UPLC-MS/MS 同時(shí)測(cè)定飲料中5 種甜味劑

楊 穎

（建德市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，浙江杭州 311600）

甜味劑是重要的食品添加劑，主要用于增加或改善食品甜味感、提升品質(zhì)[1]?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）對(duì)飲料中添加合成甜味劑的限量和使用范圍作出明確規(guī)定[2]。而現(xiàn)行有效檢測(cè)方法包括《飲料中乙?；前匪徕浀臏y(cè)定》（GB/T 5009.140—2003）、《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定》（GB 5009.28—2016）、《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測(cè)定》（GB 5009.97—2016）、《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中阿斯巴甜和阿力甜的測(cè)定》（GB 5009.263—2016）這4 種方法，其中樣品凈化、目標(biāo)物提取、儀器測(cè)定條件和流動(dòng)相設(shè)置等各不相同，同時(shí)測(cè)定以上項(xiàng)目需要檢測(cè)人員多、工作時(shí)間長(zhǎng)，效率低[3]。質(zhì)譜檢測(cè)因其低檢出限、高靈敏度與強(qiáng)抗干擾能力，成為當(dāng)前檢測(cè)的首選。為減少實(shí)驗(yàn)成本、提高工作效率，建立超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，UPLC-MS/MS）檢測(cè)方法顯得十分必要。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

飲料均購(gòu)自本地超市。

甲醇、乙腈（HPLC 級(jí)，默克公司）；甲酸（HPLC級(jí)，CNW TECHNOLOGIES）；阿斯巴甜（97.4%，壇墨質(zhì)檢），阿力甜（98.8%，壇墨質(zhì)檢），糖精鈉（1 000 μg/mL，壇墨質(zhì)檢）；甜蜜素（1 000 μg/mL，壇墨質(zhì)檢）；三氯蔗糖（99.6%，壇墨質(zhì)檢），安賽蜜（1 000 μg/mL，壇墨質(zhì)檢），純水由Millipore 超純水儀制備。

電子天平（BT125D，賽多利斯儀器有限公司）；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（TQ-S misco、Waters）；超聲儀（KQ=500 型，昆山市超聲儀器有限公司）；旋渦混合器（WH-861，華利達(dá)）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)中間液溶液

分別取單標(biāo)100 μL 于10 mL 容量瓶中，用1 ∶1甲醇水溶解并定容，得到質(zhì)量濃度10 mg/L 的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。再取10 mg/L 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1 mL 稀釋至10 mL，得到1 mg/L 中間液。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

移取中間液用水稀釋?zhuān)玫?.005 mg/L、0.010 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L、0.200 mg/L、0.400 mg/L、0.800 mg/L 和1.000 mg/L 系列標(biāo)曲，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.3 樣品處理

參考標(biāo)準(zhǔn)SN/T 3538—2013，取2 g 超聲脫氣后的樣品于100 mL 容量瓶中，用水稀釋定容至刻度，過(guò)0.22 μm 濾膜后供UPLC-MS/MS 分析[4]。

1.2.4 儀器條件

（1）UPLC 條件。UPLC 系統(tǒng)：ACQUITY UPLC I-CLASS；色譜柱：ACQUITY UPLC HSS T3（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；流動(dòng)相A：0.1%甲酸水溶液；流動(dòng)相B：0.1%甲酸乙腈溶液；流速：0.3 mL/min[5]。洗脫梯度程序見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相洗脫梯度表

（2）質(zhì)譜條件。電離模式：ESI-；毛細(xì)管電壓：-2.5 kV；脫溶劑溫度：550 ℃；檢測(cè)方式：MRM；源氣體流量：溶媒揮散氣體流速為1 000 L/Hr，進(jìn)樣錐氣體流速為50 L/Hr。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

手動(dòng)調(diào)諧優(yōu)化錐孔電壓和碰撞能量的質(zhì)譜條件見(jiàn)表2。

表2 5 種甜味劑質(zhì)譜檢測(cè)條件

2.2 定量限和線(xiàn)性關(guān)系

實(shí)驗(yàn)得到5 種甜味劑標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性回歸方程、相關(guān)系數(shù)R2及方法定量限（以信噪比S/N≥10 計(jì)算），結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 方法線(xiàn)性回歸方程、線(xiàn)性范圍及檢出限

2.3 精密度和回收率的測(cè)定

空白樣品加標(biāo)（低、中、高3 個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度下進(jìn)行6 次平行試驗(yàn)），計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表4，阿斯巴甜、阿力甜、糖精鈉、甜蜜素和安賽蜜的加標(biāo)回收率為82.6%～107.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.32% ～ 4.56%。

表4 加標(biāo)回收率和精密度（n=6）

2.4 實(shí)際樣品測(cè)定

采用建立的方法，對(duì)市場(chǎng)上銷(xiāo)售的10 種飲料進(jìn)行檢測(cè)，5 種人工合成甜味劑均未檢出。

3 結(jié)論

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飲料中5 種人工合成甜味劑，操作快捷方便，其線(xiàn)性、定量限、回收率及精密度指標(biāo)均能夠滿(mǎn)足日常食品檢測(cè)的監(jiān)管需要。