血清CYP2R1對核苷類似物/IFN-α治療CHB療效的預測價值

王元英

(儋州市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，海南省儋州市 571700)

慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染引起，影響全球約2.57億人口[1]。核苷類似物(nucleoside analogues，NAs)規(guī)范治療后未獲得病毒學或血清學應答或耐藥及復發(fā)患者需調(diào)整治療策略[2-3]，這類CHB患者再采用聚乙二醇干擾素-α(pegylated interferon，PEG-IFN-α)序貫治療能提高乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)轉(zhuǎn)陰率，但部分患者仍出現(xiàn)IFN-α應答不佳的現(xiàn)象[4]。維生素D在細胞色素P450家族2亞家族R成員1(cytochrome P450 family 2 subfamily R member 1，CYP2R1)的催化下進行25羥化生成具有生物活性的25-羥維生素D3[25(OH)D3]，血清25(OH)D3水平與HBV DNA含量高度負相關(guān)[5]。本文探討血清CYP2R1水平對NAs/IFN-α治療CHB患者療效的預測價值。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2019年1月—2021年1月接受經(jīng)NAs治療的78例CHB患者為CHB組(n=78)。納入標準： ①符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2019年版)[6]中CHB相關(guān)診斷和NAs治療標準；②年齡18～60歲；③首次接受IFN-α治療，既往接受NAs治療1年以上；④符合PEG-IFN-α用藥指征[7]：NAs治療后病毒學應答不佳或耐藥，或達到滿意終點后復發(fā)者；⑤無內(nèi)分泌系統(tǒng)疾?。虎藓炇鹬橥鈺?。排除標準：①合并自身免疫性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪肝者；②入組前半年內(nèi)使用過皮質(zhì)類固醇或免疫調(diào)節(jié)劑者；③IFN-α注射禁忌者；④合并其他惡性腫瘤，心、肺、腎功能嚴重障礙者；⑤妊娠或哺乳期婦女。另選取同期本院體檢中心40例健康志愿者為對照組。收集研究對象性別、年齡、BMI、肝功能等臨床資料，兩組基線資料比較見表1。本研究獲得本院倫理委員會批準。

表1 CHB組與對照組基線資料比較

1.2 治療方法

CHB組給予Peg-IFN-α-a(上海羅氏制藥有限公司，每支180 mg/0.5 mL)，皮下注射，1支/周，共48周。入組后前8周聯(lián)合恩替卡韋(中美上海施貴寶制藥有限公司，0.5 mg/片)口服，1片/次，1次/天，入組后前8周服藥。

1.3 CYP2R1檢測

分別于IFN-α治療0、4、12、24、36、48周時，采集患者空腹靜脈血，置于EDTA抗凝采血管中。對照組于體檢時采集血液樣本?？鼓? mL離心收集上層血漿，酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清CYP2R1水平，嚴格按照試劑盒(美國Abcam公司產(chǎn)品)進行操作。MultiskanTMFC酶標儀(美國Thermo公司產(chǎn)品)測定450 nm處的光密度值，根據(jù)標準曲線計算血清CYP2R1水平。

1.4 病毒學應答的檢測

于IFN-α治療前采用RT-PCR法檢測血清HBV DNA，試劑盒購自中山大學達安基因股份有限公司。病毒學應答是指血清HBV DNA轉(zhuǎn)為陰性。治療48周時，將CHB組發(fā)生病毒學應答的48例患者納入應答組，其余30例患者納入非應答組。

1.5 其他實驗室指標檢測

采用羅氏COBAS MIRA化學分析儀(羅氏公司產(chǎn)品)檢測肝功能血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine transaminase，ALT)、總膽紅素(total bilirubin，TBIL)。分別于IFN-α治療0、48周時，采用化學發(fā)光免疫分析法檢測HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBeAg及HBcAb，試劑盒購自美國雅培公司。采用DxH800血細胞分析儀(美國貝克曼庫爾特有限公司產(chǎn)品)檢測患者采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清25(OH)D3水平，試劑盒購自上海西格生物科技有限公司。血小板計數(shù)(platelet count，PLT)、白細胞計數(shù)(white blood cell count，WBC)等血常規(guī)指標。

1.6 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 24.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料兩兩比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組治療前CYP2R1水平比較

入組時CHB組IFN-α治療前血清CYP2R1低于對照組(P<0.05;表1)。

2.2 應答組與非應答組不同治療時間CYP2R1水平比較

IFN-α治療0、4、36、48周時應答組與非應答組CYP2R1表達水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，治療12、24周時應答組CYP2R1表達水平高于非應答組(P<0.05；表2)。

表2 應答組與非應答組不同治療時間CYP2R1表達水平比較 單位：ng/L

2.3 應答組與非應答組基線資料比較

入組時應答組IFN-α治療前AST、ALT及25(OH)D3高于非應答組，WBC和HBV DNA載量低于非應答組(P<0.05；表3)。

表3 應答組與非應答組基線資料比較

2.4 IFN-α抗病毒療效的多因素Logistic回歸分析

以不同治療時間CYP2R1、IFN-α治療前AST、ALT、HBV DNA載量及25(OH)D3為自變量(均賦值為連續(xù)變量)，以病毒應答為因變量(應答賦值為0，非應答賦值為1)，進行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示IFN-α治療前HBV DNA載量、25(OH)D3及治療12、24周時CYP2R1是影響IFN-α抗病毒療效的獨立危險因素(P<0.05；表4)。

表4 影響IFN-α抗病毒療效的多因素Logistic回歸分析

2.5 治療12、24周時血清CYP2R1水平對IFN-α抗病毒療效的預測價值

治療12周時血清CYP2R1預測IFN-α抗病毒療效的AUC(95%CI)為0.673(0.540～0.805)，最佳截斷值為2.52 ng/L，靈敏度為60.42%，特異度為70.00%；治療24周時血清CYP2R1預測IFN-α抗病毒療效的AUC(95%CI)為0.774(0.667～0.881)，最佳截斷值為2.95 ng/L，靈敏度為72.92%，特異度為83.33%；24周較12周血清CYP2R1預測抗病毒療效效能升高(Z=7.127，P<0.05;圖1)。

圖1 CYP2R1水平對IFN-α抗病毒療效的ROC曲線

3 討 論

NAs通過阻斷反轉(zhuǎn)錄來抑制HBV增殖，停止給藥很可能會導致病毒反彈，從而導致肝炎的重新激活，需長期服用，但長期服用易產(chǎn)生耐藥突變[7]。IFN-α以非特異性的方式誘導干擾素刺激基因表達，直接或間接發(fā)揮抗病毒活性[8]。CHB患者接受IFN-α治療HBeAg血清學轉(zhuǎn)換和HBsAg血清清除率更高，且療程有限[9]。在接受NAs長期治療的CHB患者中選擇有望達到停藥標準的患者，給予IFN-α治療有利于其獲得更高的應答率和HBsAg消失率。

本研究發(fā)現(xiàn)，CHB組IFN-α治療前血清CYP2R1低于健康組，表明NAs經(jīng)治患者25(OH)D3合成可能受阻。應答組治療12、24周CYP2R1表達水平高于非應答組，表明血清高CYP2R1表達水平與CHB患者高應答率相關(guān)。Logistic分析表明IFN-α治療12、24周時CYP2R1是影響IFN-α抗病毒療效的獨立危險因素，提示CYP2R1可能是一個潛在的預測抗病毒療效的標志物。治療24周時血清CYP2R1預測IFN-α抗病毒療效的AUC靈敏度和特異度均較12周時升高，提示治療24周時血清CYP2R1水平對IFN-α的應答情況預測價值更高。

應答組IFN-α治療前AST、ALT、HBV DNA載量及25(OH)D3可能與IFN-α抗病毒療效相關(guān)。CYP2R1在維生素D代謝中起主導作用。25(OH)D3水平與HBV DNA水平密切相關(guān)，推測其參與HBV抗病毒治療過程[10]。本研究中CYP2R1水平對IFN-α治療病毒應答的預測效能較高，推測其可能通過調(diào)控維生素D的代謝發(fā)揮影響抗病毒效果的作用。IFN-α通過刺激免疫細胞活化激活細胞免疫應答，加速HBV清除和HBeAg轉(zhuǎn)陰[11]。血清ALT是反映肝損傷常用指標，血清高ALT的CHB患者細胞免疫功能得到強化，導致HBV易于清除。低基線HBV DNA對IFN-α有更高的應答率，這可能是因為低基線HBV DNA表明肝臟的炎性水平較低，病程較早，治療效果好[12]。

綜上，NAs/IFN-α治療過程中應答與非應答CHB患者CYP2R1水平存在差異，CYP2R1可作為判斷NAs經(jīng)治CHB患者IFN-α抗病毒療效敏感指標。對長期接受NAs治療的CHB患者停藥后再接受IFN-α治療具有一定的參考價值。