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    硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)染色法檢測(cè)幽門螺旋桿菌效果評(píng)價(jià)

    2022-07-12 07:51:48鄧士杰喻朝霞
    關(guān)鍵詞:冰醋酸染液亞甲藍(lán)

    鄧士杰,喻朝霞

    (安徽醫(yī)科大學(xué)附屬安慶市第一人民醫(yī)院 病理科,安徽 安慶 246000)

    研究發(fā)現(xiàn)幽門螺旋桿菌(Helicobacterpylorus,Hp)感染與80%的胃潰瘍和90%的十二指腸潰瘍有關(guān)[1],各個(gè)年齡段的人群均有感染[2],在發(fā)展中國(guó)家感染率為50.8%,發(fā)達(dá)國(guó)家感染率為34.7%[3]。我國(guó)人口眾多,感染基數(shù)大,因此必須重視Hp的早診早治。上級(jí)醫(yī)院開(kāi)展較多的是免疫組織化學(xué)法,而Giemsa法和硼酸亞甲藍(lán)法仍然是基層醫(yī)院較為經(jīng)濟(jì)可靠的檢測(cè)方法[4-5]。硼酸亞甲藍(lán)法染色后菌體淡染呈針尖樣,點(diǎn)狀排列,需要在高倍鏡下仔細(xì)觀察,大量閱片后易引起視覺(jué)疲勞。如果將硼酸鈉替換硼酸配置染液同時(shí)加入3%冰醋酸,筆者發(fā)現(xiàn)菌體顏色較深,易于分辨。本研究擬對(duì)兩種染色方法進(jìn)行比較,探討硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)法在Hp檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。

    1 資料與方法

    1.1 標(biāo)本選取與分組 收集安慶市第一人民醫(yī)院病理科2019~2020年胃竇部活檢Hp確診標(biāo)本62例,性別和年齡不限。根據(jù)Giemsa染色情況和《中國(guó)慢性胃炎共識(shí)意見(jiàn)2017.上?!穂6]將確診標(biāo)本分成輕度感染組(32例)、中度感染組(19例)和重度感染組(11例),每組連續(xù)切片2張,分別行硼酸亞甲藍(lán)染色和硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)染色。

    1.2 主要試劑及設(shè)備 亞甲基藍(lán)(比克曼生物),硼酸與硼酸鈉(國(guó)藥集團(tuán)),蒸餾水,冰醋酸,徠卡2235切片機(jī),萊卡sp300脫水機(jī),奧林巴斯顯微鏡。

    1.3 方法

    1.3.1 試劑配制 硼酸亞甲藍(lán)法:蒸餾水400 mL中加入硼酸2 g,攪拌至完全溶解,加入美藍(lán)4 g,充分?jǐn)嚢杌旌虾筮^(guò)濾,盛入避光密封瓶,置于4℃冰箱保存。硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)法:蒸餾水400 mL中加入硼酸鈉2 g,攪拌至完全溶解,加入美藍(lán)4 g,充分?jǐn)嚢杌旌虾筮^(guò)濾,盛入避光密封瓶,加入3%冰醋酸5 mL,室溫保存。

    1.3.2 Hp感染程度判讀標(biāo)準(zhǔn) 按《中國(guó)慢性胃炎共識(shí)意見(jiàn)2017.上?!穂6]判讀Hp,觀察胃黏膜黏液層、表面上皮、小凹上皮和腺管上皮表面的Hp。無(wú):特殊染色片上未見(jiàn)Hp;輕度:偶見(jiàn)或小于標(biāo)本全長(zhǎng)1/3有少數(shù)Hp;中度:Hp分布超過(guò)標(biāo)本全長(zhǎng)1/3而未達(dá)2/3或連續(xù)、薄而稀疏地存在于上皮表面;重度:Hp成堆存在,基本分布于標(biāo)本全長(zhǎng)。

    1.3.3 染色步驟 硼酸亞甲藍(lán)法:切片脫蠟至水,硼酸亞甲藍(lán)染液2 min,蒸餾水洗10 s,烘干,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封片。硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)法:切片脫蠟至水,硼酸鈉亞甲藍(lán)染液15 s,水洗3 s,95%乙醇分化2 s,水洗3 s,快速脫水10 s,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封片。

    1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)數(shù)資料用百分比表示,采用矯正配對(duì)χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩種方法染色效果 圖1A顯示,硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)400倍鏡下,Hp呈藍(lán)色,染色較深,菌體清晰分布于胃小凹中;圖1B顯示,硼酸亞甲藍(lán)染色400倍鏡下,Hp呈淡藍(lán)色,菌體模糊不清。

    圖1 硼酸鈉-冰醋酸、硼酸亞甲藍(lán)染色(10×40)

    2.2 兩種染色方法在不同分組中的檢出率 重度組:兩種染色方法檢出率均為100%(11/11)。中度組:硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)染色檢出率為100%(19/19);硼酸亞甲藍(lán)染色檢出率為89.47%(17/19)。輕度組:硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)檢出率為90.63%(29/32);硼酸亞甲藍(lán)染色檢出率為68.75%(22/32),且硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)檢出率高于硼酸亞甲藍(lán),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    表1 兩種染色方法在3組中染色情況比較

    3 討論

    Hp檢測(cè)方法較多,尿素呼氣試驗(yàn)方法(urea breath test,UBT)快捷,適用于兒童和孕婦[7],但是價(jià)格較貴;N15-尿氨排出試驗(yàn)與UBT原理相同,易受肝腎功能[8]和食用益生菌影響[9]而出現(xiàn)假陰性結(jié)果;血清學(xué)檢查具有較高的靈敏度和特異度,但Hp根除治療后抗體能存在6個(gè)月以上[10],因此血清學(xué)檢查不能反映現(xiàn)癥感染。組織學(xué)檢測(cè)被認(rèn)為是診斷Hp的金標(biāo)準(zhǔn),且與胃黏膜炎癥反應(yīng)呈正相關(guān)[11]。目前臨床病理Hp檢查方法使用較多的是免疫組織化學(xué)法和特殊染色法,而本研究使用硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)染色成本低廉,方法簡(jiǎn)單快捷,易普及。

    從染色時(shí)間看,硼酸亞甲藍(lán)染色時(shí)間>2 min,而硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)染色時(shí)間僅為33 s,這將大大減輕技術(shù)員的工作負(fù)擔(dān)。硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)染液時(shí)長(zhǎng)至少需要15 s,尤其輕度感染菌體較少的情況下,如果時(shí)間過(guò)短染液結(jié)合不牢,經(jīng)過(guò)95%乙醇洗脫和下一步酒精梯度脫水后使得菌體染色變淡,容易出現(xiàn)假陰性。硼酸亞甲藍(lán)染液染色時(shí)長(zhǎng)跟菌體著色深淺有關(guān),過(guò)長(zhǎng)的染色時(shí)間使得染液過(guò)多結(jié)合于菌體和胃黏膜表面,由于直接烘干,背景常有透明顆粒和藍(lán)色顆粒,嚴(yán)重影響Hp的判讀。硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)染色經(jīng)95%酒精洗去黏膜黏液層、表面上皮、小凹上皮和腺管上皮多余染液,使得菌體清晰可辨。

    Hp中度感染組和重度感染組兩種染色方法均具有較高的檢出率,可能與胃黏膜內(nèi)菌體數(shù)量較多,容易檢出有關(guān)。輕度組中硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)染色檢出率高于硼酸亞甲藍(lán)染色,筆者認(rèn)為可能原因是弱堿性的硼酸鈉配置的染液易與呈弱酸性的Hp菌體表面結(jié)合,不易被95%酒精洗脫使菌體更加清晰,即使胃黏膜內(nèi)有少量的Hp菌體也容易被檢出。兩種檢測(cè)方法在輕度感染組檢出率都不同程度降低,可能原因是蠟塊經(jīng)過(guò)多次深切后,殘存Hp菌體較少,使得兩種染色方法的檢出率下降。通過(guò)初次切片保留較多的Hp菌體和提高樣本量來(lái)進(jìn)一步觀察兩種染色方法在輕度感染組的染色效果,這將是我們下一步的工作重點(diǎn)。

    綜上所述,雖然兩種染色方法都能滿足常規(guī)診斷需要,但是硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)染色無(wú)論染色時(shí)間還是染色效果均優(yōu)于硼酸亞甲藍(lán)染色,基層醫(yī)院可以結(jié)合自身實(shí)際情況采用硼酸鈉-冰醋酸亞甲藍(lán)染色來(lái)提高Hp的檢出率。

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