新城疫活疫苗對(duì)控制雞大腸桿菌病的效果觀察

蔡 羲 林 琳 黃梅清 陳秀琴 鄭 敏 江 斌＊

（1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 福州 350013；2.福建省畜禽疫病防治工程技術(shù)研究中心 福州350013）

禽大腸桿菌病（Avian colibacilloisis）指部分或全部由大腸桿菌（E.coli）所引起的局部或全身性感染的疾病。隨著集約化養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展，雞大腸桿菌病已成為嚴(yán)重威脅養(yǎng)雞業(yè)的傳染病之一，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前，防治該病主要依靠抗生素，但是抗生素濫用的現(xiàn)象越來越嚴(yán)重，不僅會(huì)造成養(yǎng)殖成本增高，也會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，另外藥物殘留會(huì)造成更為嚴(yán)重的食品安全問題。疫苗接種有一定的效果，但由于大腸桿菌血清型眾多，各血清型之間沒有交叉保護(hù)，因此其推廣使用范圍有限。如何應(yīng)用無抗的方法控制大腸桿菌病已經(jīng)成為一項(xiàng)涉及食品安全的實(shí)用技術(shù)。筆者通過多年臨床觀察，對(duì)于頑固性大腸桿菌，應(yīng)用新城疫疫苗緊急免疫能取得較好的效果，具體原因尚不清楚。因此，設(shè)計(jì)本試驗(yàn)，論證新城疫La-sota弱毒苗（Ⅳ系）對(duì)控制雞大腸桿菌病的效果。

1 材料與方法

1.1 大腸桿菌菌株來源 本實(shí)驗(yàn)室分離鑒定的FQ11株。

1.2 儀器和試劑 流式細(xì)胞儀（BD公司，型號(hào)：BD FACSCalibur）；普通臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠，型號(hào)：TGL-16G）；淋巴細(xì)胞分離液（天津?yàn)笊镏破房萍加邢挢?zé)任公司）；新城疫疫苗La-sota弱毒苗（Ⅳ系）為青島易邦生物制品廠生產(chǎn)，批號(hào)為：20190911。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 選取同一批次30日齡的健康蛋雞50羽，由河北峪口禽業(yè)有限公司提供，根據(jù)本場(chǎng)免疫程序進(jìn)行，于7日齡、21日齡進(jìn)行雞新城疫-傳染性支氣管炎二聯(lián)四價(jià)疫苗(活)免疫，隨機(jī)分為空白組10羽，對(duì)照組20羽，試驗(yàn)組20羽，正常飼喂，不添加任何藥物。

1.4 攻毒試驗(yàn) 參照周秀紅等[1]的方法進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，以平板計(jì)數(shù)法測(cè)定細(xì)菌含量，最終調(diào)至細(xì)菌濃度為1×108CFU/mL。FQ11大腸桿菌混懸液胸肌注射攻毒，0.2 mL/羽。 各組雞分別隔離飼養(yǎng)，連續(xù)觀察2周，每天詳細(xì)記錄雞群發(fā)病、死亡情況，并對(duì)病死雞進(jìn)行剖檢，從中分離病原體并進(jìn)行鑒定，以驗(yàn)證死雞確系由攻毒所致。

待出現(xiàn)臨床癥狀，試驗(yàn)組每只雞緊急免疫新城疫La-sota弱毒苗（Ⅳ系）4羽份。分別于免疫后第5 d、10 d、17 d隨機(jī)采集各組血樣8份，每份5 mL，其中每份血液樣品取2 mL分離血清，用血凝抑制法（HI）檢測(cè)ND抗體[2]；每份剩余樣品3 mL，加肝素抗凝，用于提取淋巴細(xì)胞，按流式細(xì)胞儀操作進(jìn)行T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，用LSD法進(jìn)行多重比較，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床表現(xiàn)和剖檢病變 對(duì)照組雞死亡10羽，死亡率高達(dá)50%，試驗(yàn)組死亡4羽，死亡率20%；對(duì)照組和試驗(yàn)組部分雞食欲降低，翅下垂，羽毛蓬亂，反應(yīng)遲鈍，行動(dòng)緩慢，消瘦喜睡，排黃綠色稀糞。剖檢病變?yōu)闅饽已住⑿陌?、肝周炎。以患雞的心血、氣囊、肝滲出液接種S-S瓊脂、麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂，于37℃溫箱培養(yǎng)24 h后均有典型的大腸桿菌菌落生長(zhǎng)?？瞻讓?duì)照組，一切正常。

2.2 新城疫抗體水平與大腸桿菌病抗病性相關(guān)性分析 由表1可知，緊急免疫后5～17 d，試驗(yàn)組抗體水平逐漸升高，而對(duì)照組抗體略有下降，免疫后第17 d，試驗(yàn)組與對(duì)照組新城疫抗體水平差異顯著（P<0.05），試驗(yàn)組死亡率明顯降低，說明新城疫抗體水平較高的雞，對(duì)大腸桿菌病的抗病性較強(qiáng)，呈一定程度正相關(guān)。

表1 免疫后雞群新城疫平均抗體水平變化相關(guān)性分析比較

2.3 外周血液中T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量的變化 由表2可以看出，對(duì)照組、試驗(yàn)組緊急免疫后外周血液T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量明顯上升，試驗(yàn)組與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞數(shù)量差異極顯著（P<0.01），B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量差異顯著（P<0.05），說明緊急免疫后體液免疫、細(xì)胞免疫、非特異性免疫增強(qiáng)，并且維持在較高的水平。

表2 外周血液T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量變化

3 討 論

從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，緊急免疫后，隨著試驗(yàn)組雞新城疫抗體水平提高，對(duì)大腸桿菌病的抗病性增強(qiáng)，死亡率降低，新城疫抗體水平與大腸桿菌病抗病性呈一定程度正相關(guān)。這一結(jié)果與Yunis R等[3]的研究報(bào)道基本一致，即新城疫抗體水平較高的個(gè)體，其大腸桿菌病抗病性也較高，二者存在很強(qiáng)的正相關(guān)。

試驗(yàn)結(jié)果表明，緊急免疫后，試驗(yàn)組雞的死亡率得到有效控制，未免疫的對(duì)照組死亡率達(dá)到50%。外周血液檢測(cè)結(jié)果顯示，緊急免疫后，T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞數(shù)量明顯上升，并維持在較高的水平。有試驗(yàn)表明[4-7]，應(yīng)激反應(yīng)可增強(qiáng)固有免疫、獲得性體液免疫和細(xì)胞免疫，其決定因素是抗原、病原或受傷導(dǎo)致的應(yīng)激反應(yīng)建立的生理?xiàng)l件，這些條件包括T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)和激活。新城疫弱毒疫苗有Ⅰ系、Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系等多種，Ⅰ系疫苗具中等毒力，對(duì)產(chǎn)蛋雞、雛雞等都有致病性，應(yīng)謹(jǐn)慎使用；Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系屬于弱毒苗，廣泛應(yīng)用于青年雞群免疫，但Ⅳ系疫苗的毒力比其它兩系要強(qiáng)，免疫后對(duì)雞群提升免疫力效果不錯(cuò)[8]。因此，可以通過緊急免疫新城疫La-sota弱毒苗（Ⅳ系），快速提高雞群免疫力，提高對(duì)大腸桿菌病的抗病性。