毛蓮蒿原藥粉與浸膏粉所含有效成分對比研究

旦增米吉，王佳俊，頓 珠*

(1.西藏藏醫(yī)藥大學，西藏 拉薩 850000；2.成都中醫(yī)藥大學 藥學院，四川 成都 611137)

毛蓮蒿(ArtemisiavestitaWall.ex Bess.)是菊科植物毛蓮蒿的莖、葉，在藏族中又被稱為普爾那，主要分布于我國的西藏、甘肅等海拔2 000～4 000 m的地區(qū)[1]。其味苦、辛，性寒，歸腎經(jīng)，具有清熱解毒、消腫消炎、殺蟲利濕等功效，在藏醫(yī)臨床中，被廣泛用于治療蟲病、腦炎、皮膚病、溫毒疔毒瘡、咽喉病等癥。現(xiàn)代研究顯示，毛蓮蒿化學成分主要有苯丙素類、萜類、黃酮類、甾體類等，具有免疫抑制、抗感染、抗腫瘤等多種藥理活性[2-3]。中藥浸膏粉是單味中藥或組方經(jīng)提取、分離、濃縮、干燥等工藝后所獲得的產(chǎn)物，是制備中藥丸劑、片劑等固體制劑的中間物料，由于其具有容易儲存，運輸、保質(zhì)期長等優(yōu)點，在國內(nèi)藥材加工市場上頗受歡迎。然而在臨床治療中浸膏粉是否能完全代替中藥原藥粉，臨床治療效果優(yōu)劣與否尚未完全明確，是目前影響浸膏粉向臨床推廣的重要原因之一[4]。因此，應對中藥浸膏粉及原藥粉質(zhì)量標準、臨床療效等多方面進行全面評價，并以此作為評估兩種藥材中間物料的質(zhì)量差異情況[5]。本文對比分析毛蓮蒿浸膏粉與原藥粉，以綠原酸、東莨菪內(nèi)脂、異嗪皮啶為主要指標成分，探究其主要有效成分含量與穩(wěn)定性，具體報道如下。

1 材料與儀器

1.1 實驗材料

毛蓮蒿浸膏粉和原藥粉(西藏藏醫(yī)藥大學自制)。毛蓮蒿浸膏粉制作具體方法為：稱取一定量毛蓮蒿生藥材，加入10倍量純凈水，浸泡30 min。將其放置于調(diào)溫電爐上加熱，待其沸騰后調(diào)整為微沸，煎煮6 h后用6層200目紗布過濾；加入8倍量純凈水至濾渣再煎煮8 h，用同一紗布過濾，將濾液合并后轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，60 ℃濃縮至稠膏，再繼續(xù)晾干使水分蒸發(fā)完，通過打粉機打成細粉即得浸膏干粉。毛蓮蒿原藥粉制作方法為：將一定量毛蓮蒿生藥材通過打粉機打成細粉，過200目篩即得。選擇綠原酸對照品(成都曼思特公司，批號：MUST-21030304，純度99.73%)、東莨菪內(nèi)脂對照品(成都曼思特公司，批號：MUST-21032415，純度99.44%)、異嗪皮啶對照品(成都曼思特公司，批號MUST-20070710，純度99.50%)。甲醇和乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.2 實驗儀器

本研究所需的儀器主要有：LC-20高效液相色譜系統(tǒng)(日本島津公司)；ME155DU十萬分之一電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；KQ-500DE超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)；BF-10小型高速粉碎機(河北本辰科技有限公司)。

2 方法

2.1 色譜條件

安捷倫SB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)以0.8 mL/min的流速進行梯度洗脫，具體梯度：0～10 min，10%～20%A；10～15 min，20%～25%A；15～25 min，25%～35%A；25～45 min，35%～45%A，45～60 min，45%～10%A；檢測波長330 nm，柱溫為20 ℃，進樣量為20 μL。

2.2 供試品溶液制備

取樣品2 g，精密稱定，加75%甲醇50 mL，超聲1 h，放冷后再次稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量。補足質(zhì)量后搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用0.45 μm濾膜過濾，即得。

2.3 標準品溶液配制

稱取東莨菪內(nèi)脂9.22 mg、異嗪皮啶12.62 mg、綠原酸13.17 mg至25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得混合標準品溶液，各成分濃度為：東莨菪內(nèi)脂0.367 mg/mL、異嗪皮啶0.502 mg/mL、綠原酸0.525 mg/mL。

2.4 線性關系考察

精密吸取上述混合標準品溶液1 mL、1.5 mL、2 mL、2.5 mL、5 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成5個等級(S1～5)不同濃度的混合標準品溶液，進樣20 μL進行測定，繪制標準曲線。

2.5 開展精密度實驗

取混合標準品溶液(S5)連續(xù)進樣6次，測定RSD。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取混合標準品溶液(S5)，在0、3、6、9、12、24 h各進樣1次，測定峰面積，計算各標準品的RSD。

2.7 重復性試驗

取原藥材粉末樣品6份，按照前處理方法制備供試品溶液，進行測定并計算RSD。

2.8 回收率試驗

采用加樣回收法，精密稱取原藥材粉末樣品6份，加入混合標準品溶液10 mL，按照前處理方法制備供試品溶液，進行測定，記錄色譜圖并計算各標準品的回收率及RSD。

2.9 數(shù)據(jù)處理

3 結(jié)果

3.1 線性關系考察結(jié)果

綠原酸、東莨菪內(nèi)脂、異嗪皮啶標準品的回歸方程、線性范圍以及相關系數(shù)如表1所示。

表1 綠原酸、東莨菪內(nèi)脂、異嗪皮啶標準曲線制作情況

3.2 精密度、穩(wěn)定性、重復性及回收率結(jié)果分析

3.2.1 精密度 對混合標準品S5的6次進樣進行分析計算，得綠原酸峰面積的RSD為0.182%(n=6)、東莨菪內(nèi)脂峰面積的RSD為0.077%(n=6)、異嗪皮啶峰面積RSD為0.150%(n=6)，說明儀器精密度良好。

3.2.2 穩(wěn)定性 在6次不同時段的混合標準品溶液測定中計算得綠原酸峰面積的RSD為0.123%(n=6)、東莨菪內(nèi)脂峰面積的RSD為0.084%(n=6)、異嗪皮啶峰面積RSD為0.063%(n=6)，表明混標溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.2.3 重復性 對6份由毛蓮蒿原藥材粉末樣品制成的供試品溶液進行測定，測得綠原酸、東莨菪內(nèi)脂和異嗪皮啶的平均含量(n=6)分別為0.424%、0.102%和0.413%，RSD分別為0.082%、1.047%和0.240%。表明本方法重復性良好。

3.2.4 回收率 采用加樣回收法，經(jīng)試驗和計算得出綠原酸、東莨菪內(nèi)脂和異嗪皮啶的平均回收率(n=6)分別為98.96%、97.01%和105.51%，RSD分別為0.27%、2.07%和0.96%。表明該方法可行，具體如表2。

表2 3種成分的回收率試驗結(jié)果 (n=6)

3.3 毛蓮蒿浸膏粉和原藥粉的3種成分含量對比

通過計算可以發(fā)現(xiàn)，毛蓮蒿浸膏粉中的綠原酸含量與原藥粉中無明顯差異；相比與原藥粉，毛蓮蒿浸膏粉中的東莨菪內(nèi)脂含量明顯更高，而原藥粉中的異嗪皮啶含量則顯著高于浸膏粉(P<0.05)。具體如表3所示。

表3 樣品測定結(jié)果 (n=3)

4 討論

近年來，中醫(yī)藥因療效顯著、不良反應較少等優(yōu)勢逐漸被醫(yī)學界認可，開始廣泛應用于臨床多種疾病的治療中。中藥材的粉末形式常被用作制備各種中藥劑型的中間物料。除藥材直接打粉外，由中藥浸膏制備干粉是近年新興的一種制粉方式，浸膏粉是指中藥材經(jīng)過提取后的浸膏，通過微波、紅外、箱式等干燥手段干燥后所得的物料，是在傳統(tǒng)中藥浸膏的基礎上開展而來[6]。與原藥粉相比，浸膏粉多出了提取、濃縮、蒸發(fā)等制備過程，然而浸膏干粉在制作過程中是否會影響其原本的有效成分，從而降低臨床療效尚不得而知。而我國關于中藥浸膏干粉和原藥粉的有效成分研究尚不多見?；诖耍疚囊圆厮幟忀餅槔?，對比毛蓮蒿浸膏干粉和原藥粉中綠原酸、東莨菪內(nèi)脂、異嗪皮啶含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：綠原酸含量在原藥粉與浸膏粉中無明顯差異；浸膏粉中東莨菪內(nèi)脂含量顯著高于原藥粉；在原藥粉中異嗪皮啶含量顯著高于浸膏粉，提示浸膏粉與原藥粉中的有效成分含量存在差異，這或許與特定的藥效成分有關，在用于制備中藥中間物料時，不能將原藥粉與浸膏粉等同視之。由于不同中藥浸膏制備工藝不同、有效成分不等同于臨床療效等諸多因素，關于浸膏粉與原藥粉的有效成分含量的異同尚需要進一步研究。