不同品系中華絨螯蟹土池生態(tài)育苗效果比較

殷樂 姜曉東,2 王海寧 陳瑜 吳旭干,2,5

(1 上海海洋大學(xué)，水產(chǎn)科學(xué)國家級實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，上海 201306；2 上海海洋大學(xué)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201306；3 浙江澳凌水產(chǎn)種業(yè)科技有限公司，浙江長興 313106；4 陳瑜水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，江蘇射陽 224300；5 上海海洋大學(xué)，水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種中心上海市協(xié)同創(chuàng)新中心，上海 201306)

中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)隸屬于方蟹科(Grapsidae)、絨螯蟹屬(Eriocheir)，又名河蟹、大閘蟹[1]。河蟹因富含礦物質(zhì)元素、脂肪酸、氨基酸、核苷酸和膽固醇等多類營養(yǎng)物質(zhì)而深受長江流域居民喜愛，兼具營養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[2]。河蟹的養(yǎng)殖周期一般包括3個(gè)階段，即蟹苗(大眼幼體)培育階段、蟹種(扣蟹)培育階段及成蟹養(yǎng)殖階段，其中蟹苗培育階段的精心管理是奠定河蟹養(yǎng)殖成功的重要基礎(chǔ)[3]。我國早期河蟹養(yǎng)殖主要依賴于自然水域的野生蟹苗，但由于過度捕撈及環(huán)境污染等原因，野生蟹苗資源日漸枯竭，制約了河蟹養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展[4]。20世紀(jì)80年代河蟹人工育苗技術(shù)的攻克使得河蟹工廠化育苗興起，河蟹養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展[5]。隨著河蟹育苗技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，20世紀(jì)末，土池生態(tài)育苗逐漸取代工廠化育苗，在遼寧、江蘇、浙江等沿海地區(qū)大規(guī)模發(fā)展。由于河蟹土池生態(tài)育苗具有用藥少、污染小，產(chǎn)量高等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于沿海地區(qū)的蟹苗生產(chǎn)[6]。

群體選育是甲殼類動(dòng)物種質(zhì)改良的重要方法[7]。目前我國已選育出“光合1號”(GS-01-004-2011)、“長江1號”(GS-01-003-2011)、“長江2號”(GS-01-004-2013)、“江海21”(GS-02-003-2015)以及“諾亞1號”(GS-01-005-2016)等5個(gè)河蟹新品種。針對河蟹上市時(shí)間較為集中的問題，本課題組自2010年起就開始進(jìn)行河蟹二齡早熟品系(3母)和二齡晚熟品系(3.5母)的選育工作，目前已選育至G5成蟹階段[8]。金壇長蕩湖是中國河蟹養(yǎng)殖的發(fā)源地之一，但同樣存在河蟹苗種來源復(fù)雜及養(yǎng)殖效果不穩(wěn)定等問題。為解決金壇長蕩湖地區(qū)沒有本土河蟹選育品種的問題，金壇區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局和上海海洋大學(xué)自2017年開始進(jìn)行河蟹新品種“長蕩湖1號”A系(雌體≥200 g，雄體≥310 g)和“長蕩湖1號”B系(雌體≥250 g，雄體≥360 g)的選育，目前已選育至G2成蟹階段[9-10]。此外，本課題組還與浙江澳凌水產(chǎn)苗種有限公司合作進(jìn)行河蟹超大規(guī)格品系(雌體≥300 g，雄體≥400 g)的育苗探索，為超大規(guī)格河蟹選育提供基礎(chǔ)資料。為評估各品系河蟹的繁殖性能和育苗效果，本研究在普通生產(chǎn)條件下評估了二齡早熟品系、“長蕩湖1號”A系、“長蕩湖1號”B系和超大規(guī)格品系的育苗效果，為河蟹遺傳選育和優(yōu)良品系規(guī)?；庇峁﹨⒖肌?/p>

1 材料和方法

1.1 親本管理

二齡早熟品系親本于2020年11月收集于本課題組崇明基地，“長蕩湖1號”A系、“長蕩湖1號”B系及超大規(guī)格品系親本于相同時(shí)間段收集于江蘇金壇。親蟹均為肥滿度高、體格健壯、無附肢損傷且無傷病的長江水系2齡成熟河蟹。二齡早熟品系、“長蕩湖1號”A系、“長蕩湖1號”B系和超大規(guī)格品系的母本規(guī)格分別大于150、200、250和300 g。各品系親本的平均體質(zhì)量和數(shù)量詳見表1。

表1 各品系河蟹親本的平均體質(zhì)量及數(shù)量

將挑選的河蟹親本運(yùn)至鹽城射陽河蟹遺傳育種基地后，按雌雄數(shù)量比3∶1進(jìn)行配對養(yǎng)殖，其中二齡早熟品系、“長蕩湖1號”B系及超大規(guī)格品系親本的配對養(yǎng)殖池塘面積均為667 m2，“長蕩湖1號”A系親本的配對養(yǎng)殖池塘面積為1 000 m2。為保證河蟹親本的基本營養(yǎng)需求，親本入池2 d后開始投喂冰鮮雜魚。為防止水質(zhì)敗壞，冰鮮雜魚不宜投喂過多，日投喂量一般不超過親本體質(zhì)量的5%。投喂時(shí)將冰鮮雜魚切成小塊，于傍晚時(shí)投喂，以便河蟹夜間覓食。每個(gè)親本交配池塘均設(shè)有料臺，定點(diǎn)投餌，次日根據(jù)殘餌情況適當(dāng)調(diào)整投喂量。2021年1月中旬，拖網(wǎng)檢查雌蟹的抱卵情況，當(dāng)雌蟹抱卵率達(dá)到90%后及時(shí)剔除雄蟹，避免其干擾雌蟹抱卵。越冬期間保持池塘水位在1.5 m以上，確保水質(zhì)穩(wěn)定及水溫正常。

次年3月中旬至4月初，每日觀察抱卵蟹的胚胎發(fā)育情況，發(fā)育至眼點(diǎn)時(shí)開始準(zhǔn)備育苗池。先用茶籽餅清除野雜魚，再用漂白粉對育苗池進(jìn)行消毒，無余氯殘留后對育苗池適當(dāng)培肥，保證蟹苗在溞Ⅰ階段有充足的開口餌料。當(dāng)抱卵蟹胚胎心跳次數(shù)約為120次/min時(shí)，將其從越冬池塘捕出，放入質(zhì)量濃度15 mg/L的高錳酸鉀溶液中浸泡20 min，藥浴結(jié)束后即可掛籠產(chǎn)卵。根據(jù)雌蟹規(guī)格確定每個(gè)網(wǎng)籠抱卵蟹的數(shù)量，一般每個(gè)網(wǎng)籠放25～40只。各品系育苗池的編號、面積及掛籠產(chǎn)卵蟹的數(shù)量見表2。

表2 各品系河蟹育苗池塘面積及產(chǎn)卵蟹數(shù)量

1.2 幼體管理

溞Ⅰ孵出后即投喂干酵母及蝦片。干酵母及蝦片經(jīng)過孔徑75 μm的篩絹過濾后全池均勻潑灑，投喂量約為0.15 g/m2。待產(chǎn)卵蟹全部產(chǎn)空后開始投喂輪蟲，根據(jù)幼體密度及變態(tài)時(shí)期調(diào)整輪蟲的投喂量，每天上、下午各投1次，投喂點(diǎn)選擇在池塘上風(fēng)口處。溞Ⅲ初期，為強(qiáng)化營養(yǎng)，可逐漸補(bǔ)充投喂一定比例的豐年蟲。由于豐年蟲價(jià)格昂貴、孵化條件要求高，因此仍以投喂輪蟲為主。各變態(tài)時(shí)期豐年蟲與輪蟲的投喂比例情況見表3。

表3 河蟹幼體各階段豐年蟲和輪蟲的投喂比例

每天投餌前，在育苗池塘下風(fēng)口處采集水樣，觀察幼體密度和殘餌情況，以便調(diào)整當(dāng)日的投喂量。如餌料投喂過量，會產(chǎn)生大量的枝角類、橈足類，這些浮游動(dòng)物會與蟹苗爭奪水體中的溶解氧以及生存空間。整個(gè)育苗期間要保證水體的肥度，一般通過加注小球藻水或增施利于藻類生長的肥料來進(jìn)行調(diào)節(jié)。當(dāng)蟹苗變態(tài)為大眼幼體后，可適當(dāng)減少輪蟲的投喂量，而增加豐年蟲的投喂量。當(dāng)蟹苗全部變態(tài)為大眼幼體2～3 d后，即可拉網(wǎng)撈苗。將撈出的蟹苗轉(zhuǎn)移到提前準(zhǔn)備好的水泥池中進(jìn)行淡化，淡化時(shí)長為2～3 d。淡化第1天保持水體鹽度不變，第2天上午加水將鹽度從20降至15，晚上再加水將鹽度進(jìn)一步降至10，第3天上午加水將水體鹽度降至5以下。當(dāng)大眼幼體攝食量明顯減少后，可起捕銷售。

1.3 數(shù)據(jù)采集與記錄

每天用250 mL的廣口燒瓶在育苗池塘的4個(gè)角落采樣，觀察幼體狀態(tài)，估算幼體密度，記錄幼體發(fā)育速度和變態(tài)時(shí)間；每天記錄各池塘輪蟲和豐年蟲的投喂量，以便了解幼體攝食情況，計(jì)算餌料系數(shù)；每天觀察水體的肥瘦情況，記錄水溫、pH，定期檢測氨氮、亞硝酸鹽及余氯等水質(zhì)指標(biāo)，防止水質(zhì)超標(biāo)導(dǎo)致蟹苗死亡；最終記錄各池塘的撈苗量，出售時(shí)記錄淡化后的蟹苗量，據(jù)此計(jì)算產(chǎn)量和淡化率，獲得最終育苗產(chǎn)量。

相關(guān)指標(biāo)的計(jì)算公式如下。

抱卵蟹獲得率(%)=抱卵蟹數(shù)量/入池雌親蟹數(shù)量×100

(1)

有效孵化率(%)=孵化抱卵蟹數(shù)量/掛籠抱卵蟹數(shù)量/×100

(2)

餌料系數(shù)=消耗的餌料質(zhì)量/最終大眼幼體總體質(zhì)量

(3)

(4)

淡化率(%)=淡化后大眼幼體總體質(zhì)量/淡化前大眼幼體總體質(zhì)量×100

(5)

1.4 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSS 19.0軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，為反映各品系的實(shí)際情況，體現(xiàn)組間差異，數(shù)據(jù)采用原始數(shù)據(jù)呈現(xiàn)。分析數(shù)據(jù)采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，用Levene法進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，當(dāng)不滿足齊性方差檢驗(yàn)條件時(shí)，對百分比數(shù)據(jù)進(jìn)行反正弦或平方根處理。采用Duncan’s法進(jìn)行多重比較，取P<0.05為差異顯著。用EXCEL軟件和GraphPad Prism軟件繪制相關(guān)圖表。

2 結(jié)果

2.1 抱卵蟹獲得率和有效孵化率

各品系親本交配及越冬后的抱卵蟹獲得率見表4。從結(jié)果來看，各品系抱卵蟹獲得率與親本的規(guī)格關(guān)系較大，表現(xiàn)為隨著親本規(guī)格增大而呈明顯的降低趨勢，“長蕩湖1號”B系和超大規(guī)格品系的抱卵蟹獲得率明顯偏低，超大規(guī)格品系的抱卵蟹獲得率甚至低于50%。

表4 各品系抱卵蟹獲得率

各品系抱卵蟹的有效孵化率見表5。結(jié)果表明，抱卵蟹孵化率隨著親本規(guī)格的增大呈現(xiàn)一定的降低趨勢，但組間差異并不顯著(P>0.05)，4個(gè)品系河蟹的有效孵化率最高與最低差異僅在5%左右。

表5 各品系抱卵蟹的有效孵化率

2.2 育苗過程中水溫變化、日投餌量和幼體發(fā)育情況

各品系試驗(yàn)組育苗期間水溫和日投餌量的變化情況見圖1。整個(gè)育苗過程中水溫的變化范圍為13～21 ℃，除個(gè)別時(shí)間段下雨和大風(fēng)天氣導(dǎo)致的溫度下降外，育苗期間的水溫整體呈上升趨勢。

圖1 各品系河蟹育苗期間土池水溫和投餌量(輪蟲+豐年蟲)的變化情況

從餌料投喂情況看，整個(gè)育苗期間的日投餌量呈現(xiàn)先逐漸增加后迅速減少的變化趨勢。4月5日—5月1日期間，日投餌量隨著幼體的蛻皮生長而逐漸增加；5月1日—6日，蟹苗正處于大眼幼體變態(tài)階段，餌料投喂量大大減少。其中，4月22—23日及4月28—29日，因遭遇強(qiáng)降雨天氣，餌料投喂量較平常有所減少。

各品系試驗(yàn)組幼體階段蛻皮周期的變化情況見圖2。在整個(gè)幼體培育過程中，蛻皮周期呈先降后增的變化趨勢，其中溞Ⅰ—Ⅱ及溞Ⅴ—大眼幼體期間的蛻皮周期長達(dá)7～8 d，溞Ⅱ—Ⅲ及溞Ⅳ—Ⅴ期間的蛻皮周期為6～7 d，溞Ⅲ—Ⅳ期間的蛻皮周期僅為5～6 d。各品系試驗(yàn)組之間，除了二齡早熟品系在溞Ⅳ—Ⅴ期間的蛻皮周期顯著低于“長蕩湖1號”A系和超大規(guī)格品系外(P<0.05)，不同品系幼體蛻皮周期無顯著差異(P>0.05)。

注：不同字母表示組間差異顯著(P<0.05)。

2.3 育苗效果

各品系河蟹的最終育苗效果見表6。從單位產(chǎn)量看，超大規(guī)格品系的產(chǎn)量低于其余3個(gè)品系。就單蟹產(chǎn)苗量整體而言，各品系之間沒有顯著差異(P>0.05)，單看每口池塘，排除6#(“長蕩湖1號”B系)和10#(超大規(guī)格品系)兩個(gè)異常池塘外，各品系的單蟹產(chǎn)苗量隨著親本規(guī)格的增大而呈增加趨勢。幼體餌料系數(shù)在二齡早熟品系、“長蕩湖1號”A系及“長蕩湖1號”B系組間無顯著差異(P>0.05)，而超大規(guī)格品系的餌料系數(shù)顯著高于其余3個(gè)品系(P<0.05)。各品系大眼幼體的淡化率均為90%左右，差異較小。

表6 各品系河蟹親本最終育苗效果比較

3 結(jié)論

3.1 抱卵蟹獲得率

抱卵蟹獲得率，即河蟹母本經(jīng)配對、越冬及暫養(yǎng)后的回捕率，可以反映河蟹親本入池至掛籠期間的存活情況。本試驗(yàn)中，隨著親本規(guī)格由150 g左右增至300 g左右，抱卵蟹獲得率由70.16%降低至47.79%。究其原因，一方面可能與不同規(guī)格河蟹親本的營養(yǎng)物質(zhì)儲存情況有關(guān)。河蟹性腺發(fā)育是一個(gè)卵巢和肌肉中營養(yǎng)物質(zhì)快速積累的過程，大規(guī)格河蟹往往因生長周期長、性腺成熟時(shí)間晚，導(dǎo)致其營養(yǎng)物質(zhì)積累較少[11]。當(dāng)卵巢和肌肉中的粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量不足時(shí)，抱卵蟹不能獲得足夠的能量供給，以至于不能安全越冬[12-13]。另一方面可能是大規(guī)格品系親本抱卵不穩(wěn)定。與小規(guī)格河蟹親本相比，大規(guī)格河蟹親本對暫養(yǎng)期間水質(zhì)和底質(zhì)的要求更高，親本越冬期間如水質(zhì)、底質(zhì)惡化可能就會導(dǎo)致大規(guī)格抱卵蟹不能安全越冬。親本孵化率是指掛籠期間成功孵化抱卵蟹的數(shù)量與全部掛籠抱卵蟹數(shù)量的百分比值，與掛籠期間抱卵蟹的存活及排卵情況有關(guān)。本試驗(yàn)中，親本孵化率隨著親本規(guī)格的增大呈現(xiàn)下降趨勢，與不同規(guī)格親本越冬后回捕率的差異相一致。

3.2 餌料投喂、水溫變化和幼體發(fā)育情況

從餌料總投喂量看，本試驗(yàn)中，在溞Ⅰ—Ⅴ期間日投餌量逐漸增加，而變態(tài)為大眼幼體后，日投餌量迅速減少。就兩種餌料投喂比例而言，觀察到溞Ⅲ出現(xiàn)后即逐漸增加豐年蟲的投喂比例，在大眼幼體及淡化期間豐年蟲投喂量占比為40%～50%。已有研究表明，豐年蟲含有比輪蟲更多的營養(yǎng)物質(zhì)，可以有效促進(jìn)幼體生長和變態(tài)發(fā)育，提高其應(yīng)對環(huán)境變化和疾病侵襲的耐受力，從而提高成活率及產(chǎn)量[14-15]。雖然豐年蟲是河蟹幼體的優(yōu)質(zhì)活性餌料，但因其價(jià)格昂貴、缺乏二十二碳六烯酸(DHA)等缺點(diǎn)，本試驗(yàn)在溞Ⅴ和大眼幼體期間補(bǔ)充投喂了DHA含量較高的藻粉[16]。河蟹溞狀幼體需經(jīng)歷5次蛻皮才能變態(tài)為大眼幼體。本試驗(yàn)中，各階段幼體的蛻皮周期先減后增，并在溞Ⅲ時(shí)蛻皮周期最短。在丁昊翔等[17]的繁育試驗(yàn)中，溞狀幼體在不同時(shí)期的蛻皮周期同樣呈現(xiàn)先降后增的變化趨勢，但在溞Ⅳ時(shí)蛻皮周期最短。這一方面可能與水溫的差異有關(guān)，本試驗(yàn)所依托的育苗場位于鹽城射陽，而丁昊翔等[17]的幼體繁育試驗(yàn)在南通如東進(jìn)行，由于緯度上的差異，兩個(gè)育苗場在育苗期間的平均水溫相差2～3 ℃。此外，鹽城射陽河蟹幼體培育整體比南通如東晚5～10 d。這些不同育苗地點(diǎn)之間的溫度和氣候差異，可能導(dǎo)致了不同的溞狀幼體蛻皮規(guī)律。

3.3 育苗效果

河蟹“飛機(jī)苗”是指大眼幼體的頭胸甲顏色偏淡，漸漸變白，頭胸甲向外張開，像飛機(jī)的翅膀[18]?！帮w機(jī)苗”具有不易捕撈、不耐長途運(yùn)輸及成活率低等缺點(diǎn)，其品質(zhì)遠(yuǎn)差于正常大眼幼體。本試驗(yàn)“長蕩湖1號”B系及超大規(guī)格品系中分別有1口池塘出現(xiàn)了“飛機(jī)苗”現(xiàn)象，以至于這兩口池塘的單蟹產(chǎn)量僅為1.24 kg和1.31 kg，遠(yuǎn)低于其他池塘。大規(guī)格品系(“長蕩湖1號”B系和超大規(guī)格品系)出現(xiàn)“飛機(jī)苗”現(xiàn)象，一方面反映出大規(guī)格親本所產(chǎn)幼體的品質(zhì)及免疫力較差；另一方面也與育苗后期水溫升高、投餌量增加有關(guān)。投喂輪蟲時(shí)沒有瀝干水分，大量輪蟲塘的肥水進(jìn)入育苗池，加之溫度升高導(dǎo)致育苗池水質(zhì)過肥，因而出現(xiàn)了“飛機(jī)苗”。因此，在育苗過程中掌握適當(dāng)?shù)耐娥D量，并進(jìn)行水質(zhì)調(diào)控是非常重要的，必要時(shí)應(yīng)適當(dāng)換水[18]。除6#和10#這兩口出現(xiàn)“飛機(jī)苗”的池塘之外，其他試驗(yàn)塘單蟹產(chǎn)苗量與親本規(guī)格成一定正相關(guān)，這與茅海成等[19]和王少兵等[20]大規(guī)格中華絨螯蟹單蟹產(chǎn)苗量高的結(jié)論相一致。餌料系數(shù)(FCR)通常反映餌料轉(zhuǎn)化率的高低。本試驗(yàn)中，超大規(guī)格品系的FCR明顯高于其余3個(gè)品系，這可能是由于超大規(guī)格品系的3口育苗池塘中掛籠抱卵蟹數(shù)量少、幼體密度低，導(dǎo)致餌料浪費(fèi)嚴(yán)重。此外，超大規(guī)格品系幼體蛻皮時(shí)間長，餌料投喂量大，因此造成了餌料浪費(fèi)，F(xiàn)CR偏高[21]。

綜上所述，雖然大規(guī)格品系在單蟹產(chǎn)苗量方面具有一定優(yōu)勢，但其抱卵蟹越冬后的回捕率及掛籠孵化率較低，因此有必要通過親本營養(yǎng)強(qiáng)化及越冬管理優(yōu)化等措施來提高大規(guī)格抱卵蟹的成活率。