黑龍江省張廣才嶺北部小飛鼠的遺傳多樣性與種群歷史動態(tài)

田新民 廉明棟 宋雅祺 劉小慧 楊孟平 陳紅

（牡丹江師范學院生命科學與技術學院，牡丹江 157011）

小飛鼠(Pteromys volans)隸屬哺乳綱(Mammalia)嚙齒目(Rodentia)鼯鼠科(Pteromyidae)飛鼠屬，為樹棲夜行滑行類物種。在國外主要分布于歐亞大陸北部，我國主要分布在東北、華北、西北等北方林區(qū)(蔣志剛等，2015)。不合理的森林采伐，生境的喪失與破碎化，已導致全球許多地區(qū)的小飛鼠種群處于瀕危狀態(tài)(Leeet al.,2008a;Nummertet al.,2020)。小飛鼠作為森林可持續(xù)經(jīng)營的重要指示和傘護物種(Hurmeet al.,2007)，我國也將其列為“易?！迸c“三有”的重點保護野生動物(王志寶，2000；蔣志剛等，2016)。目前國外在小飛鼠巢址選擇、家域、擴散、遺傳多樣性和分子系統(tǒng)進化等領域已開展系列研究(Hanskiet al.,2000;Selonen and Hanski,2004;Nakama and Yanagawa,2009;Lampilaet al.,2009;Yalkovskayaet al.,2015)，而國內僅在樹洞巢穴保溫機制方面有相關報道(陳亮，2018)，在生態(tài)學其他領域，特別是對這一物種的種群遺傳學研究還存在空白。

種群遺傳多樣性和歷史動態(tài)是衡量物種生存與利用的重要指標(Haiget al.,1990)，特別是遺傳多樣性的降低與近交衰退會導致物種滅絕，其遺傳信息評價結果可為物種實施科學的保護與管理(Frankhamet al.,2010；張于光等，2019)。我國東北地區(qū)曾受森林采伐、盜獵、氣候變化等因素的影響，使許多物種面臨生存威脅，導致物種的近交、遺傳多樣性喪失、種群遺傳分化等遺傳信息發(fā)生改變(魏輔文等，2021；田新民，2021；Chenet al.,2022)。黑龍江省張廣才嶺北部為長白山脈與小興安嶺之間許多物種遷移的重要生態(tài)廊道區(qū)域，該區(qū)域的物種保護與生態(tài)修復備受關注(李維平等，2017；田新民，2021)。因此，本研究基于mtDNACyt b、控制區(qū)和nDNA的微衛(wèi)星3種分子標記，分析小飛鼠的遺傳特性及系統(tǒng)進化，從分子水平上揭示小飛鼠種群的動態(tài)變化及其遺傳學機制，為該物種種群遺傳資源的保護與管理奠定基礎。

1 研究方法

1.1 研究地區(qū)概況

研究地區(qū)位于黑龍江省張廣才嶺北部的賓縣林區(qū) (北緯 45°30′～ 46°01′，東經(jīng) 126°55′～ 128°19′)，地處松花江南岸(圖1)。該地區(qū)屬中溫帶大陸性季風氣候，年平均氣溫3.9℃，年平均降雨量681 mm，無霜期130 d左右，屬長白山植物區(qū)系。林區(qū)經(jīng)營總面積1 110.81 km2，其中天然林面積675.76 km2，天然林中以闊葉林為主，針闊混交林和針葉林分布極少。人工林面積為272.72 km2，其中以落葉松林為主。分布的樹種有紫椴(Tilia amurensis)、胡桃楸 (Juglans mandshurica)、水曲柳(Fraxinus mandshurica)、白樺 (Betula platyphylla)和蒙古櫟(Quercus mongolica)等，這些樹種為小飛鼠提供了洞巢保障。該區(qū)域內的紫貂(Martes zibellina)、黃喉貂(Martes flavigula)、黃鼬(Mustela sibirica)和豹貓(Prionailurus bengalensis)等食肉類為小飛鼠的主要天敵。

圖1 本研究的采集樣點分布圖Fig.1 Sampling sites of this study

1.2 樣品采集及DNA提取

2018年與2019年10—12月，對研究地區(qū)的小飛鼠毛發(fā)樣本進行采集。在野外尋找小飛鼠的樹洞巢，敲擊樹干發(fā)現(xiàn)個體后，采用網(wǎng)捕的方法在洞口處捕獲個體。在個體尾部取20根帶有毛囊的毛發(fā)樣本，收集于封口袋內，標號并GPS定位。在捕獲個體尾端剪掉部分毛發(fā)標記，避免個體重復采樣，最后將個體放歸野外。用同樣的方法，兩年期間，共采集29份毛發(fā)樣本，-20℃保存?zhèn)溆?。此外，在張廣才嶺中部的黑龍江省牡丹江市三道關林場采集3份毛發(fā)樣本；大興安嶺北部內蒙古根河市區(qū)域的金河林業(yè)局采集1份毛發(fā)樣本(陳亮、張子棟提供)，該4份樣本僅用于小飛鼠系統(tǒng)進化關系分析。

DNA提取時，從毛發(fā)根部毛囊處取約0.5 cm長的一段，用75%的乙醇清洗兩次以除菌，蒸餾水再清洗一次，棄廢液后于鼓風干燥箱內55℃干燥。將處理后的20根毛囊樣本，使用TIANamp Micro DNA Kit試劑盒(天根，北京)，并參考使用說明書對樣本進行DNA提取。為進一步驗證所用樣本來自不同個體，基于后續(xù)微衛(wèi)星分型數(shù)據(jù)，利用軟件Excel mircosatellite tool kit(Park,2001)，尋找數(shù)據(jù)中相匹配的基因型。不同樣本，所有位點的基因型相同或只有1個位點的1個等位基因存在差異，可判定為同一個體(Bellemainet al.,2005)。

1.3 PCR擴增

根據(jù)已發(fā)表小飛鼠mtDNA全序列(Ryuet al.,2013;Limet al.,2018)，利用Primer Premier v 5.0(Singhet al.,1998)設計引物用于mtDNACyt b和控制區(qū)全序列的擴增。Cyt b擴增引物，上游：5′-ACA TGG AAT CTAACC ATG ACC AA-3′，下游：5′-AGA CTT CAT TGT TGG TTT ACA AGA C-3′?？刂茀^(qū)擴增引物，上游：5′-GTT CCA CCT TCA ACT CCC AAA-3′，下游：5′-CAT TTT CAG TGC TTT GCT TTG AT-3′。

根據(jù)GenBank中報道的微衛(wèi)星位點，結合Painter等 (2004)、Kiesow 等 (2011)、Zittlau 等(2000)、Jumpa等 (2015)、Hale等 (2001)和 Todd(2000)等文獻，選取鼯鼠科(Pteromyidae)小飛鼠指名亞種(P.v.volans)、北美飛鼠(Glaucomys sabrinus)、海南小飛鼠(Hylopetes phayrei)和赤頰林飛鼠 (Hylopetes sagitta)，松鼠科 (Sciuridae)北松鼠(Sciurus vulgaris)5個物種中擴增效果較好的34對引物，以本研究中的小飛鼠DNA為模板進行擴增，篩選微衛(wèi)星位點。最終獲得并使用擴增穩(wěn)定、具多態(tài)性的12個位點，其上游引物5′端進行熒光標記 (Fam、Hex、Tamra或Rox)(表1)。

表1 本研究選取的12對微衛(wèi)星引物信息Table 1 Details of 12 microsatellite loci used for the study

三種分子標記的PCR反應體系均為20 μL：5 U/μL Ex Taq DNA polymerase(TaKaRa， Japan)0.1 μL， 10 × Buffer 2 μL， 2.5 mmol/L dNTPs 1.6 μL，10 μmol/L 上、下游引物各 0.5 μL，模板 DNA 1.5 μL，PCR grade water(天根，北京)13.8 μL。PCR 反應條件均為：94℃，2 min；(94℃，30 s；Ta，30 s；72℃，30 s)× 35 cycles；72℃，10 min。其中，Cyt b和控制區(qū)引物的退火溫度(Ta)均為55℃，微衛(wèi)星引物的退火溫度見表1。對于微衛(wèi)星位點，PCR擴增選擇3次重復，其中2次及以上重復均只獲得1條PCR產(chǎn)物帶的判定為純合子，3次重復均為2條PCR產(chǎn)物帶的判定為雜合子(張于光等，2019)。為了監(jiān)測污染，在擴增的同時均附加一個不含DNA的陰性對照。所有的引物合成、雙向測序和基因分型均由上海生工完成。

1.4 數(shù)據(jù)分析

mtDNACyt b和控制區(qū)序列，首先利用Clustal X 2.1(Larkinet al.,2007)進行序列比對。然后用DnaSP 5.10(Librado and Rozas,2009)計算種群的變異位點數(shù)(S)、單倍型數(shù)量(H)、單倍型多樣性(Hd)和核苷酸多樣性(Pi)，并進行錯配分布(Mismatch distributions)分析，以通過單倍型差異分布來估測種群歷史擴張事件。通過Tajima’s D和Fu’s Fs中性檢驗來判斷種群是否顯著偏離中性突變，進一步評價種群的歷史擴張事件或瓶頸效應。利用Network 4.6(Bandeltet al.,1999)，基于Median-joining算法，構建小飛鼠的單倍型網(wǎng)絡圖，分析單倍型間的進化關系。

為探討小飛鼠系統(tǒng)進化關系，從GenBank下載小飛鼠Cyt b序列 (1 068 bp)共51條 (表2)，合計本研究的18個單倍型，其中賓縣樣本14個單倍型(代碼：CHB1～CHB14)、三道關樣本3個單倍型(代碼：CHS1～CHS3)和根河樣本1個單倍型(代碼：CHG)，共計69條序列。利用BEAST 1.6.1(Drummondet al.,2012)，基于貝葉斯法(Bayesian inference,BI)構建系統(tǒng)發(fā)育樹；并通過jModelTest 2.1.10(Darribaet al.,2012)檢驗選擇最優(yōu)替換模型及相關參數(shù)(HKY+G)。以日本小飛鼠(Pteromys momonga)(單倍型：PM01和PM02，GenBank登錄號：AB164675和AB164676)作為外群，以獲取發(fā)育樹的根。構建BI樹時，以MCMC運行3 000 000代，每100代抽樣1次，舍棄前25%的老化值，并用貝葉斯后驗概率評估各節(jié)點的支持率。僅顯示50%以上的支持率，并對發(fā)育樹進行美化。

表2 GenBank下載的小飛鼠Cyt b基因信息Table 2 Mitochondrial cytochrome b gene of Siberian flying squirrel from GenBank

基于微衛(wèi)星分型數(shù)據(jù)，首先利用Microchecker 2.2.3(van Oosterhoutet al.,2004)檢測各位點是否存在無效等位基因(Null allele)，判斷位點是否存在嚴重的分型錯誤及能夠滿足遺傳學分析要求。然后利用GenAlEx 6.0(Peakall and Smouse,2006)計算種群的等位基因數(shù)(Na)、有效等位基因數(shù)(Ne)、觀測雜合度(Ho)、期望雜合度(He)和近交系數(shù)(Fis)。用Excel mircosatellite tool kit(Park,2001)計算多態(tài)信息含量(PIC)，PIC＞0.5的位點判定為高多態(tài)性位點(Botsteinet al.,1980；田新民，2021)。再利用Genepop 4.0(Raymond and Rousset,1995)檢測種群和各位點是否符合Hardy-Weinberg平衡，以及位點間的連鎖不平衡，概率檢驗采用馬可夫鏈法(Markov chain method)，參數(shù)為10 000 dememorization、20 batch和5 000 iteration。最后，兩個檢驗以Bonferroni法對顯著性進行修正。

此外，基于微衛(wèi)星數(shù)據(jù)，利用Bottleneck 1.2(Piryet al.,1999)進一步檢測小飛鼠種群是否經(jīng)歷過瓶頸效應，選擇兩階變異模型(Two-phase model,TPM)和逐步突變模型(Stepwise mutation model,SMM)進行Wilcoxon檢驗，重復1 000次，其中TPM被認為是微衛(wèi)星分析的最適合模型(Ellegren,2004)。TPM選擇79%變異遵從SMM，變異系數(shù)為 9%(Piryet al.,1999)。利用 Structure 2.3.4(Pritchardet al.,2000)進行種群遺傳結構分析，參數(shù)為Length of Burnin Period 100 000，Number of MCMC Reps after Burnin 10 000，K=1～6，Number of Iterations 20。運算結果上傳Structure Harvester Web v0.6.94(Earl and vonHoldt,2012)進一步分析，以Ln Pr(X|K)曲線最大峰值來判斷種群遺傳結構的最佳分組數(shù)K。

2 結果

2.1 mtDNA序列分析

29個mtDNACyt b全序列(1 140 bp)中共檢測到變異位點34個，其中單變異位點11個，簡約信息位點23個。堿基含量為A 27.9%、T 31.0%、C 28.6%、G 12.4%，A+T含量(58.9%)高于C+G含量(41.0%)。堿基變異均為轉換和顛換，無缺失或插入，轉換(顛換)平均值為16.00。在29個樣本中得到26個控制區(qū)全序列(1 066 bp)，檢測到72個變異位點，其中單變異位點24個，簡約信息位點47個。堿基含量為A 31.9%、T 30.9%、C 26.0%、G 11.2%，A+T含量 (62.8%)高于C+G含量(37.2%)。堿基變異多為轉換和顛換，有1個缺失或插入，轉換(顛換)平均值為5.25。兩種序列，均存在明顯的AT偏倚性，且G含量最低(圖2，3)。

2.2 遺傳多樣性評價

對于mtDNA數(shù)據(jù)，在29條Cyt b序列中共檢測到14個單倍型，其中單倍型多樣性指數(shù)(Hd)為0.909±0.031，核苷酸多樣性指數(shù) (Pi)為(0.616±0.065)%。26條控制區(qū)序列中存在15個單倍型，其中Hd為0.945±0.024，Pi為(1.698±0.068)%(表3)。兩種序列中僅有1只個體的稀有單倍型均占多數(shù)，Cyt b和控制區(qū)都為9個，分別占各自所有單倍型的64.29%和60.00%(圖2～4)。

圖2 小飛鼠種群14個Cyt b單倍型變異位點.N：具有相同單倍型的個體數(shù)量Fig.2 The variable sites of 14 cytochrome b haplotypes identified in Siberian flying squirrel population.N:Number of individuals with each haplotype

圖3 小飛鼠種群15個控制區(qū)單倍型變異位點.N：具有相同單倍型的個體數(shù)量Fig.3 The variable sites of 15 control region haplotypes identified in Siberian flying squirrel population. N: Number of individuals with each haplotype

圖4 基于Cytb(A)與控制區(qū)(B)序列構建的單倍型網(wǎng)絡圖.圓形面積代表單倍型頻次，空心點代表缺失的單倍型Fig.4 Median-joining network of haplotypes based on Cytb(A)and control region(B).The size of each circle represents the frequency of haplotypes,and small hollow dot represents missing haplotype

表3 基于Cyt b與控制區(qū)序列的種群遺傳多樣性分析Table 3 Analysis of population genetic diversity based on cytochrome b(Cyt b)and control region(CR)

基于微衛(wèi)星分型數(shù)據(jù)，證實29份毛發(fā)樣本DNA均來自不同個體。12個微衛(wèi)星位點經(jīng)過Microchecker檢測，未發(fā)現(xiàn)有無效等位基因，位點間均不存在連鎖不平衡。29只個體均獲得12個位點的準確基因型，其中種群平均等位基因數(shù)(Na)為(13.167±2.725)個，有效等位基因數(shù) (Ne)為(7.714±1.887)個，各位點的有效等位基因數(shù)顯著少于實際等位基因數(shù)(P＜0.01)。12個微衛(wèi)星位點的PIC為0.806～0.908，皆為高多態(tài)性位點(PIC＞0.5)。遺傳多樣性顯示，種群的觀測雜合度 (Ho)為0.727±0.175，期望雜合度 (He)為0.864 ± 0.033(表4)。

表4 基于12個微衛(wèi)星位點的種群遺傳多樣性分析Table 4 Analysis of population genetic diversity based on 12 microsatellite loci

2.3 種群歷史動態(tài)分析

mtDNACyt b基因和控制區(qū)序列構建的錯配分布圖呈明顯的多峰曲線狀態(tài)(圖5)?；谥行詸z驗，Tajima’s D和Fu’s Fs的結果也均未顯著偏離零(P＞0.05)，種群沒有顯著偏離中性突變(表3)。兩種分析方法結果表明，小飛鼠種群經(jīng)歷了比較復雜的種群歷史，沒有發(fā)生過歷史擴張事件。微衛(wèi)星的種群瓶頸效應檢測顯示，TPM和SMM模型中均未發(fā)現(xiàn)顯著的雜合度過剩(P＞0.05)，同時等位基因頻率沒有顯著偏離正態(tài)L-shaped分布。再結合Cyt b和控制區(qū)的中性檢驗結果，均未檢測到小飛鼠種群近期的遺傳瓶頸效應。

圖5 基于Cyt b(A)和控制區(qū)(B)序列的小飛鼠種群錯配分布圖Fig.5 Mismatch distribution for Siberian flying squirrel population based on Cyt b(A)and control region(B)

微衛(wèi)星數(shù)據(jù)顯示，種群觀測雜合度顯著小于期望雜合度(P＜0.05)，呈現(xiàn)一定程度的雜合度不足，種群的近交系數(shù)0.159，為極顯著偏離零的正值(P＜0.01)(表4)，表明小飛鼠種群存在近親繁殖情況。根據(jù)STRUCTURE軟件的種群遺傳結構表明，當K=1時，Ln Pr(X|K)具有最大平均值，且重復計算的波動性最小(圖6)，說明小飛鼠種群內不存在顯著的遺傳分化。

圖6 基于微衛(wèi)星數(shù)據(jù)STRUCTURE聚類結果的Ln Pr(X|K)變化趨勢Fig.6 Changing trends of Ln Pr(X|K)from STRUCTURE clustering results for the microsatellite

2.4 系統(tǒng)發(fā)育關系分析

基于69個mtDNACyt b單倍型構建的貝葉斯系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，小飛鼠存在3個明顯的遺傳譜系，包括遠東、歐亞大陸北部和日本北海道3個分支，本研究張廣才嶺和大興安嶺的樣本單倍型歸屬為遠東譜系。俄羅斯東部、韓國與中國樣本單倍型共同形成遠東譜系，3個地區(qū)之間無共享單倍型，并且俄羅斯、韓國與中國單倍型分別存在兩個獨立亞分支。俄羅斯中西伯利亞(歐亞大陸東北部)與俄羅斯西部(歐亞大陸西北部)的兩個亞分支構成了歐亞大陸北部譜系，其中蒙古單倍型歸屬于歐亞大陸東北部亞分支。日本北海道地區(qū)的單倍型獨立形成北海道譜系(表2，圖7)。

圖7 基于Cyt b構建的小飛鼠貝葉斯系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.7 Phylogenetic tree of Siberian flying squirrel obtained for cytochrome b gene in Bayesian inference

3 討論

遺傳多樣性的喪失會導致動物對環(huán)境變化的適應能力下降，甚至物種的滅絕，評價種群的遺傳多樣性，是物種保護的重要內容(Frankhamet al.,2010)。單倍型多樣性(Hd)和核苷酸多樣性(Pi)是衡量種群mtDNA遺傳變異程度的重要指標，其中Pi值考慮了單倍型在種群中所占的比例，在評價遺傳多樣性時更為精確(Neigel and Avise,1993；馬英等，2019)。本研究控制區(qū)的Pi值(1.695%)明顯高于Cyt b(0.616%)，Nummert等(2020)對愛沙尼亞、芬蘭和俄羅斯的小飛鼠種群研究中也呈現(xiàn)此規(guī)律。mtDNA非編碼控制區(qū)的進化速度較快、承受的選擇壓力較小 (Krojerová-Proke?ováet al.,2013；佐日古麗·伊斯馬伊力等，2019)，在許多動植物和人類中也普遍存在基因非編碼區(qū)多態(tài)性高于編碼區(qū)的現(xiàn)象(Crochet and Desmarais,2000)。微衛(wèi)星數(shù)據(jù)顯示，種群平均觀測雜合度 (Ho)和期望雜合度 (He)分別為0.727和0.864。本研究中Pi值與Lee等(2008a)關于黑龍江省小飛鼠種群(Pi=0.614%)和韓國種群(Pi=0.616%)的研究基本一致，僅低于俄羅斯濱海邊疆區(qū)(Pi=0.950%)；遠高于愛沙尼亞、芬蘭、俄羅斯大部分地區(qū)和日本北海道地區(qū)。與其他地區(qū)相比，本研究的遺傳多樣性處于最高水平(表5)，同時參考Grant和Bowen(1998)、Yuasa等 (2007)種群高單倍型多樣性(Hd≥0.5)和高核苷酸多樣性(Pi≥0.5%)的標準，認為張廣才嶺北部小飛鼠種群的遺傳多樣性豐富。但是研究發(fā)現(xiàn)，種群中Cyt b和控制區(qū)的稀有單倍型均在60%以上，微衛(wèi)星各位點的有效等位基因數(shù)顯著少于實際等位基因數(shù)(P＜0.01)，說明小飛鼠的基因頻率分布處于一個不穩(wěn)定的狀態(tài)，未來種群發(fā)展中存在等位基因丟失的風險。因此，應加強張廣才嶺北部小飛鼠種群的保護與管理，防止種群遺傳多樣性的急劇下降。

表5 基于mtDNA和微衛(wèi)星位點的鼯鼠科主要物種種群遺傳多樣性參數(shù)比較Table 5 Comparison of population genetic diversity at mtDNA and microsatellite loci in the Pteromyidae

景觀格局和物種的遷移能力是影響種群遺傳結構的最重要因素(Yuasaet al.,2007;Pérez-Esponaet al.,2008)。本研究的賓縣地區(qū)有高速G1011、國道G221和哈佳鐵路東西方向穿過，被分成南、北兩塊隔離區(qū)域，采樣的區(qū)域主要集中在南部，該林區(qū)無明顯的景觀阻隔。同時小飛鼠作為滑行類物種，具有一定的遷移能力(Selonen and Hanski,2004,2012)，保證了個體間的基因交流，因此種群內沒有出現(xiàn)顯著的遺傳分化。本研究的張廣才嶺北部區(qū)域、尚志和方正林區(qū)受多條高速、高鐵和國道，以及延壽農(nóng)田區(qū)等因素的阻隔，其森林生境呈現(xiàn)破碎化分布，未來待加大取樣范圍，進一步評價北部區(qū)域小飛鼠種群的遺傳結構。基于mtDNA和微衛(wèi)星，本研究均未檢測到小飛鼠種群的近期遺傳瓶頸效應。由于小飛鼠種群歷史資料的匱乏，缺少數(shù)量變化的準確信息。鑒于之前的大量森林采伐，據(jù)主管部門報道的多次濫捕行為，本研究地區(qū)小飛鼠種群數(shù)量可能較歷史時期下降，而數(shù)量下降的程度還未能表現(xiàn)遺傳上的種群瓶頸效應。受森林采伐導致的生境破碎化，愛沙尼亞和芬蘭地區(qū)的小飛鼠種群數(shù)量一直呈下降趨勢，分別成為當?shù)氐臑l危與易危物種，也未檢測到遺傳瓶頸效應(Nummertet al.,2020)。

在Hardy-Weinberg平衡檢驗中發(fā)現(xiàn)，本研究共有6個微衛(wèi)星位點以及種群整體上偏離平衡。Hardy-Weinberg平衡是建立在自然種群隨機交配假設基礎上的，認為在瀕危物種種群中出現(xiàn)不符合平衡的現(xiàn)象，主要原因有無效等位基因、種群亞結構和近親繁殖導致的雜合度不足(Ladeet al.,1996；任鵬等，2017)。本研究未檢測到無效等位基因和種群亞結構，因此排除這兩個因素導致其偏離Hardy-Weinberg平衡的可能。Fis是評價種群是否存在近親繁殖的一個重要參數(shù)，當Fis為正值時表示群體內存在近交(Weir and Cockerham,1984；任鵬等，2017)。本研究6個位點Fis均為正值，種群的Fis為0.159，也為顯著偏離零的正值，因此認為種群內的近親繁殖是導致微衛(wèi)星位點偏離Hardy-Weinberg平衡的主要原因。小飛鼠種群數(shù)量的下降，與尚志和方正等林區(qū)的隔離，可能是影響種群內個體近親繁殖的重要因素。同樣在愛沙尼亞，因小飛鼠種群的生境破碎化和數(shù)量急劇下降也表現(xiàn)出了近親繁殖(Nummertet al.,2020)。本研究較高的種群遺傳多樣性表明，小飛鼠在其近期歷史中可能具有較大的有效種群規(guī)模(Balakrishnanet al.,2003)，而種群內高比例的稀有單倍型和等位基因為個體近親繁殖的表現(xiàn)。近親繁殖可導致物種遺傳多樣性的降低與喪失，對環(huán)境的適應性下降，最終可能面臨瀕?；驕缃^的威脅(Lampilaet al.,2009;Nummertet al.,2020)?；谏鲜龇治稣J為，亟待加強張廣才嶺北部小飛鼠種群的保護，連通破碎化生境增加種群間的基因交流，防止遺傳多樣性的下降與喪失。

本研究證實小飛鼠存在3個明顯的進化分支，遠東、歐亞大陸北部和日本北海道，結果與其他研究基本一致(Oshidaet al.,2005;Leeet al.,2008a;Nummertet al.,2020)。其中，Lee等(2008a)和Nummert等(2020)研究中僅包括中國黑龍江省5個樣本得到的5個單倍型，其中3個單倍型(CHJ3、CHJ4和CHJ5)分別與本研究賓縣單倍型(CHB12、CHB13和CHB4)為共享單倍型。在遠東譜系中，韓國與俄羅斯東部單倍型分處兩個亞分支內，兩個地區(qū)之間存在明顯的遺傳分化(Leeet al.,2008a)，而中國樣本單倍型在兩個亞分支中都有分布，說明本研究地區(qū)的小飛鼠與這兩個區(qū)域之間存在一定的基因交流。與相似分布的花鼠(Tamias sibiricus)和北松鼠不同，在mtDNA研究中，韓國、俄羅斯東部和中國東北3個地區(qū)的花鼠存在明顯的遺傳分化(Leeet al.,2008b)，而北松鼠卻不存在(Leeet al.,2008a)，說明3個物種存在不同的進化歷史。俄羅斯中西伯利亞(歐亞大陸東北部)與俄羅斯西部(歐亞大陸西北部)的兩個亞分支共同形成了歐亞大陸北部譜系，兩個區(qū)域沒有顯示出更明顯的系統(tǒng)地理結構，說明烏拉爾山脈(Ural Mountains)似乎不是小飛鼠明顯的遺傳屏障。北海道種群形成最為明顯的一個獨立分支，研究認為北海道種群的系統(tǒng)地理分化可能是荷斯廷(Holsteinian)間冰期的結果，在歐亞種群內部分化之前，該種群已經(jīng)與歐亞種群分離(Oshidaet al.,2005)。本研究中大興安嶺地區(qū)僅有1個根河樣本，并且單倍型與其中賓縣單倍型共享，未來應增加取樣量和研究區(qū)域，進一步探討我國東北地區(qū)及全國范圍內種群的遺傳結構和亞種分類問題，為小飛鼠的科學保護與管理提供參考。