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    不同產(chǎn)地野菊花味覺分析及蒙花苷分布規(guī)律

    2022-07-18 03:26:00魏偉鋒李建領(lǐng)池蓮鋒馬東明韓正洲
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年13期
    關(guān)鍵詞:澀味野菊花類群

    許 雷,魏偉鋒,李建領(lǐng),池蓮鋒,魏 民*,馬東明,韓正洲

    (1.華潤三九醫(yī)藥股份有限公司,廣東深圳 518110;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué),廣東廣州 510006)

    電子舌技術(shù)(E-Tongue)可以模擬人體味覺系統(tǒng),從味覺傳感器的化學(xué)信號分析出“味道”的信息進行識別檢測,可以快速獲得樣品味覺信息,反映樣品質(zhì)量信息。近年來,在中藥味覺信息的研究方面,電子舌技術(shù)的應(yīng)用越來越廣泛,主要用于預(yù)測未知中藥提取液濃度、中藥材鑒別、藥物不良味道掩蓋、藥材質(zhì)量評價、藥材苦味與藥效品質(zhì)相關(guān)性研究、鑒別中藥材產(chǎn)地等領(lǐng)域,具有檢測快速、靈敏度高等優(yōu)點。目前,電子舌技術(shù)用于野菊花藥材質(zhì)量評價的研究鮮見報道。

    野菊花為菊科植物野菊(L.)的干燥頭狀花序,主產(chǎn)于湖北、安徽、河南、陜西等地。野菊花味苦、辛,微寒,歸肝、心經(jīng),具有清熱解毒、瀉火平肝的功效。近年來化學(xué)研究表明野菊花中主要含黃酮類、酚酸類和萜類等化學(xué)成分,其中主要活性成分為黃酮類。

    資源調(diào)研發(fā)現(xiàn),野菊花藥材全國分布廣泛,但各地藥材質(zhì)量參差不齊,產(chǎn)地間的藥材質(zhì)量分布規(guī)律鮮有報道。筆者采集了10省(市)近50個縣(市、區(qū))的野菊花樣品,采用電子舌技術(shù)測定不同產(chǎn)地野菊花藥材的味覺信息,通過UPLC技術(shù)測定各產(chǎn)地藥材的蒙花苷含量,考察野菊花藥材味覺信息與蒙花苷含量的相關(guān)性,探索地區(qū)分布與野菊花有效成分之間的規(guī)律,為簡化野菊花藥材質(zhì)量評價方法、劃分野菊花藥材種植區(qū)提供參考。

    1 材料與方法

    儀器。TS-5000Z系列智能味覺分析系統(tǒng)(日本Insent公司);Waters Hclass超高效液相色譜儀;XS204型電子分析天平(萬分之一);ME36S型電子天平(百萬分之一);SB-400DTY型超聲波多頻清洗機。

    試劑。甲醇、乙腈為色譜純;對照品為蒙花苷,含量≥96.6%,批號111528-201710,中國食品藥品檢定研究院。

    野菊花藥材。2018年11月采集湖北、安徽、河南、江蘇、陜西、山西、湖南、重慶、四川、廣東等10省(市)部分縣域共50批野菊花樣品,經(jīng)華潤三九醫(yī)藥股份有限公司教授級高級工程師韓正洲鑒定為菊科植物野菊(L.)的干燥頭狀花序,樣品信息見表1。

    表1 野菊花藥材采集信息Table 1 Collection information of Chrysanthemi indici Flos

    電子舌測定。

    正極清洗液配制。準(zhǔn)確稱取7.46 g氯化鉀,500 mL蒸餾水?dāng)嚢枞芙猓缓鬁?zhǔn)確加入300 mL無水乙醇,邊攪拌邊加入準(zhǔn)確稱量的0.56 g氫氧化鉀,全部溶解后,轉(zhuǎn)移至1 000 mL容量瓶,定容。

    負(fù)極清洗液配制。準(zhǔn)確量取300 mL無水乙醇,與500 mL蒸餾水振蕩混合,然后加入8.3 mL濃鹽酸攪拌混合后轉(zhuǎn)移至1 000 mL容量瓶,定容。

    參比液配制。準(zhǔn)確稱取2.24 g氯化鉀和0.045 g酒石酸,用500 mL水溶解,然后轉(zhuǎn)移至1 000 mL的容量瓶,定容。

    待測樣品制備。將野菊花藥材樣品烘干、粉碎、過篩后,取約2 g樣品,置于100 mL蒸餾水中,超聲波溶解30 min,補足超聲損失的重量,濾紙過濾。取濾液,直接測試。各樣品的濃度相同。

    電子舌測定。TS-5000Z味覺分析系統(tǒng)測量程序。首先在清洗液中清洗90 s,接著用“...”中的參比液清洗2次,傳感器在平衡位置歸零30 s,達到平衡條件后,開始測試,測試時間30 s;在兩組參比液中分別短暫清洗3 s,傳感器插入新的參比液中測試回味30 s循環(huán)測試4次,去掉第一循環(huán),取后3次平均數(shù)據(jù)作為測試結(jié)果。每次清洗、平衡和測試回味的液體均分布在不同樣品杯中。

    化學(xué)成分分析。

    色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-水-冰醋酸(26∶23∶1)為流動相;檢測波長為334 nm。理論板數(shù)按蒙花苷峰計算應(yīng)不低于3 000。

    對照品溶液制備。取蒙花苷對照品適量,精密稱定,加甲醇溶解(必要時加熱)制成每1 mL含25 μg的溶液,即得。

    供試品溶液制備。取野菊花藥材粉末(過三號篩)約0.25 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇100 mL,稱定重量,加熱回流3 h,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

    蒙花苷含量測定。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μL,注入液相色譜儀,測定蒙花苷含量。

    運用TS-5000Z味覺分析系統(tǒng)自帶的DBMS數(shù)據(jù)庫系統(tǒng),對傳感器采集的原始數(shù)據(jù)進行味覺特征分析。使用SPSS 22.0對感官評價數(shù)據(jù)進行主成分分析、相關(guān)性分析,使用TBtools對數(shù)據(jù)進行聚類分析。

    2 結(jié)果與分析

    電子舌雷達圖分析。每個樣品響應(yīng)的雷達圖能直觀地反映樣品各電極的響應(yīng)值大小,便于對樣品響應(yīng)值情況進行比較。圖1為50個不同產(chǎn)地樣品的味覺指標(biāo)雷達圖,由圖1可知,50個不同產(chǎn)地野菊花樣品中,口味的差異主要表現(xiàn)在酸味、苦味、澀味、鮮味、澀味回味、苦味回味、咸味上,豐富度的差異很小。

    圖1 不同產(chǎn)地野菊花藥材味覺指標(biāo)雷達圖Fig.1 Radar map of taste indicators of Chrysanthemi indici Flos from different origins

    不同產(chǎn)地藥材味覺指標(biāo)及蒙花苷含量相關(guān)性分析。從不同產(chǎn)地野菊花味覺指標(biāo)與蒙花苷之間的相關(guān)性分析(表2)可以看出,酸味與苦味、澀味、苦味回味、鮮味、咸味呈極顯著負(fù)相關(guān),酸味大的樣品苦味、澀味、苦味回味、鮮味、咸味等都很弱;酸味與豐富度呈顯著正相關(guān),酸味大的樣品豐富度也高??辔杜c澀味、苦味回味、鮮味、蒙花苷含量呈極顯著正相關(guān),苦味大的樣品澀味、苦味回味和鮮味也高,同時蒙花苷含量也高;苦味與豐富度呈極顯著負(fù)相關(guān),苦味大的樣品豐富度低。澀味與鮮味呈極顯著正相關(guān),澀味強的樣品鮮味高??辔痘匚杜c鮮味、咸味分別呈顯著正相關(guān)和極顯著正相關(guān),苦味回味強的樣品鮮味和咸味也高;苦味回味與豐富度呈極顯著負(fù)相關(guān)。澀味回味與其他指標(biāo)之間的相關(guān)性均較弱,均沒有達到顯著相關(guān)水平。鮮味與咸味呈極顯著正相關(guān),鮮味大的樣品咸味也大。豐富度和咸味呈極顯著負(fù)相關(guān),豐富度高的樣品咸味低。由上述分析可知,幾個味覺指標(biāo)中,只有苦味與蒙花苷含量存在顯著相關(guān)性,且呈極顯著正相關(guān)(<0.01)。

    表2 野菊花不同味覺指標(biāo)與蒙花苷含量相關(guān)性分析Table 2 Correlation analysis between different taste indexes of Chrysanthemi indici Flos and linarin content

    主成分分析。試驗中不同產(chǎn)地野菊花的8個味覺指標(biāo)的主成分分析的特征值見表3,特征值≥1的特征值有3個,累計方差貢獻率達80.289%。由于主成分是原始性狀的線性組合函數(shù),根據(jù)計算樣本相關(guān)矩陣的特征向量(表3)可給出主成分的函數(shù)式,具體如下:

    =-0225+0209+0146+0217-0048+0188-0155+0194

    =-0146-0136+0467-0190+0322+0315+0448-0027

    =0125+0309+0270+0208+0574-0356-0241-0330

    由以上函數(shù)式可知,在第一主成分中,(酸味)有最大的負(fù)系數(shù)值,其次是苦味回味()和(苦味)有較大的正系數(shù),表明第一主成分是反映酸味、苦味回味、苦味的指標(biāo);在第二主成分中,(澀味)的系數(shù)最大,其次是(豐富度),表明第二主成分是反映澀味和豐富度的指標(biāo);第三主成分中,系數(shù)最大的是(澀味回味),其次是(鮮味)有較大的負(fù)系數(shù)值,表明第三主成分是反映澀味回味、鮮味的指標(biāo)。

    表3 野菊花主要味覺指標(biāo)主成分分析的特征值和特征向量Table 3 Eigenvalues and eigenvectors of principal component analysis of the main taste indicators of Chrysanthemi indici Flos

    不同來源野菊花蒙花苷含量分析。不同產(chǎn)地的野菊花藥材蒙花苷含量差異較大,將不同產(chǎn)地野菊花供試品溶液進樣測定,結(jié)果如圖2所示。

    不同來源的野菊花藥材蒙花苷含量結(jié)果見表4,蒙花苷含量最高的為樣品HNXX2-02,為3.83%,來自河南省信陽市息縣,最低的樣品未檢出蒙花苷,不同產(chǎn)地的野菊花藥材質(zhì)量存在較大差異。參照2020年版《中國藥典》中對于野菊花蒙花苷含量的要求(不得少于0.80%),50個樣品的合格率僅為56%,表明野生野菊花藥材存在較大的質(zhì)量問題。

    圖2 蒙花苷對照品和野菊花樣品UPLC圖Fig.2 UPLC diagrams of the reference substance and Chrysanthemi indici Flos samples

    表4 不同來源野菊花藥材蒙花苷含量分析(n=15)Table 4 Analysis of the linarin content in Chrysanthemi indici Flos from different sources

    不同產(chǎn)地野菊花蒙花苷含量聚類分析。對不同產(chǎn)地野菊花樣品蒙花苷含量進行聚類分析,結(jié)果如圖3所示。由圖3可知,50份不同產(chǎn)地的野菊花樣品可以聚為4個類群。第Ⅰ個類群共5份樣品,包括HNXX2-02、HBJL-01、HBDW-01、SXYC-01和SXRC-01,為高含量類群,蒙花苷含量為3.28%~3.83%;第Ⅱ個類群共19份樣品,包括AHZY-01、AHWW-01、AHJZ-01、AHTC-01、AHGY-01、AHSC-01、HBYX-03、HBQC-02、HBDW-02、HBTF-02、HBYX-02、HBWF-01、HBYX-01、HNLS-01、HNHC-01、HNXX1-01、HNXX2-01、HNGS-01和SXYJ-01,為中含量類群,蒙花苷含量為2.28%~3.05%;第Ⅲ個類群共4份樣品,包括AHSS-01、HNXC-01、AHWJ-01和AHJZ-02號樣品,蒙花苷含量為1.23%~1.59%,為較低含量類群;第Ⅳ個類群共22份樣品,包括AHLQ-01、AHLJ-01、AHHQ-01、AHFN-01、HBTF-01、HBQJ-01、HBMC-01、HBHS-01、HNLT-01、HBQC-01、SXCG-01、SXHY-01、SXXX-01、SXYX-01、HNSC-01、HNTJ-01、HNBA-01、JSLH-01、JSXW-01、SCMY-01、CQWX-01和GDPY-01樣品,為低含量類群,低于國家藥典標(biāo)準(zhǔn)(0.80%)。

    表5列舉了不同類群的蒙花苷含量及其分布區(qū)域,由表5可知,第Ⅰ個類群和第Ⅱ個類群蒙花苷含量較高(蒙花苷含量2.50%以上),按照現(xiàn)行版藥典指標(biāo)項來看屬于優(yōu)質(zhì)野菊花藥材,上述2個類群共包括24份樣品,主要來源于河南(6份,占比25.0%)、湖北(9份、占比37.5%)、安徽(6份,占比25.0%)和山西(3份,12.5%)4個省份,表明河南、湖北、安徽3個省份為野菊花藥材優(yōu)質(zhì)產(chǎn)區(qū)。

    圖 3 不同來源野菊花蒙花苷含量聚類分析Fig.3 Cluster analysis of the linarin content in Chrysanthemi indici Flos from different sources

    表5 不同類群野菊花蒙花苷含量及其分布區(qū)域(n=15)

    對不同產(chǎn)地的野菊花樣品味覺信息及蒙花苷含量數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化后進行聚類分析,得到圖4的聚類圖。聚類結(jié)果顯示(表6),50個不同縣(市)的野菊花樣品可以聚為4個類群。第 Ⅰ 類群共6份樣品,主要表現(xiàn)為澀味、鮮味、豐富度高,蒙花苷含量較低;第 Ⅱ 類群共12份樣品,主要表現(xiàn)為苦味、苦味回味、咸味較高,蒙花苷含量較高;第Ⅲ類群共11份樣品,表現(xiàn)為酸味和豐富度較高,蒙花苷含量最低;第Ⅳ類群共21份樣品,主要表現(xiàn)為酸味、苦味和苦味回味較高,蒙花苷含量最高。

    圖4 不同來源野菊花味覺信息與蒙花苷含量聚類Fig.4 Clustering of taste information and linarin content in Chrysanthemi indici Flos from different sources

    從地區(qū)分布來看,此次采集的野菊花樣品主要來源于安徽、河南、湖北、陜西、山西等省份,其中安徽樣品13份,蒙花苷含量合格率69.23%,河南樣品9份,合格率77.78%,湖北樣品15份,合格率60.00%,其他省份樣品量較少暫不統(tǒng)計合格率。研究結(jié)果表明,安徽、河南、湖北等省份的蒙花苷含量合格率較高,這與魏民等的研究結(jié)果一致。

    3 討論

    電子舌技術(shù)是近年來在醫(yī)藥領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的一項技術(shù),主要用于不同味道中藥材鑒別研究、藥材味覺信息與主要化學(xué)成分相關(guān)性研究、藥材掩味研究等,對于快速鑒別中藥材、評價藥材質(zhì)量等方面具有借鑒意義。該研究采用電子舌技術(shù)對來自安徽、河南、湖北、湖南、陜西、廣東等10個省(市)50份野菊花樣品進行味覺對比,發(fā)現(xiàn)50個產(chǎn)地藥材味覺差異主要表現(xiàn)在酸味、苦味、澀味、鮮味、澀味回味、苦味回味、咸味上,豐富度差異較?。煌ㄟ^進行味覺信息與蒙花苷含量的相關(guān)性研究,發(fā)現(xiàn)苦味指標(biāo)與蒙花苷含量具有極顯著正相關(guān)(<001),為野菊花藥材質(zhì)量控制提供了新思路。

    該研究通過UPLC技術(shù)測定50批不同產(chǎn)地的野菊花藥材有效成分蒙花苷含量,通過對蒙花苷含量聚類分析,發(fā)現(xiàn)50批藥材可以聚為4大類群,其中第Ⅰ、Ⅱ類群為高含量類群,從地區(qū)分布來看主要為河南、湖北和安徽3個省份,表明這3個省份為優(yōu)質(zhì)野菊花藥材分布的省份,特別是大別山區(qū)一帶的信陽、孝感、安慶、黃岡、六安等市所轄縣含量較高,印證了大別山區(qū)歷來是野菊花優(yōu)質(zhì)藥材產(chǎn)區(qū)的結(jié)論。從調(diào)研省份的野菊花藥材蒙花苷合格率來看,與上述結(jié)論相似,河南(77.78%)、安徽(69.23%)和湖北(60.00%)3個省份均在60.00%以上。

    表6 不同類群味覺信息值及蒙花苷含量標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)(n=15)Table 6 Standardized data of taste information value and content of linarin in different groups

    藥用植物次生代謝產(chǎn)物作為評價藥材質(zhì)量的重要指標(biāo),其合成和積累除受自身遺傳特性決定外,很大程度上受生長環(huán)境、氣候、土壤等因素的直接或間接影響。該研究通過對不同產(chǎn)地的野菊花藥材有效成分進行對比研究,分析不同地區(qū)野菊花藥材有效成分的分布規(guī)律,對于劃定野菊花藥材種植區(qū)劃、實現(xiàn)野菊花優(yōu)質(zhì)、規(guī)范化栽培具有重要意義。

    4 結(jié)論

    該研究采用電子舌味覺分析系統(tǒng),測定不同產(chǎn)地野菊花藥材苦味、酸味、澀味、苦味回味、澀味回味、鮮味、豐富度和咸味8項味覺指標(biāo),總結(jié)了不同產(chǎn)地野菊花藥材在味覺上的差異;同時通過對不同產(chǎn)地野菊花藥材蒙花苷含量測定,結(jié)合電子舌味覺數(shù)據(jù),考察了野菊花蒙花苷含量與味覺信息的相關(guān)性,探索了地區(qū)分布與野菊花蒙花苷含量間的規(guī)律,得出如下結(jié)論:

    (1)不同產(chǎn)地野菊花藥材味覺的差異主要體現(xiàn)在酸味、苦味、澀味、鮮味、澀味回味、苦味回味、咸味上,豐富度的差異較小。

    (2)對不同味覺指標(biāo)、蒙花苷含量進行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),野菊花藥材苦味指標(biāo)與蒙花苷含量呈極顯著正相關(guān)(<0.01),同時不同味覺指標(biāo)間存在一定相關(guān)性。

    (3)對不同產(chǎn)地野菊花以蒙花苷含量聚類可以分為4個類群,第Ⅰ、Ⅱ類群為高含量類群,主要分布在河南、湖北和安徽3個省份,其中含量最高的樣品來源于河南省信陽市息縣(3.83%)。

    (4)對不同產(chǎn)地野菊花味覺信息與蒙花苷含量聚類分析,可以分為4個類群,其中第Ⅱ類群和第Ⅳ類群蒙花苷含量較高,味覺指標(biāo)方面苦味和苦味回味較高。

    (5)從調(diào)研省份的藥材蒙花苷合格率來看,安徽、河南、湖北3個省份合格率較高。

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