喜樹(shù)葉斑病病原菌鑒定及其防治藥劑篩選

寧 平，黃艷花，黃 微，2，邢政杰，陳 嬋，王小欣

(1.廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)大學(xué)，南寧 530007；2.廣西南寧合一生物防治技術(shù)有限公司，南寧 530007)

【研究意義】喜樹(shù)(Camptothecaacuminata)別名旱蓮、千丈樹(shù)，是藍(lán)果樹(shù)科喜樹(shù)屬植物[1]。喜樹(shù)速生豐產(chǎn)，既是觀賞綠化樹(shù)又是抗癌中藥材，在我國(guó)湖南、湖北、云南、四川、貴州、廣西和廣東等地均有栽培[2]。1969年Monron從喜樹(shù)皮中分離出喜樹(shù)堿，經(jīng)腫瘤實(shí)驗(yàn)證實(shí)這種生物堿具有抗癌活性[3]。由于喜樹(shù)堿在醫(yī)學(xué)上的巨大作用，科學(xué)界一直在研究喜樹(shù)堿的抗癌效果和作用機(jī)理[4]、喜樹(shù)葉片中喜樹(shù)堿含量的變化情況[5]、喜樹(shù)堿對(duì)部分植物病蟲(chóng)的殺蟲(chóng)殺菌作用[6]。隨著市場(chǎng)對(duì)喜樹(shù)堿的需求越來(lái)越大，喜樹(shù)的栽培研究也顯得極為重要，并在1999年被列為國(guó)家Ⅱ級(jí)重點(diǎn)保護(hù)植物[7]。自2017年廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)大學(xué)中草藥園引種喜樹(shù)以來(lái)，連續(xù)幾年均發(fā)生較嚴(yán)重的葉斑病，其中，每年的7—10月在植株中下部葉片發(fā)病較重，上部嫩葉發(fā)病較輕，發(fā)病初期葉片出現(xiàn)淡褐色小斑點(diǎn)，葉片成熟后病斑增多，大部分病斑早期淡褐色形狀不規(guī)則，邊緣不清晰，后期病斑深褐色邊緣清晰；葉片越老病斑越多，有的葉片多個(gè)病斑連成一片形成不規(guī)則大病斑，最后葉片發(fā)黃干枯，容易脫落。但目前關(guān)于喜樹(shù)葉斑病的研究報(bào)道較少。因此，鑒定喜樹(shù)葉斑病病原菌，對(duì)開(kāi)展大田喜樹(shù)葉斑病精準(zhǔn)防控具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】關(guān)于喜樹(shù)病害研究，胡一鳴等[8]發(fā)現(xiàn)浙江流行的喜樹(shù)角斑病是由棉花葉點(diǎn)菌(Phyllostictagossypina)、黃麻褐斑菌(P.corchori)和細(xì)交鏈孢(Alternariatenuis)3種真菌復(fù)合侵染引起；張?jiān)录綶9]研究發(fā)現(xiàn)，杭州地區(qū)的喜樹(shù)角斑病是由擬尾孢菌(Pseudocercosporacamptothecae)侵染引起；韋文傳等[10]研究認(rèn)為，廣西東蘭地區(qū)的喜樹(shù)褐斑病致病菌是尾孢菌(Cercosporacamptothecae)；許曉平等[11]明確了南京市東善橋林場(chǎng)的喜樹(shù)潰瘍病為擬莖點(diǎn)霉屬(Phomopsissp.)真菌侵染所致。Lin等[12]研究喜樹(shù)內(nèi)生真菌的種類(lèi)，從喜樹(shù)中分離到與C.cassiicola同源性很高的真菌，但未進(jìn)行致病性測(cè)定。多主棒孢霉(Corynesporacassiicola)寄主范圍較廣，能侵染530多種植物[13]，主要侵染熱帶及亞熱帶地區(qū)的香蕉[14-15]、辣木[16]、橡膠樹(shù)[17-18]、番茄[19]、苦瓜[20]、黃脈爵床[21]、廣藿香[22]等引發(fā)葉斑病。在喜樹(shù)葉斑病發(fā)生初期，因癥狀不明顯而容易錯(cuò)過(guò)防治時(shí)期，多主棒孢霉引起的葉斑病在熱帶及亞熱帶地區(qū)大面積栽培的香蕉、橡膠樹(shù)和煙草上已逐漸上升為主要病害[15,17,23]。在棒孢霉葉斑病防治方面，番華彩等[14]使用7種殺菌劑對(duì)云南香蕉棒孢霉葉斑病進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，發(fā)現(xiàn)抑菌效果較佳的是丙環(huán)唑、多抗霉素和苯甲·丙環(huán)唑。謝昌平等[17]使用14種不同殺菌機(jī)理殺菌劑對(duì)海南橡膠樹(shù)葉斑病的棒孢霉進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，發(fā)現(xiàn)多菌靈的抑菌效果最佳；陳鑫[23]開(kāi)展涪陵烤煙棒孢霉葉斑病田間藥劑篩選研究，發(fā)現(xiàn)化學(xué)防治效果較好，而生物農(nóng)藥枯草芽孢桿菌和木霉菌的防治效果不理想。【本研究切入點(diǎn)】喜樹(shù)葉斑病的病原種類(lèi)復(fù)雜多樣，而目前對(duì)廣西南寧地區(qū)喜樹(shù)葉斑病的病原尚不明確，國(guó)內(nèi)外至今沒(méi)有棒孢霉引起喜樹(shù)葉斑病及其有效防治藥劑篩選的相關(guān)報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】通過(guò)分離喜樹(shù)葉斑病病原菌，經(jīng)柯赫氏法則驗(yàn)證，結(jié)合形態(tài)特征及分子鑒定，明確其病原菌的種類(lèi)，進(jìn)一步通過(guò)室內(nèi)毒力測(cè)定篩選出防治喜樹(shù)葉斑病的有效殺菌劑，為大田喜樹(shù)葉斑病的綜合防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 植物材料 喜樹(shù)葉斑病病葉和健康葉片均于2017年9月采自廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)大學(xué)中草藥園(東經(jīng)108°21′，北緯22°49′)。

1.1.2 殺菌劑 供試殺菌劑12種，分別為三唑類(lèi)20%戊菌唑水乳劑(海利爾藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司)、250 g/L丙環(huán)唑乳油(招遠(yuǎn)三聯(lián)化工廠有限公司)和10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑(先正達(dá)南通作物保護(hù)有限公司)；咪唑類(lèi)的20%抑霉唑水乳劑(一帆生物科技集團(tuán)有限公司)和450 g/L咪鮮胺水乳劑(上海滬聯(lián)生物藥業(yè)夏邑股份有限公司)；苯并咪唑衍生物類(lèi)的50%多菌靈可濕性粉劑(四川潤(rùn)爾科技有限公司)；吡咯類(lèi)的50%咯菌腈可濕性粉劑(先正達(dá)中國(guó)投資有限公司)；抗生素類(lèi)的10%多抗霉素可濕性粉劑(住商農(nóng)資廣州有限公司)；甲氧基丙烯酸酯類(lèi)的250 g/L吡唑醚菌酯乳油(巴斯夫植物保護(hù)江蘇有限公司)；三唑類(lèi)與甲氧基丙烯酸酯類(lèi)復(fù)配的30%苯甲·吡唑酯懸浮劑(江蘇耘農(nóng)化工有限公司)和325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑(先正達(dá)南通作物保護(hù)有限公司)；三唑類(lèi)與咪唑類(lèi)復(fù)配的20%苯甲·咪鮮胺微乳劑(山東中新科農(nóng)生物科技有限公司)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 病原菌分離與純化 采用常規(guī)組織分離法[24]剪取喜樹(shù)葉片病健交界處約4 mm×4 mm大小的病害樣本組織，經(jīng)75%酒精消毒30 s，10%次氯酸鈉溶液浸泡1 min，用無(wú)菌水漂洗3次，然后轉(zhuǎn)至馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(PSA培養(yǎng)基)上，置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3～5 d，待長(zhǎng)出菌落后，在菌落邊緣用接種針挑取菌絲轉(zhuǎn)移到新的PSA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，單孢分離純化后轉(zhuǎn)移至PSA斜面試管中，28 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)5 d后置于4 ℃冰箱保藏備用。

1.2.2 病原菌致病性測(cè)定 菌絲塊離體葉片接種法：摘取新鮮且健康的喜樹(shù)葉片，無(wú)菌水沖洗3次，放入鋪有滅菌紙巾的托盤(pán)中，加無(wú)菌水濕潤(rùn)。用直徑5 mm的打孔器在PSA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d的菌落邊緣打孔，并將菌絲塊接種到葉片上，以保鮮膜密封保濕，置于28 ℃下恒溫培養(yǎng)，每個(gè)菌株接種5張葉片，3個(gè)重復(fù)，并用空白PSA瓊脂塊接種作為對(duì)照。接種發(fā)病后用挑針移去菌絲塊，并連續(xù)觀察發(fā)病情況。

孢子液離體葉片和活體葉片接種法：將病原菌的菌絲塊接種到PSA培養(yǎng)基上使其產(chǎn)生分生孢子，產(chǎn)孢后加無(wú)菌水將分生孢子洗下來(lái)，用紗布將菌絲過(guò)濾，用血球計(jì)數(shù)板將孢子液濃度調(diào)為1×106個(gè)/mL，并添加吐溫使其終濃度為0.1%左右。離體葉片接種在室內(nèi)恒溫條件下進(jìn)行，采集健康無(wú)病的喜樹(shù)嫩葉置于鋪有滅菌吸水紙的托盤(pán)上，加無(wú)菌水保濕，用移液槍將配好的分生孢子液20 μL滴在喜樹(shù)葉片上，以滴無(wú)菌水的葉片為對(duì)照，接種葉片置于恒溫條件下保濕培養(yǎng)。每個(gè)菌株接種5片葉片，3個(gè)重復(fù)?；铙w接種在室外喜樹(shù)植株上進(jìn)行，選擇健康無(wú)病的嫩葉，在葉片上放置一小團(tuán)無(wú)菌棉花，點(diǎn)接20 μL分生孢子液，然后噴施少量無(wú)菌水套袋保濕，觀察并記錄葉片發(fā)病情況。

從接種發(fā)病葉片的病健交界處剪取大小約為4 mm×4 mm的組織，用常規(guī)組織分離法對(duì)病原菌進(jìn)行再分離，然后鑒定再次分離到的病菌與接種用的菌株形態(tài)是否一致，完成柯赫氏法則驗(yàn)證。

1.2.3 病原菌形態(tài)特征觀察 將直徑5 mm的菌絲塊接種到PSA培養(yǎng)基上，在28 ℃恒溫培養(yǎng)箱下培養(yǎng)，觀察病原菌的菌落特征及有無(wú)分生孢子產(chǎn)生。將濾紙剪成與載玻片一般大小，并在濾紙中央剪出1 cm×2 cm的長(zhǎng)方形窗口，將裁好的長(zhǎng)方形濾紙放在載玻片上，在90 mm培養(yǎng)皿中疊放3層吸水紙，添加少量蒸餾水濕潤(rùn)，然后將帶有濾紙片的載玻片放入培養(yǎng)皿中，濕熱(121 ℃)滅菌30 min。用挑針從活化5 d的菌落邊緣取細(xì)碎菌絲塊置于濾紙窗口的四周，28 ℃恒溫光照條件下培養(yǎng)，待孢子產(chǎn)生后在光學(xué)顯微鏡下測(cè)量分生孢子大小。

1.2.4 分子生物學(xué)鑒定 委托廣西南寧國(guó)拓生物科技有限公司完成病原菌DNA提取，然后采用真菌核糖體DNA通用引物ITS1和ITS4對(duì)rDNA-ITS區(qū)域進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物序列ITS1為5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′，ITS4為S′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′。將PCR產(chǎn)物送至生工生物(上海)股份有限公司進(jìn)行純化和雙向測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果進(jìn)行拼接后在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST比對(duì)，下載相關(guān)序列，進(jìn)行同源性比較，采用鄰接法運(yùn)用MEGA 7.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，自舉重復(fù)(Bootstrap replication)設(shè)置為1000次。

1.2.5 不同殺菌劑對(duì)病原菌的室內(nèi)毒力測(cè)定 利用菌絲生長(zhǎng)速率法對(duì)12種殺菌劑按照倍數(shù)法稀釋成不同濃度的母液，再?gòu)拿總€(gè)倍數(shù)的母液中吸取0.5 mL加入至49.5 mL的PSA培養(yǎng)基中制作成含藥培養(yǎng)基，藥劑終濃度見(jiàn)表1，再將培養(yǎng)7 d的病原菌用打孔器打出5 mm直徑的菌餅，接種到含藥培養(yǎng)基上，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，以不加藥的PSA培養(yǎng)基為對(duì)照，27 ℃培養(yǎng)箱暗培養(yǎng)7 d后以十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算各殺菌劑的抑菌率。

表1 12種殺菌劑的稀釋濃度Table 1 Dilution concentration for 12 fungicides

抑菌率(%)=(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對(duì)照菌落直徑)×100

1.3 數(shù)據(jù)處理

用浙大DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分析藥劑終濃度對(duì)數(shù)值(x)和對(duì)應(yīng)菌絲生長(zhǎng)抑菌率的機(jī)率值(y)，根據(jù)不同殺菌劑對(duì)棒孢霉菌絲生長(zhǎng)的毒力回歸方程y=a+bx計(jì)算各供試藥劑對(duì)病原菌的致死中濃度EC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原物的分離及致病性測(cè)定

對(duì)采集的喜樹(shù)葉斑病病葉(圖1-A、1-B和1-C)進(jìn)行分離培養(yǎng)，獲得3株菌落形態(tài)不同的菌株，將3株菌株分別回接到健康喜樹(shù)葉片上，用菌絲塊刺傷接種，發(fā)現(xiàn)只有分離頻率最高的菌株XS-1成功侵染，發(fā)病率達(dá)100%，發(fā)病癥狀如圖1-D。菌株XS-1接種2 d后健康喜樹(shù)葉片即發(fā)病，繼續(xù)培養(yǎng)后病斑逐漸變大、變褐色后再變黑褐色，而對(duì)照葉片不發(fā)病。培養(yǎng)出分生孢子后，用分生孢子液進(jìn)行接種，發(fā)病癥狀如圖1-E，通過(guò)對(duì)接種發(fā)病葉片再分離，獲得與菌株XS-1形態(tài)相同的菌株，證實(shí)菌株XS-1為喜樹(shù)葉斑病病原菌。

2.2 病原菌鑒定

2.2.1 病原菌形態(tài)特征 形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果表明，菌株XS-1在PSA培養(yǎng)基上的菌落均為圓形，有同心輪紋，氣生菌絲灰色，生長(zhǎng)茂盛(圖1-F)，菌落背面中央灰褐色并隆起，邊緣灰白色(圖1-G)；分生孢子梗淺灰褐色，有單生偶爾有分枝，有隔膜；分生孢子串生，鏈狀，棒棍狀至圓筒形，長(zhǎng)短差異較明顯(圖1-H)，大小為(24.1～196.5)μm×(3.5～10.0)μm，平均長(zhǎng)(81.8±37.9)μm，平均寬(7.2±1.2)μm(n=98)，無(wú)色至橄欖褐色，壁平滑，具有假隔膜。結(jié)合菌落形態(tài)和分生孢子特征并參考魏景超[25]的研究結(jié)果，將菌株XS-1鑒定為棒孢霉屬(Corynespora)真菌。

A：喜樹(shù)葉斑病田間發(fā)病癥狀；B：葉片正面癥狀；C：葉片背面癥狀；D：菌絲塊離體接種發(fā)病癥狀；E：田間活體植株葉片孢子液接種發(fā)病癥狀；F：病原菌菌落正面形態(tài)；G：病原菌菌落反面形態(tài)；H：病原菌分生孢子梗和分生孢子；bar=20 μmA：Symptoms of leaf spot disease of C.acuminata in the field；B：Disease symptoms of the upper surface of leaf；C：Disease symptoms of the lower surface of leaf；D：Symptoms of leaf by artificial incubation with mycelial plugs；E：Symptoms of C.acuminata leaves inoculated with conidial suspensions on detached leaves and attached leaves；F：Colony morphology of upper side on PSA；G：Morphology of colony on reverse side of PSA；H：Conidiophore and conidia；bar=20 μm圖1 喜樹(shù)葉斑病田間發(fā)病癥狀、致病性測(cè)定及病原菌XS-1的形態(tài)特征Fig.1 Symptoms of leaf spot disease on C.acuminata and morphological characteristics of strain XS-1

2.2.2 病原菌rDNA-ITS序列分析 將菌株XS-1的ITS序列提交到NCBI的GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行同源性比對(duì)，結(jié)果表明，病原菌XS-1的ITS序列與GenBank的多主棒孢霉(C.cassiicola)相似性在99%以上。根據(jù)比對(duì)結(jié)果，選擇棒孢霉屬不同種菌株的ITS序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)(圖2)，菌株XS-1與C.cassiicola(HQ64107、EF198116、FJ85257和KF26678)在同一分支上，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察和rDNA-ITS序列分析結(jié)果，將菌株XS-1初步鑒定為多主棒孢霉，即喜樹(shù)發(fā)生的葉斑病為喜樹(shù)棒孢霉葉斑病。

2.3 防治藥劑室內(nèi)篩選

室內(nèi)藥劑篩選結(jié)果(表2)表明，12種殺菌劑對(duì)菌株XS-1菌絲生長(zhǎng)均具有抑制作用，但抑菌效果存在明顯差異，其中，20%苯甲·咪鮮胺的抑制作用最強(qiáng)，其次是20%戊菌唑、50%多菌靈、20%抑霉唑、250 g/L丙環(huán)唑和10%苯醚甲環(huán)唑，其EC50分別為0.0980、0.3737、0.4557、0.4878、0.5746和0.5956 mg/L，這幾種殺菌劑均可用于喜樹(shù)棒孢霉葉斑病防治；而250 g/L吡唑醚菌酯的EC50為3.8588 mg/L，抑菌效果最差，10%多抗霉素、325 g/L苯甲·嘧菌酯、50%咯菌腈、30%苯甲·吡唑酯和450 g/L咪鮮胺的EC50分別為1.7516、1.4503、1.0844、1.0628和0.9166 mg/L，抑菌效果也較差。

表2 12種殺菌劑對(duì)菌株XS-1菌絲生長(zhǎng)的毒力測(cè)定Table 2 Inhibition effects of 12 fungicides against the myceilial growth of XS-1

3 討 論

目前國(guó)內(nèi)外已報(bào)道的喜樹(shù)葉斑病病原菌種類(lèi)有棉花葉點(diǎn)菌、黃麻褐斑菌、細(xì)交鏈孢、擬尾孢菌、尾孢菌和擬莖點(diǎn)霉[8-11]，其中，在浙江地區(qū)流行的喜樹(shù)角斑病是多種病原菌復(fù)合侵染的結(jié)果[8]，與杭州地區(qū)發(fā)現(xiàn)的喜樹(shù)葉斑病田間癥狀[9]相似，但病原不同。本研究中，經(jīng)致病性測(cè)定、形態(tài)特征觀察和rDNA-ITS序列分析，確定引起廣西南寧地區(qū)喜樹(shù)葉斑病的病原菌為多主棒孢霉，在國(guó)內(nèi)為首次報(bào)道。采用形態(tài)學(xué)觀察與分子鑒定相結(jié)合是鑒定棒孢霉較可靠的方法，在形態(tài)學(xué)觀察的基礎(chǔ)上，結(jié)合rDNA-ITS序列系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)分析可確定其分類(lèi)地位[26]。

關(guān)于棒孢霉葉斑病的防治研究，番華彩等[14]用7種殺菌劑對(duì)云南香蕉棒孢霉葉斑病進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)抑菌效果較好的是丙環(huán)唑、多抗霉素和苯甲·丙環(huán)唑，丙森鋅、氟硅唑和乙蒜素次之，而嘧菌酯的抑菌效果最差；陳鑫[23]研究表明，化學(xué)藥劑對(duì)涪陵烤煙棒孢霉葉斑病的田間防治效果優(yōu)于生物農(nóng)藥。本研究發(fā)現(xiàn)，三唑類(lèi)殺菌劑(20%戊菌唑、250 g/L丙環(huán)唑、10%苯醚甲環(huán)唑)對(duì)菌株XS-1的殺菌效果較好，甲氧基丙烯類(lèi)殺菌劑(250 g/L吡唑醚菌酯)對(duì)菌株XS-1的殺菌效果較差，與番華彩[14]的研究結(jié)果一致。謝昌平等[17]用14種不同殺菌機(jī)理殺菌劑對(duì)海南橡膠樹(shù)葉斑病的棒孢霉進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)多菌靈的抑菌效果最好，其EC50為0.4472 mg/L，丙環(huán)唑的抑菌效果優(yōu)于苯醚甲環(huán)唑。本研究結(jié)果與謝昌平等[17]的研究結(jié)果相似，使用3種三唑類(lèi)殺菌劑及咪唑類(lèi)殺菌劑中的20%抑霉唑的殺菌效果均優(yōu)于450 g/L咪鮮胺，另外2種不同殺菌機(jī)理的50%咯菌腈和250 g/L吡唑醚菌酯的殺菌效果相對(duì)較差；比較6種不同殺菌機(jī)理殺菌劑對(duì)喜樹(shù)棒孢霉葉斑病病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑菌效果，總體上以三唑類(lèi)、苯并咪唑衍生物類(lèi)和咪唑類(lèi)較好，吡咯類(lèi)一般，抗生素類(lèi)和甲氧基丙烯酸酯類(lèi)較差。本研究還發(fā)現(xiàn)，復(fù)配殺菌劑的抑菌活性不一定強(qiáng)于單劑殺菌劑，其中，10%苯醚甲環(huán)唑的EC50為0.5956 mg/L，明顯低于復(fù)配殺菌劑325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑(含125 g/L苯醚甲環(huán)唑和200 g/L嘧菌酯)和30%苯甲·吡唑酯懸浮劑(含苯醚甲環(huán)唑22%和吡唑嘧菌酯8%)的EC50，可能與甲氧基丙烯酸酯類(lèi)中的嘧菌酯和吡唑醚菌酯對(duì)棒孢霉的抑菌效果不佳而影響復(fù)配后的殺菌效果有關(guān)；而復(fù)配殺菌劑20%苯甲·咪鮮胺微乳劑(含苯醚甲環(huán)唑5%和咪鮮胺唑15%)的EC50為0.0980 mg/L，均明顯低于單劑的10%苯醚甲環(huán)唑或450 g/L咪鮮胺的EC50，說(shuō)明單劑的10%苯醚甲環(huán)唑與450 g/L咪鮮胺復(fù)配為20%苯甲·咪鮮胺微乳劑能發(fā)揮殺菌增效作用，可作為防治喜樹(shù)棒孢霉葉斑病的首選藥劑。

*為模式菌株* represented model strain圖2 喜樹(shù)葉斑病病原菌的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)Fig.2 Phylogenetic relationships of C. cassiicola tree based on rDNA-ITS sequences

4 結(jié) 論

經(jīng)致病性測(cè)定、形態(tài)特征觀察和分子鑒定，確定引起喜樹(shù)葉斑病的病原菌為多主棒孢霉(C.cassiicola)；20%苯甲·咪鮮胺微乳劑、20%戊菌唑水乳劑、50%多菌靈可濕性粉劑、20%抑霉唑水乳劑、250 g/L丙環(huán)唑乳油和10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑對(duì)喜樹(shù)棒孢霉菌絲生長(zhǎng)均具有較強(qiáng)的抑制作用，可作為喜樹(shù)棒孢霉葉斑病田間防治參考用藥。