CEP8聯(lián)合CD45檢測NSCLC患者血液循環(huán)腫瘤細(xì)胞的應(yīng)用研究

孫斌

非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是世界上最常見、多發(fā)的惡性腫瘤之一，約占所有肺癌的85%[1]，其臨床檢測包括8號染色體著絲粒探針（centromeric enumeration probes for chromosomes 8，CEP8）熒光原位雜交法與CD45 免疫熒光抗體技術(shù)兩種[2]。雖然兩種檢測方法應(yīng)用在NSCLC 檢測的準(zhǔn)確性均較高，但多以單獨(dú)檢測，兩者聯(lián)合卻鮮有報道。故本次研究將通過CEP8 聯(lián)合CD45 檢測NSCLC 患者血液循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cells，CTC）檢測的價值，為該病的臨床診治提供理論與實(shí)踐依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018 年2 月至2021 年12 月杭州市蕭山區(qū)中醫(yī)院收治的肺癌204 例患者，其中男性101 例、女性103 例；年齡23～68 歲，平均年齡（49.60±7.23）歲；腫瘤分期[3]：Ⅰ期89 例、Ⅱ期64 例、Ⅲ期31 例、Ⅳ期20 例；病理分型：腺癌93 例、鱗癌81 例、腺鱗癌11 例、低分化癌19 例。本課題經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核通過。納入標(biāo)準(zhǔn)包括：①經(jīng)細(xì)胞學(xué)檢查或組織病理學(xué)確診為NSCLC[4,5]；②年齡22～68 周歲；③入組前1 個月內(nèi)未接受過任何與疾病相關(guān)的放化療及靶向治療；④術(shù)后生存期＞6 個月；⑤心、肝、腎等重要臟器功能正?；蚧菊＃虎夼R床資料完整且簽署（家屬代簽）知情同意書者。并剔除：①合并有其它惡性腫瘤者；②入組前5 年內(nèi)患其它惡性疾病者；③有癥狀性腦轉(zhuǎn)移和/或凝結(jié)血塊NSCLC 者；④存在大量漿膜腔積液者；⑤臨床資料不完整者。

1.2 方法 采用CEP8 熒光原位雜交法結(jié)合CD45的免疫熒光抗體技術(shù)（CD45-FISH 法）檢測CTC。本次研究以CTC≥2 個/3.2 ml 外周血且癌胚抗原≥5 ng/ml 作為NSCLC 診斷金標(biāo)準(zhǔn)。CEP8熒光原位雜交法：CTC≥2 個/3.2 ml 為陽性，CD45 免疫熒光抗體技術(shù)：CTC≥2個/3.2 ml為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。組間計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。設(shè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CTC檢測結(jié)果與診斷價值比較見表1

表1 CTC檢測結(jié)果與診斷價值比較

由表1 可見，聯(lián)合檢測時的CTC 數(shù)量、CTC 檢出率均高于CEP8 熒光原位雜交法、CD45 免疫熒光抗體技術(shù)檢測，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t分別=5.53、5.73，χ2分別=6.32、6.74，P均＜0.05），而CEP8 熒光原位雜交法、CD45 免疫熒光抗體技術(shù)檢測時的CTC數(shù)量、CTC 檢出率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.41，χ2=0.82，P均＞0.05）。

2.2 CEP8、CD45及聯(lián)合診斷的價值比較見表2

由表2 可見，聯(lián)合檢測時的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準(zhǔn)確率均高于CEP8 熒光原位雜交法、CD45 免疫熒光抗體技術(shù)檢測，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2分別=5.67、5.98、6.14、6.29、5.67、5.93、7.14、7.27、5.42、5.37、6.92、6.81、6.92、6.39、5.61、5.89、8.17、8.34、5.45、5.37，P均＜0.05）。

3 討論

腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的病理過程，其中腫瘤細(xì)胞就是腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的種子[6]。CTC 的形成與上皮間質(zhì)量轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）密切相關(guān)，EMT 具有賦予細(xì)胞轉(zhuǎn)移和入侵的能力[7]，進(jìn)而促成了CTC 從原發(fā)瘤脫落再進(jìn)入到血液或淋巴系統(tǒng)里，但不是所有的腫瘤細(xì)胞都能在循環(huán)系統(tǒng)中存活下來，除非它具有高度活力與高度轉(zhuǎn)移潛能，才能進(jìn)一步形成微小癌栓[8]。由于CTC具有腫瘤細(xì)胞學(xué)與基因遺傳學(xué)特征，所以當(dāng)它們通過血液循環(huán)到達(dá)環(huán)境合適的遠(yuǎn)端部位之后，便會在這些部位增殖，繼而發(fā)展為致命性腫瘤轉(zhuǎn)移病灶[9，10]。

CTC 數(shù)量作為液體活檢的一項(xiàng)指標(biāo)，對腫瘤的診斷、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的監(jiān)測及預(yù)后判斷等有重要臨床指導(dǎo)意義。由于多數(shù)腫瘤患者循環(huán)血中CTC 數(shù)量極少，因此需要更加高效的CTC 富集及檢測技術(shù)。目前，被美國食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的CTC 富集檢測系統(tǒng)僅有CellSearch?循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測系統(tǒng)[11]，其作用機(jī)制是通過免疫磁珠結(jié)合上皮細(xì)胞黏附分子富集并用CTC 中細(xì)胞角蛋白陽性和白細(xì)胞標(biāo)記CD45 陰性來鑒定CTC[12]。本次CTC 檢測結(jié)果中發(fā)現(xiàn)NSCLC 患者的CTC 檢測過程中，CEP 和CD45聯(lián)合檢測時的CTC數(shù)量、CTC檢出率均高于單純CEP8 熒光原位雜交法、CD45 免疫熒光抗體技術(shù)檢測（P均＜0.05），本次研究結(jié)果還顯示，而將CTC≥2 個/3.2 ml 外周血且癌胚抗原≥5 ng/ml 作為NSCLC 診斷指標(biāo)時，CEP 和CD45 聯(lián)合檢測時的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準(zhǔn)確率均高于CEP8 熒光原位雜交法、CD45 免疫熒光抗體技術(shù)檢測（P均＜0.05），表明聯(lián)合檢測的診斷價值更高。

綜上所述，在NSCLC 患者的血液CTC 檢測過程中科學(xué)、合理的予以CEP8 熒光原位雜交法聯(lián)合CD45免疫熒光抗體技術(shù)檢測準(zhǔn)確率更高，但本次研究樣本量不足，宜擴(kuò)大樣本量進(jìn)行相關(guān)研究，進(jìn)一步驗(yàn)證研究結(jié)果。