜、豆莢、萵苣、生菜、菠菜、青菜和結(jié)球甘藍(lán)的采樣順序編號(hào)、相關(guān)單位和個(gè)人、樣品名稱、生產(chǎn)地點(diǎn)、采樣日期、參加采樣人員等信息。

3 檢測(cè)前準(zhǔn)備

3.1 檢測(cè)器材

HHX-SJ10NC蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)機(jī)1臺(tái)、菜刀1把、菜板1塊、鉗子1把、2 000 g電子天平1臺(tái)、漩渦混合器1臺(tái)、0.8 cm玻璃棒1根、500 mL燒杯1個(gè)、500 mL儲(chǔ)液瓶1個(gè)、20 mL塑料注射器1支、100 mL玻璃燒杯16個(gè)、10 mL塑料樣品提取試管9個(gè)、試管架1個(gè)、3 mL玻璃比色皿9個(gè)、5孔比色皿架2個(gè)、1 000～5 000 μL緩沖液移液槍1把、緩沖移液槍頭9個(gè)、20～200 μL酶試劑液槍1支、20～200 μL顯色試劑液槍1支、20～200 μL底物試劑移液槍1支。

3.2 試劑配制

3.2.1 緩沖液

將緩沖液試劑袋中的試劑取出，倒入500 mL燒杯中，加入500 mL飲用純凈水，用0.8 cm玻璃棒攪動(dòng)至溶解，倒入500 mL儲(chǔ)液瓶中備用。平常要在2～4 ℃冰箱內(nèi)冷藏保存，切勿冷凍結(jié)冰。

3.2.2 底物

用20 mL塑料注射器向標(biāo)有“底物”的試劑瓶中注入13 mL飲用純凈水溶解、混勻即可。平常要在2～4 ℃冰箱內(nèi)冷藏保存，切勿冷凍結(jié)冰。

3.2.3 顯色劑和酶試劑

顯色劑和酶試劑無(wú)需配制可直接使用。平常要在2～4 ℃冰箱內(nèi)冷藏保存，切勿冷凍結(jié)冰。

3.3 試劑使用

取樣前先將已配好的緩沖液、底物、顯色劑、酶提前30 min從冰箱里取出，恢復(fù)到室溫。

3.4 檢測(cè)儀打開(kāi)

取樣前要先打開(kāi)檢測(cè)儀，檢查樣品室內(nèi)沒(méi)有樣品放入后再打開(kāi)預(yù)熱10 min以上。

3.5 取 樣

先剔除大白菜、小瓜、豆莢、萵苣、生菜、菠菜、青菜和結(jié)球甘藍(lán)不能食用部分，擦去食用部分表面的泥土再采用4分法（即取4份中的1份）進(jìn)行取樣，每種蔬菜依照采樣順序切成1 cm大小的菜樣分別裝入8個(gè)100 mL的玻璃燒杯中，并貼上取樣順序標(biāo)簽。檢測(cè)結(jié)果出來(lái)之前，要保存好樣品備用。

4 檢 測(cè)

4.1 制 樣

用鉗子從大白菜、小瓜、豆莢、萵苣、生菜、菠菜、青菜和結(jié)球甘藍(lán)制樣燒杯中取樣在天平上稱取2 g，依次放入8個(gè)100 mL燒杯中，加入10 mL緩沖液，用漩渦混合器振蕩提取2 min，制成待測(cè)樣品液備用。

4.2 空白對(duì)照

4.2.1 空白對(duì)照制作

在試管架上的1個(gè)空塑料樣品提取試管中加入酶試劑100 μL、緩沖液2 500 μL后在漩渦混合器混勻靜置10 min后再加入100 μL顯色試、100 μL底物試劑。

4.2.2 空白對(duì)照檢測(cè)

依次加入顯色試劑和底物試劑后快速將空白樣品提取瓶中的對(duì)照液倒入比色皿架上的比色皿中（手不能觸摸比色皿光面，如光面有污物或液體可用過(guò)濾紙擦干凈），將比色皿放入檢測(cè)儀檢測(cè)的通道內(nèi)并按下對(duì)照鍵，1 min后便可看到檢測(cè)結(jié)果，經(jīng)檢測(cè)空白對(duì)照值是0.226。測(cè)定結(jié)束后，按下確定鍵，儀器自動(dòng)保存當(dāng)前對(duì)照值。

空白對(duì)照測(cè)量時(shí)，1 min空白對(duì)照吸光度變化值△A應(yīng)在0.15～0.30，才可進(jìn)行下一步試驗(yàn)。如果空白對(duì)照△A＜0.15時(shí)，需要重做空白對(duì)照，若重復(fù)多次的空白對(duì)照△A＜0.15時(shí)，必須更換酶試劑；如果空白對(duì)照值△A＞0.30時(shí)，要調(diào)試減少儀器的測(cè)量時(shí)間，重新做空白對(duì)照。

4.3 檢測(cè)樣品液制作

在8個(gè)塑料樣品提取試管中分別加入酶試劑100 μL后，依次提取并加入蔬菜樣品液各2 500 μL（每取1個(gè)樣品液都要換1次樣品移液槍頭），分別混勻靜置10 min后再依次加入100 μL顯色試劑和100 μL底物混勻，依次倒入8個(gè)比色皿中，將比色皿依次快速放入8個(gè)檢測(cè)通道并按下樣品鍵，1 min后便可看到檢測(cè)結(jié)果（見(jiàn)表1）。測(cè)定結(jié)束后，按下確定鍵，儀器自動(dòng)保存數(shù)據(jù)，按下打印鍵便可打印當(dāng)前測(cè)試結(jié)果。

表1 蔬菜樣品檢測(cè)結(jié)果表

檢測(cè)部分蔬菜樣品及儀器

4.4 檢測(cè)結(jié)果判定

根據(jù)GB/T 5009.199—2003要求，抑制率≥50%時(shí)為陽(yáng)性，抑制率＜50%時(shí)為陰性。

（1）若樣品抑制率＜40%，說(shuō)明樣品中農(nóng)藥殘留含量符合國(guó)家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，判定該樣品為質(zhì)量合格樣品。所以以上檢測(cè)的8個(gè)樣品全部都是合格樣品。

（2）若樣品抑制率為40%～49%，說(shuō)明樣品中農(nóng)藥殘留含量較高，為可疑農(nóng)殘超標(biāo)樣品。

（3）若樣品抑制率≥50%，說(shuō)明此樣品農(nóng)殘超標(biāo)。

（4）屬于農(nóng)殘超標(biāo)或疑似超標(biāo)的樣品，建議對(duì)該樣品重做1次，重做結(jié)果仍舊超標(biāo)的，可將原菜樣送往上級(jí)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)站進(jìn)一步檢測(cè)并向相關(guān)單位或個(gè)人下發(fā)農(nóng)產(chǎn)品（源頭）抽樣檢測(cè)結(jié)果和禁用通知書(shū)。

5 酶抑制率法優(yōu)缺點(diǎn)

5.1 優(yōu) 點(diǎn)

酶抑制率法優(yōu)點(diǎn)為簡(jiǎn)單、方便、快捷、成本低廉。整個(gè)檢測(cè)過(guò)程只需30 min左右，可以作為傳統(tǒng)儀器分析方法的有益補(bǔ)充，針對(duì)市場(chǎng)、農(nóng)場(chǎng)蔬菜農(nóng)藥殘留量進(jìn)行快速篩選監(jiān)測(cè)，保證上市蔬菜食用的相對(duì)安全性。

5.2 缺 點(diǎn)

5.2.1 誤差較大，存在檢測(cè)盲區(qū)

酶試劑易失活，導(dǎo)致反應(yīng)不穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果誤差較大，重復(fù)性不好，實(shí)際應(yīng)用中的確認(rèn)率為60%～70%；存在檢測(cè)盲區(qū)，只能檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酯，不能檢測(cè)有機(jī)氯類、菊酯和其他類別的劇毒農(nóng)藥。

5.2.2 不適合檢測(cè)易出現(xiàn)假陽(yáng)性的產(chǎn)品

不適合檢測(cè)蔥蒜類、香菜、韭菜、番茄、胡蘿卜、茭白、蘑菇、花椒等14種容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的農(nóng)產(chǎn)品。

5.2.3 需培訓(xùn)專職技術(shù)員

需要對(duì)檢測(cè)人員進(jìn)行專門培訓(xùn)，否則將會(huì)對(duì)出現(xiàn)的問(wèn)題無(wú)法正確處理或判斷，得出錯(cuò)誤的結(jié)果。

6 結(jié) 語(yǔ)

隨著消費(fèi)者對(duì)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的日益關(guān)注，以及各級(jí)檢測(cè)部門的重視，酶抑制率法以其靈敏性和準(zhǔn)確性較高及成本低等優(yōu)點(diǎn)，使農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)必將向著更加快速方便、靈敏可靠的方向發(fā)展。板橋鎮(zhèn)蔬菜生產(chǎn)相對(duì)分散，從采收到市場(chǎng)銷售經(jīng)時(shí)較短的情況下，酶抑制率法雖然存在一些不足，但卻具有其他檢測(cè)法無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)，應(yīng)在批發(fā)市場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、生產(chǎn)基地等推廣應(yīng)用。