• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    芫荽NPR1-like家族全基因組鑒定及分析

    2022-07-29 09:20:02王葆生劉曉蕊劉湘萍
    江蘇農業(yè)科學 2022年13期
    關鍵詞:登錄號芫荽擬南芥

    王葆生, 龐 杰, 廉 勇, 劉曉蕊, 扈 順, 劉湘萍

    (內蒙古自治區(qū)農牧業(yè)科學院蔬菜花卉研究所,內蒙古呼和浩特 010031)

    (nonexpressor of pathogenesis-related genes 1)最初是在擬南芥()的突變體中發(fā)現(xiàn)的,因該突變基因使得系統(tǒng)獲得性抗性標志基因PR的表達量很低甚至不表達而得名。隨著擬南芥全基因組測序的完成,在擬南芥中又發(fā)現(xiàn)5個like基因,分別為、、、和。擬南芥NPR1-like家族成員在進化上可分為3個亞組,亞組Ⅰ中的AtNPR1和AtNPR2是擬南芥水楊酸(SA)的受體蛋白,在水楊酸介導的植物免疫反應中發(fā)揮正調控作用,同時也是低溫調控的重要因子;在亞組Ⅱ中,AtNPR3和AtNPR4也都是水楊酸的受體蛋白,在系統(tǒng)抗性(SAR)中發(fā)揮負調節(jié)作用;AtNPR5和AtNPR6在亞組Ⅲ中,蛋白C端不含NPR1_like_C結構域,主要在擬南芥葉片和花生長發(fā)育方面發(fā)揮重要作用。近年來,隨著高通量測序技術的發(fā)展和應用,在鱷梨、油菜、棉花和小麥等植物中也進行了like基因家族的鑒定。

    芫荽(L.),傘形科芫荽屬草本植物,別名胡荽、香荽,具有強烈的特殊香氣,是常見的調味蔬菜,別稱香菜。芫荽原產于歐洲地中海地區(qū),漢代時引入我國,我國大部分省份均有栽培。芫荽富含維生素C、胡蘿卜素、維生素B和B。芫荽中維生素C的含量很高,攝入7~10 g/d的芫荽葉子就可以滿足人體所需。芫荽葉片中含有的胡蘿卜素濃度比番茄、豆類和黃瓜高10倍以上。芫荽同時還具有藥用價值,根、莖、葉及種子均可入藥,在中東和歐洲被用于預防失眠、焦慮,治療糖尿病,輔助治療風濕病等,芫荽還具有抑菌、抗氧化、抗炎及抗糖尿病功效,對緩解某些食物中毒也有一定的作用。此外,芫荽的莖、葉、根和果實全株都可用于提取精油,芫荽精油可應用于食品、化工以及醫(yī)藥等行業(yè)。

    本試驗依據(jù)已發(fā)表的芫荽全基因組測序數(shù)據(jù),對芫荽like基因家族成員進行鑒定和分析,以期為進一步開展對傘形科其他植物該基因家族的功能和進化研究提供參考,同時為基因工程手段調控傘形科蔬菜生長發(fā)育和改良抗逆性狀奠定基礎。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    本試驗的研究對象是芫荽,芫荽的全基因組數(shù)據(jù)文件來源于Coriander Genome Database(http://cgdb.bio2db.com/);擬南芥基因組數(shù)據(jù)文件來源于TAIR 10(https://www.arabidopsis.org/);NPR1-like基因蛋白序列下載自NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/),擬南芥AtNPR1~6的登錄號分別是At1g64280、At4g26120、At5g45110、At4g19660、At2g41370、At3g57130,水稻()OsNPR1~3和OsNPR5的登錄號分別是ABE11614、ABE11615、ABE11618、ABE11622,大麥()HvNPR1的登錄號是CAJ19095,二穗短柄草()BdNPR1的登錄號是XP_003564857,玉米()ZmNPR1的登錄號是NP_001354806,小麥()wNPR1的登錄號是AGH18701,香蕉()MNPR1A/B的登錄號分別是ABI93182、ABL63913,唐菖蒲()GhNPR1的登錄號是AIM54370,百合()LhSorNPR1的登錄號是APG55777,芥菜()BjNPR1的登錄號是ABC94642,桑樹()MuNPR1/4的登錄號分別是AGI03909、AGL61506,煙草()NtNPR1的登錄號是AAM62410,棉花()GhNPR1的登錄號是ABV68572,大豆()GmNPR1-1/1-2的登錄號分別是ACJ45013、ACJ45015,海棠()MpNPR1的登錄號是ACC77697,葡萄()VvNPR1.1/1.2的登錄號是XP_002281475、XP_003633057,番茄()LeNPR1的登錄號是APY24056,可可樹()TcNPR1/3的登錄號分別是ADI24348、AGC39275,番木瓜()CpNPR1的登錄號是AAS55117,甘薯()IbNPR1的登錄號是ABM64782,楊樹()PtNPR1.1的登錄號是AEY99652,沙梨()PpNPR1-1的登錄號是ABK62792,鱷梨()PaNPR1~5的登錄號分別是AKH61407、AKH61408、AKH61409、AKH61410、AKH61411。

    1.2 芫荽NPR1-like家族的鑒定

    鑒定芫荽基因組中l(wèi)ike基因家族成員采用BLASTp和HMMER相結合的方式進行搜索。首先,從Pfam(http://pfam.xfam.org/)數(shù)據(jù)庫中下載基因保守結構域模型PF12313,利用HMMsearch3.1(http://hmmer.org/)程序對芫荽蛋白質數(shù)據(jù)進行搜索,獲得候選相似蛋白序列;利用TBtools軟件,以AtNPR1~6蛋白序列為查詢序列對芫荽全基因組蛋白數(shù)據(jù)進行本地BLASTp搜索(-value設置為1×10),獲得候選蛋白序列。將2種檢索方法獲得的蛋白序列合并,將去除冗余的序列提交到SMART(http://smart.embl-heidelberg.de)和PROSITE(http://us.expasy.org/prosite)數(shù)據(jù)庫中進行蛋白結構分析,剔除不含完整的N端BTB/POZ結構域和中間區(qū)域ANK錨蛋白重復結構域的序列,剩余序列即為芫荽基因組中的like基因家族成員。

    1.3 生物信息學分析

    利用在線工具ExPASy(http://web.expasy.org/compute_pi/)預測芫荽NPR1-like蛋白的等電點和分子量,利用TBtools軟件分析基因結構(包含內含子和UTR),利用MEME在線工具(http://meme.nbcr.net/meme/)分析保守基序。利用ClustalX進行多重序列比對。利用Tbtools工具,從芫荽基因組中提取like基因起始密碼子ATG上游2 000 bp的核酸序列,用在線分析工具PlantCare(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/)對序列的順式作用元件進行分析預測,預測結果用TBtools進行展示。

    1.4 基因家族系統(tǒng)進化樹構建

    利用MEGA 7.0軟件中的Clustal W程序對芫荽和其他物種的NPR1-like蛋白序列進行多重序列比對(空位開放罰分設置為10,空位延伸罰分設置為0.2),利用比對結果構建進化樹。進化樹構建選用鄰接法(neighbor joining,NJ),檢驗方法選用步長檢驗法(bootstrp method),檢驗次數(shù)設置為 1 000 次,計算模型選用距離模型(p-distance),空位處理模式選用成對刪除(pairwise deletion)。

    1.5 表達模式分析

    從CGDB(http://cgdb.bio2db.com/)下載芫荽like家族成員基因在芫荽根、莖、葉、花和播種后30、60、90 d的表達數(shù)據(jù),將FPKM值取對數(shù)值后利用TBtools軟件繪制熱圖。

    2 結果與分析

    2.1 芫荽NPR1-like基因家族鑒定與分析

    將BLASTp和HMMER搜索的結果去除冗余和不含保守結構的序列,最終在芫荽基因組中鑒定得到7個like基因家族成員,參考擬南芥同源基因,根據(jù)蛋白序列相似性及系統(tǒng)進化關系分別將這7個芫荽like基因命名為~?!岸ㄎ辉谲据吹腃hr03、Chr04、Chr06、Chr08和Chr09染色體上,而和的位置未知。這7個like基因的開放閱讀框長度為1 089~1 788 bp,編碼的氨基酸序列長度為362~595個,相應的蛋白分子量為39.52~66.24 ku,等電點在5.26~8.56之間(表1)。

    表1 芫荽NPR1-like家族基因信息

    2.2 多重序列比對及系統(tǒng)發(fā)育分析

    為研究like基因家族同源基因之間的親緣關系和進化模式,利用7個芫荽、6個擬南芥、4個、5個鱷梨及已從其他物種中通過克隆得到的like基因蛋白序列構建了系統(tǒng)進化樹。由圖1可知,芫荽like基因家族明顯地分成3個進化分支,分別是Clade Ⅰ、Clade Ⅱ和Clade Ⅲ。其中,Clade I(AtNPR1/2亞家族)中包含、、、、等,Clade Ⅱ(AtNPR3/4亞家族)中包含、、和等,Clade Ⅲ(AtNPR5/6亞家族)中包含、和。系統(tǒng)發(fā)育分組可為理解like基因家族的功能多樣性提供參考。

    結合多重序列比對(圖2)和SMART在線分析結果發(fā)現(xiàn),7個都存在BTB/POZ和錨蛋白重復結構域,這2個結構域在芫荽和擬南芥中較為保守,并且在每個亞組的組內成員之間保守程度更高。此外,Clade Ⅰ和Clade Ⅱ亞家族的~的C端含有NPR1_like_C-terminal結構域,而~不含該結構域,該結構域包含核定位信號NLS。序列比較分析結果顯示,在至的蛋白序列中,等位基因突變體的氨基酸序列突變位點(His334Tyr)、(Cys150Tyr)和(His300Tyr)高度保守;而(Arg432Lys)突變位點只在Clade Ⅰ和Clade Ⅱ亞家族的~中保守。此外,在寡聚物-單體相互轉變過程中發(fā)揮至關重要的作用的3個半胱氨酸殘基(Cys82、Cys155和Cys216)在7個CsNPRs中完全保守。

    2.3 芫荽NPR1-like家族成員基因結構分析

    利用在線分析工具MEME對芫荽和擬南芥NPR1-like蛋白序列進行保守結構域分析,在預測出的10個保守基序中,motif1、motif2和motif3為BTB/POZ結構域的保守基序,motif5和motif6為Ankyrinrepeats結構域保守基序,motif8、motif9和motif10為NPR1_like_C保守基序。在CladeⅠ和Clade Ⅱ中,除CsNPR3只含有motif2~8之外,其余芫荽和擬南芥的NPRs序列中都含有motif1~10;而在CladeⅢ中,因C端缺少NPR_Like_C結構域,除CsNPR7只含有motif1~5、缺少motif6~10之外,其余芫荽和擬南芥的NPRs序列中只含有motif1~7,缺少motif8~10(圖3-A、圖3-B)。

    根據(jù)基因結構分析發(fā)現(xiàn),在Clade I和Clade Ⅱ中,除外,芫荽和擬南芥-like家族基因序列都含有4個外顯子和3個內含子,且芫荽的內含子長度明顯大于擬南芥;在Clade Ⅲ中,所有成員序列中都含有2個外顯子和1個內含子,且外顯子和內含子的大小基本相同(圖3-C)。

    由此可見,-like家族成員3個亞族在結構域和基因結構上都具有相似的特點,說明它們在進化上存在相當?shù)谋J匦浴?/p>

    2.4 芫荽NPR1-like基因啟動子元件分析

    通過分析芫荽like基因上游2 000 bp的啟動子區(qū)域進行順式作用元件分析發(fā)現(xiàn),所有l(wèi)ike基因都含有基本的CAAT-box和TATA-box保守元件。7個啟動子區(qū)域還鑒定出TCT-motif、TCCC-motif、Sp1、GT1-motif、GA-motif等光調控元件,啟動子區(qū)域含有的數(shù)量最多,達到22個(圖4)。啟動子區(qū)域還鑒定出茉莉酸甲酯響應元件TGACG-motif和 CGTCA-motif、水楊酸響應元件as-1和TCA、脫落酸響應元件ABRE、赤霉素響應元件P-box、生長素響應元件TGA和乙烯響應元件ERE等植物激素響應元件,其中在7個啟動子區(qū)域都鑒定到水楊酸響應元件,數(shù)量在1~5個不等,其余激素響應元件并未出現(xiàn)在所有7個中,、啟動子區(qū)域中分別含有8、4個茉莉酸甲酯響應元件,和啟動子區(qū)域都含有6個乙烯響應元件,啟動子區(qū)域含有4個脫落酸響應元件。此外,啟動子區(qū)域還鑒定出防御和脅迫響應元件TC-rich和W-box、低溫響應元件LTR、脅迫響應元件STRE、MYBr和MYCr、干旱響應元件MBS、脫水響應元件DRE、厭氧誘導元件ARE、機械損傷響應元件WUN等逆境脅迫相關的響應元件,且總體數(shù)量較多。此外,在個別中還鑒定出數(shù)量不多的植物生長發(fā)育調控相關的分生組織表達與激活元件CAT-box和玉米醇溶蛋白代謝調控元件O2-site。

    以上分析結果表明,芫荽like基因家族成員可能在植物激素響應、逆境脅迫和植物生長發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。

    2.5 芫荽NPR1-like基因表達模式分析

    為探討基因在芫荽生長發(fā)育過程中的作用,對芫荽根、莖、葉、花以及生長30、60、90 d的表達模式進行分析。結果表明,~在各組織中都有表達,其中和在4種組織中的表達量均較高;和在根和葉中表達量較高,莖中其次,花中的表達量最低;和在根中的表達量較高,其余組織中表達量很低;在4種組織中的表達量都很低(圖5-B)。在芫荽生長過程中,和的表達量最高,其次為和,而和的表達量很低,基本沒有表達。、、在3個生長時期的表達量呈現(xiàn)出輕微的先上升后下降趨勢,在生長后60 d的表達量最高;而的表達量持續(xù)上升,在生長后90 d的表達量最高(圖5-A)。上述結果可能暗示基因家族成員在調控芫荽不同組織和不同時期發(fā)育過程中發(fā)揮了不同作用。

    3 討論與結論

    like基因家族已經在多種單子葉和雙子葉植物中被鑒定和研究,研究方向多集中在和參與植物應對生物及非生物脅迫的抗性響應上,它們被認為是SA受體,共同調控植物免疫。正向調節(jié)SA介導的植物免疫,而的主要功能是作為植物防御的負向調節(jié)因子?;蚪M信息不足和落后的生物技術極大限制園藝物種中R基因的發(fā)現(xiàn),而關鍵同源物的鑒定和應用已被證明是產生抗病轉基因植物的有效方法,在園藝作物如番茄、胡蘿卜和柑橘中異源表達,顯示出具有增強的廣譜疾病和害蟲抗性的轉基因植物的潛力。因此,對芫荽-like基因家族的鑒定和分析將有助于傘形科科和其他植物物種的抗病育種。

    本研究在最新發(fā)表的芫荽高質量基因組中搜索like基因家族成員,最終鑒定到7個芫荽-like成員,這個數(shù)量與擬南芥(6個)和鱷梨(5個)等植物中l(wèi)ike基因家族成員的數(shù)量類似。進化和結構分析都將7個分為明顯3組,該聚類方式與擬南芥like基因家族成員的聚類方式相同,且在2個介導蛋白-蛋白相互作用的必需結構域,即BTB/POZ蛋白的N末端和錨蛋白重復結構域的中心區(qū)域,在芫荽和擬南芥中都很保守,并且在內含子和外顯子數(shù)量和結構方面具有極大的相似性。

    在通常狀態(tài)下,以分子間二硫鍵形成多聚體的形式存在于細胞質中。當受到生物和非生物脅迫時,SA等誘導基因表達并促進的構象變化,以單體形式轉移至細胞核中,單體在細胞核中積累并激活防御基因表達。單體間二硫鍵的形成在Cys82和Cys150、Cys155、Cys 160、Cys216這幾個保守的半胱氨酸殘基之間形成,~的保守結構域中的這些位點與擬南芥相比完全保守。NLS基序與AtNPR1/2的核定位有關,它在的部分堿性氨基酸(在圖5中用圓點標記)中高度保守。此外,、和中的基序也存在于~中,其與對SA的敏感性十分重要。綜上,聚類在同一進化分枝的擬南芥和芫荽-like家族成員具有相似的基因結構、保守結構域類型和位置排列,并且在關鍵氨基酸位點和功能基序上高度保守,說明屬于同一分支的芫荽NPR蛋白可能以相似的方式展現(xiàn)生物學功能。

    存在于基因啟動子或上游區(qū)域的獨特順式元件是轉錄因子的結合位點,也是基因調控的關鍵因素。越來越多的證據(jù)表明,病原體或水楊酸誘導基因的啟動子包含更多的防御相關順式元件,~的順式元件中防御相關順式元件的富集程度非常高(圖4)。其中,7個基因的啟動子區(qū)域均含有2個與SA信號途徑相關的元件,即CAAT-box和TATA-box。除了,其余6個基因啟動子區(qū)域都含有受水楊酸間接調控的順式作用元件as-1(activation sequence-1)。此前研究表明,啟動子區(qū)域含有W-box(TTGACC)序列,其為轉錄因子特異性識別的DNA結合位點。同樣,W-box元件也存在于、和基因的啟動子區(qū)域中,這預示著當芫荽受到生物逆境脅迫時,可能具有與擬南芥基因類似的自我誘導調控機制。

    本研究對芫荽-like基因家族成員進行生物信息學和表達分析,不僅為更好地研究芫荽生長發(fā)育和抗病機制提供一定的參考,同時也為傘形科園藝作物的抗病改良提供重要的基因資源。

    猜你喜歡
    登錄號芫荽擬南芥
    擬南芥:活得粗糙,才讓我有了上太空的資格
    “資深配角”芫荽
    基于DNA條形碼進行金花茶組種間鑒別
    種子(2021年2期)2021-03-31 09:23:32
    芫荽種植技術
    電腦迷(2020年11期)2020-12-16 17:45:40
    春日芫荽防感冒
    含氟新農藥的研究進展
    浙江化工(2019年5期)2019-06-04 08:33:34
    小反芻獸疫病毒F基因的序列分析
    芫荽果化學成分的研究
    中成藥(2018年7期)2018-08-04 06:04:08
    尿黑酸對擬南芥酪氨酸降解缺陷突變體sscd1的影響
    兩種LED光源作為擬南芥生長光源的應用探究
    亚洲专区国产一区二区| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久精品成人免费网站| 午夜福利18| 很黄的视频免费| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久久久久久久免费视频了| 91av网站免费观看| 国产野战对白在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 午夜免费激情av| 国产野战对白在线观看| 国产精品电影一区二区三区| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品国产美女av久久久久小说| 欧美激情久久久久久爽电影| 99久久精品国产亚洲精品| 男女视频在线观看网站免费 | 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美又色又爽又黄视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 欧美zozozo另类| 长腿黑丝高跟| 美女免费视频网站| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 啦啦啦韩国在线观看视频| 操出白浆在线播放| 亚洲七黄色美女视频| 久久精品人妻少妇| 亚洲男人的天堂狠狠| 免费搜索国产男女视频| 精品人妻1区二区| 久久精品国产综合久久久| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久久久久国产a免费观看| 欧美成人午夜精品| 一本精品99久久精品77| 久久精品成人免费网站| 午夜视频精品福利| 欧美一级a爱片免费观看看 | 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 99riav亚洲国产免费| 变态另类丝袜制服| 悠悠久久av| 99热这里只有是精品50| 麻豆av在线久日| 色在线成人网| 婷婷亚洲欧美| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲美女视频黄频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 在线播放国产精品三级| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产不卡一卡二| 亚洲精品在线美女| 国产av一区在线观看免费| 在线观看免费午夜福利视频| 天天添夜夜摸| 美女免费视频网站| 国产精品1区2区在线观看.| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲成人国产一区在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产午夜精品论理片| 亚洲人成伊人成综合网2020| 人成视频在线观看免费观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美国产日韩亚洲一区| 久久精品91无色码中文字幕| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 午夜激情av网站| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲七黄色美女视频| 国产男靠女视频免费网站| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| e午夜精品久久久久久久| or卡值多少钱| 精品久久久久久,| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产成人啪精品午夜网站| 啪啪无遮挡十八禁网站| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 精品一区二区三区av网在线观看| 一本一本综合久久| 国产午夜精品久久久久久| 久久久久久九九精品二区国产 | 一本精品99久久精品77| 久久久久久久午夜电影| 国产三级中文精品| 香蕉久久夜色| 麻豆成人午夜福利视频| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲午夜理论影院| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲国产精品成人综合色| 久久天堂一区二区三区四区| 色老头精品视频在线观看| 最新美女视频免费是黄的| 舔av片在线| 午夜免费成人在线视频| 国产精品野战在线观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 天天一区二区日本电影三级| 国内精品久久久久精免费| 免费在线观看日本一区| 1024视频免费在线观看| 嫩草影院精品99| 国产精品久久久人人做人人爽| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 一级作爱视频免费观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产在线观看jvid| 亚洲精品一区av在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 午夜视频精品福利| 激情在线观看视频在线高清| 国产伦在线观看视频一区| 国产1区2区3区精品| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 少妇的丰满在线观看| 国产视频内射| 亚洲人与动物交配视频| 精品无人区乱码1区二区| 久久这里只有精品19| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲欧美日韩高清专用| 欧美成狂野欧美在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲九九香蕉| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 视频区欧美日本亚洲| 国产一区二区激情短视频| 天堂√8在线中文| 亚洲av第一区精品v没综合| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 欧美国产日韩亚洲一区| www国产在线视频色| aaaaa片日本免费| 最近在线观看免费完整版| 成人手机av| 黄片大片在线免费观看| 日韩大码丰满熟妇| 日韩高清综合在线| 午夜免费激情av| a在线观看视频网站| 日韩大码丰满熟妇| 高清毛片免费观看视频网站| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 在线观看午夜福利视频| 中亚洲国语对白在线视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲av电影在线进入| av在线播放免费不卡| 日韩免费av在线播放| 亚洲全国av大片| 成人国产一区最新在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 好男人电影高清在线观看| 午夜福利在线在线| 亚洲专区中文字幕在线| 999精品在线视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 成人av一区二区三区在线看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 欧美三级亚洲精品| 色哟哟哟哟哟哟| 国产爱豆传媒在线观看 | 日本 欧美在线| 免费搜索国产男女视频| 日本 欧美在线| 中国美女看黄片| 香蕉国产在线看| 亚洲熟妇熟女久久| 麻豆国产97在线/欧美 | 香蕉国产在线看| 最新在线观看一区二区三区| 国产片内射在线| 精品久久久久久久久久免费视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 久久久久久国产a免费观看| АⅤ资源中文在线天堂| 18禁美女被吸乳视频| 一本久久中文字幕| 久99久视频精品免费| 日韩有码中文字幕| 可以免费在线观看a视频的电影网站| av福利片在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 欧美国产日韩亚洲一区| 精品久久久久久久久久免费视频| 脱女人内裤的视频| 欧美高清成人免费视频www| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 窝窝影院91人妻| 午夜日韩欧美国产| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产精品国产高清国产av| 国语自产精品视频在线第100页| 全区人妻精品视频| 两个人的视频大全免费| 少妇人妻一区二区三区视频| 五月玫瑰六月丁香| 中文字幕熟女人妻在线| 久久亚洲真实| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产精品亚洲av一区麻豆| www国产在线视频色| 国产区一区二久久| 成人av在线播放网站| 成人三级做爰电影| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 一进一出抽搐gif免费好疼| 村上凉子中文字幕在线| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产高清视频在线观看网站| 一二三四社区在线视频社区8| 中文字幕熟女人妻在线| 国产精品久久视频播放| 国产精品九九99| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 久久久水蜜桃国产精品网| 午夜福利免费观看在线| 一夜夜www| 午夜免费激情av| 午夜激情福利司机影院| 成年女人毛片免费观看观看9| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久久久久久久中文| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美性长视频在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 大型黄色视频在线免费观看| 午夜福利欧美成人| avwww免费| www.999成人在线观看| 露出奶头的视频| 久久久久久久精品吃奶| 国产成人欧美在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| √禁漫天堂资源中文www| 欧美日韩国产亚洲二区| 精品不卡国产一区二区三区| 97碰自拍视频| 丰满的人妻完整版| 一个人免费在线观看电影 | 1024视频免费在线观看| 午夜激情福利司机影院| av片东京热男人的天堂| 黄色视频,在线免费观看| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲av成人av| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲人成电影免费在线| 可以在线观看的亚洲视频| 国产精品 欧美亚洲| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 久久久久久久久中文| 成年版毛片免费区| 亚洲一区中文字幕在线| 99国产精品99久久久久| 超碰成人久久| 9191精品国产免费久久| 国产精品综合久久久久久久免费| 最好的美女福利视频网| 国产精品一及| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲欧美精品综合久久99| 久久精品国产综合久久久| av福利片在线观看| 国产一区在线观看成人免费| 黄色视频不卡| 午夜免费激情av| 国产亚洲欧美98| 在线国产一区二区在线| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 成年免费大片在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 久久精品国产综合久久久| 老熟妇仑乱视频hdxx| 九九热线精品视视频播放| 成年免费大片在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产精品久久久久久久电影 | 亚洲激情在线av| 美女黄网站色视频| av视频在线观看入口| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久久久精品国产欧美久久久| 黑人操中国人逼视频| 亚洲成人久久性| 91麻豆精品激情在线观看国产| 免费观看人在逋| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 在线观看免费视频日本深夜| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲国产欧美人成| 最近最新免费中文字幕在线| 国产成人av教育| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| tocl精华| www.精华液| 又黄又粗又硬又大视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲性夜色夜夜综合| 日韩有码中文字幕| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产精品免费视频内射| 国产又色又爽无遮挡免费看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 久久香蕉激情| 国产1区2区3区精品| 欧美+亚洲+日韩+国产| 哪里可以看免费的av片| 后天国语完整版免费观看| 日韩欧美国产在线观看| 一级黄色大片毛片| 婷婷六月久久综合丁香| 91国产中文字幕| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲专区国产一区二区| 啦啦啦免费观看视频1| 日本a在线网址| 国内精品久久久久久久电影| 中文字幕久久专区| 999精品在线视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲av第一区精品v没综合| 夜夜夜夜夜久久久久| 99久久99久久久精品蜜桃| 身体一侧抽搐| 亚洲男人天堂网一区| 1024视频免费在线观看| www.精华液| 精品不卡国产一区二区三区| 草草在线视频免费看| 日韩有码中文字幕| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 欧美黑人欧美精品刺激| 丝袜人妻中文字幕| 午夜久久久久精精品| 午夜激情av网站| 欧美在线黄色| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 在线观看免费午夜福利视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲片人在线观看| 天天添夜夜摸| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产亚洲精品av在线| 成人av一区二区三区在线看| 欧美黑人精品巨大| 十八禁人妻一区二区| 国产片内射在线| 一区二区三区激情视频| 在线免费观看的www视频| 久久九九热精品免费| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 好男人电影高清在线观看| 床上黄色一级片| 久久久国产成人免费| 午夜日韩欧美国产| 亚洲精品一区av在线观看| 精品免费久久久久久久清纯| 国产精品久久电影中文字幕| 在线观看66精品国产| 色噜噜av男人的天堂激情| 俺也久久电影网| 日日爽夜夜爽网站| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久人妻福利社区极品人妻图片| www.熟女人妻精品国产| 国产亚洲精品第一综合不卡| 日日干狠狠操夜夜爽| 黄色丝袜av网址大全| 色哟哟哟哟哟哟| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 人妻久久中文字幕网| 国产视频一区二区在线看| 国产成年人精品一区二区| 久久久国产成人免费| 亚洲午夜理论影院| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲黑人精品在线| 中文在线观看免费www的网站 | 中文字幕熟女人妻在线| 欧美久久黑人一区二区| 波多野结衣高清无吗| 人成视频在线观看免费观看| 91麻豆av在线| 亚洲熟女毛片儿| 极品教师在线免费播放| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国语自产精品视频在线第100页| 美女黄网站色视频| 国产成人aa在线观看| 欧美性长视频在线观看| 亚洲美女视频黄频| 欧美色视频一区免费| 一级毛片高清免费大全| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 中国美女看黄片| 午夜日韩欧美国产| 国内揄拍国产精品人妻在线| 毛片女人毛片| 9191精品国产免费久久| 国产主播在线观看一区二区| 成年人黄色毛片网站| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲片人在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 9191精品国产免费久久| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美乱妇无乱码| 国产免费男女视频| 欧美午夜高清在线| 欧美日韩福利视频一区二区| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美丝袜亚洲另类 | 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美久久黑人一区二区| 村上凉子中文字幕在线| a在线观看视频网站| 9191精品国产免费久久| 国产高清激情床上av| 无人区码免费观看不卡| 亚洲av五月六月丁香网| 国产黄a三级三级三级人| av片东京热男人的天堂| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲国产欧美人成| 日本三级黄在线观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 十八禁网站免费在线| 亚洲avbb在线观看| 国产男靠女视频免费网站| 黄片大片在线免费观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 丰满人妻一区二区三区视频av | 亚洲国产精品合色在线| 国产三级黄色录像| 国产成人啪精品午夜网站| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 午夜免费激情av| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 成人三级做爰电影| 国产爱豆传媒在线观看 | 99国产精品一区二区三区| 十八禁网站免费在线| 成人亚洲精品av一区二区| 97碰自拍视频| 国产精华一区二区三区| 少妇熟女aⅴ在线视频| 99在线人妻在线中文字幕| √禁漫天堂资源中文www| 男人舔奶头视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲男人的天堂狠狠| 人妻夜夜爽99麻豆av| cao死你这个sao货| 人人妻人人看人人澡| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美极品一区二区三区四区| 成人av一区二区三区在线看| 人成视频在线观看免费观看| netflix在线观看网站| 18禁国产床啪视频网站| 精品欧美一区二区三区在线| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲成av人片免费观看| 国产黄片美女视频| 我要搜黄色片| 成人欧美大片| 国产精品,欧美在线| 欧美中文日本在线观看视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产精品 国内视频| 亚洲午夜理论影院| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 日本在线视频免费播放| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产欧美日韩一区二区精品| 天堂动漫精品| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 精品久久久久久,| 91国产中文字幕| 国产精品98久久久久久宅男小说| 久久中文字幕人妻熟女| 久久久精品大字幕| 黄片小视频在线播放| 老司机午夜福利在线观看视频| 成人av一区二区三区在线看| 久久九九热精品免费| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 日日夜夜操网爽| 在线免费观看的www视频| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲国产精品sss在线观看| 成年免费大片在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看 | 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 美女黄网站色视频| svipshipincom国产片| 午夜福利在线在线| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久中文字幕人妻熟女| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产成年人精品一区二区| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品久久久久久精品电影| 91麻豆av在线| 在线视频色国产色| 夜夜夜夜夜久久久久| 婷婷精品国产亚洲av在线| 女警被强在线播放| 欧美+亚洲+日韩+国产| 在线观看日韩欧美| 色哟哟哟哟哟哟| 又大又爽又粗| 国产亚洲av高清不卡| 夜夜爽天天搞| 无限看片的www在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品久久久久久久久久免费视频| 婷婷六月久久综合丁香| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲片人在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 精品久久久久久,| 免费在线观看亚洲国产| av中文乱码字幕在线| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 好男人电影高清在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久九九热精品免费| 久久精品91蜜桃| 青草久久国产| 全区人妻精品视频| 后天国语完整版免费观看| 两个人的视频大全免费| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 999久久久精品免费观看国产| 男人的好看免费观看在线视频 | or卡值多少钱| 亚洲av中文字字幕乱码综合| or卡值多少钱| 国产亚洲精品一区二区www| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| av视频在线观看入口| 岛国在线观看网站| 两个人视频免费观看高清| 婷婷亚洲欧美| 日韩av在线大香蕉| 国产乱人伦免费视频| 欧美黑人巨大hd| 国语自产精品视频在线第100页| 人成视频在线观看免费观看| 婷婷亚洲欧美| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲av五月六月丁香网| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美不卡视频在线免费观看 | 麻豆一二三区av精品| 色综合站精品国产| 人人妻人人看人人澡| 一个人免费在线观看的高清视频| 成人精品一区二区免费| 91成年电影在线观看| 午夜日韩欧美国产| or卡值多少钱| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲精华国产精华精| 国产一区二区三区视频了| 三级毛片av免费| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产激情久久老熟女| 亚洲,欧美精品.| 亚洲 欧美一区二区三区| 中文字幕熟女人妻在线| 天天一区二区日本电影三级| 国模一区二区三区四区视频 | 少妇粗大呻吟视频| 久久久久性生活片| 国产主播在线观看一区二区| 国产又黄又爽又无遮挡在线|