酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)和脂肪代謝的影響

曹 實(shí) 楊霖坤 魯康樂 張春曉 王 玲 李學(xué)山 宋 凱

(集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廈門市飼料檢測(cè)與安全評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廈門 361021)

花鱸(Lateolabraxmaculatus)又稱海鱸、七星鱸、寨花，屬鱸形目，真鱸科，花鱸屬，是廣溫廣鹽性魚類，分布于中國(guó)、韓國(guó)及日本的近岸淺海，在我國(guó)的山東、浙江、福建、廣東等沿海地區(qū)均有分布[1]?；|具有生長(zhǎng)速度快、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、肉質(zhì)鮮美、抗病性強(qiáng)等特點(diǎn)，為我國(guó)重要經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖品種之一[2]。根據(jù)《2020中國(guó)漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒》的報(bào)告，2019年我國(guó)花鱸產(chǎn)量18.02萬t[3]。

近年來，隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展，養(yǎng)殖總量逐年攀升，對(duì)魚粉的需要量越來越大，而受到海洋環(huán)境惡化和厄爾尼諾現(xiàn)象的影響，魚粉產(chǎn)量下降，導(dǎo)致魚粉供不應(yīng)求，且價(jià)格居高不下，因此尋求合適的蛋白質(zhì)源替代魚粉成為行業(yè)內(nèi)研究熱點(diǎn)。大豆具有蛋白質(zhì)含量高、氨基酸種類豐富、產(chǎn)量高、價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn)，為水產(chǎn)飼料中常見的植物蛋白質(zhì)源之一[4]。但是大豆中存在多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，如抗原蛋白(大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白)、胰蛋白酶抑制因子、凝集素、植酸和皂苷等，對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)產(chǎn)生不利影響，如干擾動(dòng)物腸道的生理功能、降低對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，在幼齡動(dòng)物中可導(dǎo)致腹瀉甚至死亡[5-6]。因此，降低大豆蛋白的抗?fàn)I養(yǎng)因子水平是難點(diǎn)之一。酶解大豆分離蛋白是大豆蛋白通過降解工藝生產(chǎn)，不僅可以降低抗?fàn)I養(yǎng)因子的毒性，而且富含的多肽易被動(dòng)物消化吸收，從而提高其適口性與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率[7-8]。同時(shí)也有一些研究發(fā)現(xiàn)酶解大豆分離蛋白中的大豆多肽通過影響高密度脂蛋白受體(LDL-R)的轉(zhuǎn)運(yùn)以及抑制肝細(xì)胞中脂蛋白分泌、甾醇生物合成等調(diào)節(jié)脂肪代謝[9-10]。因此，本試驗(yàn)通過研究酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)和脂肪代謝的影響，為大豆蛋白在花鱸等肉食性魚類飼料中的利用提供依據(jù)，以及為節(jié)約魚粉資源、降低飼料成本、發(fā)展綠色健康的花鱸養(yǎng)殖業(yè)提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)的酶解大豆分離蛋白(粗蛋白質(zhì)含量約為82.7%)是由大豆分離蛋白經(jīng)過堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶等復(fù)合酶水解制成(料水比1∶20，pH=8.5，50 ℃，作用時(shí)間4 h)。經(jīng)大豆球蛋白檢測(cè)試劑盒和β-伴大豆球蛋白檢測(cè)試劑盒檢測(cè)(北京龍科方舟生物工程技術(shù)有限公司)，大豆分離蛋白酶解結(jié)果見表1。

表1 大豆分離蛋白酶解結(jié)果

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和飼料

將225尾初始體重為(9.0±0.5) g的花鱸隨機(jī)分為3組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)25尾魚。根據(jù)之前大豆蛋白替代魚粉在花鱸上的研究結(jié)果[11-12]，將試驗(yàn)魚分為魚粉組(FM組)、酶解大豆分離蛋白替代25%魚粉組(ESPI25組)、酶解大豆分離蛋白替代50%魚粉組(EPSI50組)。根據(jù)花鱸的營(yíng)養(yǎng)需求，以魚粉、酶解大豆分離蛋白、雞肉粉和谷朊粉為蛋白質(zhì)源，以魚油、豆油和卵磷脂為脂肪源，配制3種等氮等脂的飼料。另用晶體氨基酸調(diào)平蛋氨酸與賴氨酸，以三氧化二釔作為外源指示劑。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表2。

表2 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1)礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼料提供 Mineral premix provided the following per kg of diets：MgSO4·H2O 4 000 mg，MnSO4·H2O 50 mg，KCl (1%) 100 mg，CoCl2 (1%) 100 mg，CuSO4·5H2O 20 mg，F(xiàn)eSO4·H2O 260 mg，ZnSO4·H2O 150 mg，Na2SeO3 (1%) 50 mg。

試驗(yàn)飼料制作于集美大學(xué)水產(chǎn)試驗(yàn)場(chǎng)的飼料加工車間，各飼料原料使用超微粉碎機(jī)粉碎后過60目篩。再將原料按配比定量采用逐級(jí)擴(kuò)大法混合均勻，加入30%左右的水拌勻，使用雙螺旋桿飼料擠條機(jī)擠條，經(jīng)飼料造粒機(jī)制作成2種不同粒徑(1.0和2.5 mm)的硬顆粒飼料，將造粒后的飼料放置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中45 ℃恒溫干燥至水分含量為7%～9%，取出冷卻后分裝于密封袋中，置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用花鱸魚苗購自漳州一家苗種場(chǎng)，將魚苗運(yùn)至集美大學(xué)水產(chǎn)試驗(yàn)場(chǎng)后暫養(yǎng)于體積為1 000 L的養(yǎng)殖桶，使用商品飼料馴化14 d，馴化期間逐漸加入淡水，使花鱸適應(yīng)淡水環(huán)境，養(yǎng)殖試驗(yàn)在淡水環(huán)境中進(jìn)行。待魚苗適應(yīng)試驗(yàn)條件后，挑選225尾體格健壯、形態(tài)均一的花鱸，平均體重(9.0±0.5) g，隨機(jī)分配到9個(gè)容積為200 L塑料桶，每缸25尾魚。養(yǎng)殖試驗(yàn)持續(xù)8周。

每日定時(shí)飽食投喂2次(08:00、18:00)，記錄每個(gè)試驗(yàn)缸的攝食量。試驗(yàn)期間記錄死魚數(shù)量并稱重，適量換水。養(yǎng)殖條件為：12 h光照12 h黑暗，保持水溫(27±1) ℃，溶解氧含量≥8.0 mg/L，氨氮含量<0.1 mg/L，pH 7.5～8.5。

1.4 樣品收集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，停飼24 h，分別稱量魚體的重量，用于計(jì)算生長(zhǎng)性能指標(biāo)。每缸取12尾魚麻醉(丁香酚1∶10 000)后用無菌的1 mL注射器進(jìn)行尾靜脈取血，取出的血液于4 ℃冰箱靜置12 h，2 500 r/min離心10 min取上層血清，置于-80 ℃冰箱保存，用于測(cè)定血清相關(guān)指標(biāo)。每缸取12尾魚稱量個(gè)體重和體長(zhǎng)，解剖分離內(nèi)臟團(tuán)、肝臟、腹脂，分別稱重，以計(jì)算形體指標(biāo)。解剖分離12尾魚的肝臟，其中9尾魚的肝臟取出后迅速裝入凍存管，用液氮速凍后轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱保存，用于肝臟相關(guān)指標(biāo)測(cè)定。將每缸剩余的魚體稱重后保存在-20 ℃冰箱中，用作分析全魚的體組成。

1.5 指標(biāo)測(cè)定

1.5.1 生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率

生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的相關(guān)計(jì)算公式如下：

增重率(weight gain rate, WGR, %)=[(Wt-W0)/W0]×100；特定生長(zhǎng)率(specific growth rate, SGR, %/d)=[(lnWt-lnW0)/t]×100；飼料效率(feed efficiency, FE)=(Wt-W0)/Wf；攝食量(feeding intake, FI, g/尾)=(Wf/Nf)×100；腹脂率(abdominal fat rate, AFR, %)=(Wa/W)×100；肥滿度(condition factor, CF, g/cm3)=(W/L3)×100；肝體比(hepatosomatic index, HSI, %)=(Wl/W)×100；臟體比(viscerosomatic index, VSI, %)=(Wg/W)×100；存活率(survival rate, SR, %)=(Nf/Ni)×100；某營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率(apparent digestibility coefficients, ADC, %)=[1-(飼料中三氧化二釔含量×糞便中該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量)/(糞便中三氧化二釔含量×飼料中該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量)]×100。

式中：W0為初始魚總重量(g)；Wt為終末魚總重量(g)；W為單尾魚重量(g)；Wf為攝入的飼料總重量(g)；Wa為單尾魚腹部脂肪重量(g)；Wl為單尾魚肝臟重量(g)；Wg為單尾魚內(nèi)臟團(tuán)重量(g)；t為飼喂天數(shù)；L為魚體長(zhǎng)(cm)；Ni為初始魚數(shù)量；Nf為終末魚數(shù)量。

1.5.2 體組成

全魚的粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法(GB/T 5009.5—2003)測(cè)定，粗脂肪含量采用索氏抽提法(GB/T 5009.6—2003)測(cè)定，粗灰分含量采用馬福爐灰化法(GB/T 5009.4—2003)測(cè)定，水分含量采用103 ℃恒溫干燥失重法(GB/T 5009.3—2003)測(cè)定。

1.5.3 血清生化指標(biāo)

血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量使用試劑盒測(cè)定，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，具體操作步驟按照說明書進(jìn)行。

1.5.4 肝臟脂肪代謝相關(guān)指標(biāo)

肝臟甘油三酯、總膽固醇含量使用試劑盒測(cè)定，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，具體操作步驟按照說明書進(jìn)行。

1.5.5 肝臟RNA提取及實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)

肝臟組織樣本總RNA的提取使用試劑盒(FastPure Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit，南京諾唯贊生物科技股份有限公司)，具體操作步驟按照說明書進(jìn)行。肝臟RNA逆轉(zhuǎn)錄使用試劑盒(TranScript All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR，北京邁瑞達(dá)科技有限公司)，具體操作步驟按照說明書進(jìn)行。RT-qPCR使用試劑盒(PerfectStart Green qPCR SuperMix，北京邁瑞達(dá)科技有限公司)在Thermal Cycler Applied Biosystems QuantStudio 6&7實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)Bio-Rad公司)上進(jìn)行操作，具體操作步驟按照說明書進(jìn)行。使用β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)作為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCt法計(jì)算各基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量，花鱸肝臟脂肪代謝相關(guān)基因引物序列見表3。

表3 花鱸肝臟脂肪代謝相關(guān)基因引物序列

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2016歸納整理后，使用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，用Tukey檢驗(yàn)法進(jìn)行多重比較，差異顯著水平為P<0.05。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié) 果

2.1 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)和體組成的影響

由表4可知，F(xiàn)M組的增重率、特定生長(zhǎng)率和攝食量顯著高于EPSI50組(P<0.05)。各組之間飼料效率、腹脂率、肥滿度、肝體比、臟體比和存活率均無顯著差異(P>0.05)。

表4 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸生長(zhǎng)性能和形體指標(biāo)的影響

由表5可知，各組之間全魚的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分含量均無顯著差異(P>0.05)。

表5 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸體組成的影響(干物質(zhì)基礎(chǔ))

2.2 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

由表6可知，F(xiàn)M組的粗脂肪表觀消化率顯著高于EPSI50組(P<0.05)。各組之間干物質(zhì)和粗蛋白質(zhì)表觀消化率均無顯著差異(P>0.05)。

表6 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

2.3 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸血清生化指標(biāo)的影響

由表7可知，隨著飼料中酶解大豆分離蛋白替代魚粉比例的增加，血清甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量呈降低趨勢(shì)。ESPI25組和ESPI50組的血清總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇和高密度脂蛋白膽固醇含量顯著低于FM組(P<0.05)，且ESPI50組的血清低密度脂蛋白膽固醇含量顯著低于ESPI25組(P<0.05)。

表7 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸血清生化指標(biāo)的影響

2.4 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸肝臟脂肪代謝的影響

2.4.1 各試驗(yàn)組花鱸肝臟油紅染色

各試驗(yàn)組花鱸肝臟油紅染色見圖1，肝臟油紅染色切片顯示，F(xiàn)M組花鱸肝臟的脂肪沉積現(xiàn)象嚴(yán)重，紅色脂滴密集且面積較大；用酶解大豆分離蛋白替代魚粉后，ESPI25組和ESPI50組花鱸肝臟的紅色脂滴面積減小，密度降低。

圖1 各試驗(yàn)組花鱸肝臟油紅染色

2.4.2 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸肝臟甘油三酯和總膽固醇含量的影響

由表8可知，ESPI50組的肝臟甘油三酯和總膽固醇含量顯著低于FM組(P<0.05)，且ESPI50組的肝臟甘油三酯含量顯著低于ESPI25組(P<0.05)。ESPI25組的肝臟總膽固醇含量顯著低于FM組(P<0.05)。

表8 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸肝臟甘油三酯和總膽固醇含量的影響

2.4.3 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸肝臟脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

由圖1、圖2和圖3可知，在脂肪合成相關(guān)基因方面，ESPI25組和ESPI50組的肝臟乙酰輔酶A羧化酶1(ACC1)、脂肪酸合成酶(FAS)、固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白-1c(SREBP-1c)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)、3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMGCR)、碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(ChREBP)的mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于FM組(P<0.05)。在脂肪分解相關(guān)基因方面， ESPI25組和ESPI50組的肝臟腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)、過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)的mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于FM組(P<0.05)。在膽汁酸合成相關(guān)基因方面，各組之間肝臟膽固醇7α羥化酶(CYP7A1)和膽固醇12α羥化酶(CYP8B1)的mRNA相對(duì)表達(dá)量無顯著差異(P>0.05)。

數(shù)據(jù)柱標(biāo)相同小寫字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下圖同。

圖3 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸肝臟脂肪分解相關(guān)基因表達(dá)的影響

3 討 論

3.1 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸生長(zhǎng)性能的影響

酶解大豆分離蛋白具有降低其抗?fàn)I養(yǎng)因子水平和富含多肽等優(yōu)點(diǎn)被廣泛關(guān)注，但當(dāng)替代魚粉的比例超過一定量時(shí)，同樣也會(huì)對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)造成影響。本試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)飼料中酶解大豆分離蛋白替代50%魚粉時(shí)，花鱸的攝食量顯著降低，與劉興旺等[13]在大菱鲆、Wang等[14]在斜帶石斑魚的研究結(jié)果一致。魚類通過對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收來促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)，增重率和特定生長(zhǎng)率是衡量生長(zhǎng)情況的重要指標(biāo)。Mamauag等[15]在飼料中用酶解大豆多肽替代魚粉，研究其對(duì)牙鲆幼魚生長(zhǎng)情況的影響，當(dāng)酶解大豆多肽替代魚粉超過30%時(shí)，牙鲆幼魚的增重率和特定生長(zhǎng)率顯著下降。在本試驗(yàn)中，飼料中酶解大豆分離蛋白替代25%和50%魚粉時(shí)，花鱸的增重率和特定生長(zhǎng)率均降低，且在酶解大豆分離蛋白替代50%魚粉時(shí)顯著降低。原因可能有以下2方面：1)過多的酶解大豆分離蛋白影響飼料的適口性，造成攝食量下降，魚體攝入能量減少，無法滿足生長(zhǎng)所需；2)魚類攝食過多的酶解大豆分離蛋白使魚體腸道多肽和氨基酸的流入增加，導(dǎo)致積累速率不均勻，從而使氨基酸的代謝和蛋白質(zhì)合成的速率不同，形成氮負(fù)平衡，降低了魚體的生長(zhǎng)。

圖4 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸肝臟膽汁酸合成相關(guān)基因表達(dá)的影響

消化率是指被動(dòng)物消化道吸收的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)占攝入食物總量的百分比，反映了魚類對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收情況，是評(píng)價(jià)飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)[16]。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼料中酶解大豆分離蛋白替代50%魚粉時(shí)會(huì)顯著降低粗脂肪表觀消化率，這說明酶解大豆分離蛋白會(huì)影響魚類對(duì)脂肪的消化吸收，減少機(jī)體對(duì)飼料脂肪的有效攝入，可能是影響體內(nèi)脂肪代謝的一個(gè)原因。

3.2 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸血清生化指標(biāo)的影響

研究發(fā)現(xiàn)，一些植物蛋白質(zhì)有降低血清總膽固醇含量、影響膽固醇代謝的作用[17-18]，Aoyama等[19]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加大豆蛋白可以降低飲食性肥胖大鼠和遺傳性肥胖小鼠的機(jī)體脂肪含量，促進(jìn)機(jī)體脂肪代謝。在水產(chǎn)動(dòng)物上，Kaushik等[20]用大豆蛋白替代虹鱒飼料中的魚粉，發(fā)現(xiàn)虹鱒血清總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量顯著降低。劉偉等[21]、馮建等[22]用大豆?jié)饪s蛋白替代魚粉，中華鱘和大黃魚幼魚血清總膽固醇和甘油三酯含量均隨著大豆?jié)饪s蛋白替代比例的升高而降低。本試驗(yàn)結(jié)果與上述試驗(yàn)結(jié)果類似，隨著酶解大豆分離蛋白替代魚粉比例的升高，花鱸血清甘油三脂、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇含量均顯著下降。這可能是因?yàn)槊附獯蠖狗蛛x蛋白提高了花鱸脂質(zhì)代謝的能力，使血脂降低，這在肝臟脂肪代謝中也得到了印證。

3.3 酶解大豆分離蛋白替代魚粉對(duì)花鱸肝臟脂肪代謝的影響

肝臟是魚類脂肪代謝的主要器官，而肝臟脂肪的異常沉積易導(dǎo)致魚類一系列的生理功能障礙。在本試驗(yàn)中，肝臟油紅切片可以直觀顯示FM組肝臟脂肪含量明顯高于ESPI25組和ESPI50組。對(duì)肝臟甘油三酯和總膽固醇含量的測(cè)定也說明，二者隨著飼料中酶解大豆分離蛋白替代魚粉比例的升高而降低，表明酶解大豆分離蛋白可緩解肝臟中脂肪的異常沉積。在此過程中許多關(guān)鍵的脂肪代謝調(diào)控因子和通路也可能發(fā)揮重要的作用。SREBP-1c是維持細(xì)胞內(nèi)脂肪穩(wěn)定的重要核轉(zhuǎn)錄因子，SREBP-1c/FAS和SREBP-1c/HMGCR通路可調(diào)控甘油三酯和膽固醇的合成[23]。ChREBP在ACC1和FAS的糖脂代謝調(diào)節(jié)中起主要作用。ChREBPmRNA相對(duì)表達(dá)量的下降說明糖酵解轉(zhuǎn)化脂肪的途徑受到抑制。PPARγ是一種參與脂質(zhì)代謝的核受體，是代謝組織中的營(yíng)養(yǎng)傳感器[24]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼料中酶解大豆分離蛋白替代25%和50%魚粉顯著降低了肝臟中ACC1、FAS、SREBP-1c、PPARγ、HMGCR和ChREBP的mRNA相對(duì)表達(dá)量，說明酶解大豆分離蛋白可能抑制肝臟脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)，從而減少肝臟的脂肪合成。

PPARα調(diào)節(jié)脂肪酸β氧化[25]，可以通過促進(jìn)肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1(CPT1)的表達(dá)來調(diào)控脂肪酸向線粒體的轉(zhuǎn)運(yùn)[26-27]，增強(qiáng)脂肪酸的氧化效率。本試驗(yàn)中，F(xiàn)M組的肝臟PPARα的mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于ESPI25組和ESPI50組，說明FM組肝臟中脂肪酸β氧化高于ESPI25組和ESPI50組。在大菱鲆上的研究發(fā)現(xiàn)，高脂飼料可以通過上調(diào)肝臟中PPARα的表達(dá)促進(jìn)脂肪的分解代謝[28]。在多鱗白甲魚的研究中發(fā)現(xiàn)，高脂飼料導(dǎo)致的肝臟脂肪沉積增加，會(huì)上調(diào)肝臟中PPARα、CPT1和脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL)的基因表達(dá)[29]。AMPK在真核細(xì)胞中普遍表達(dá)，是能量狀態(tài)的傳感器。當(dāng)細(xì)胞的能量狀態(tài)受到損害時(shí)，AMPK活化并激活分解代謝途徑，提高腺苷一磷酸(AMP)/ATP的比值并抑制ATP的消耗來維持細(xì)胞的能量穩(wěn)態(tài)[30-31]。AMPK還可以直接激活A(yù)TGL和激素敏感性脂肪酶(HSL)[32-33]。ATGL和HSL是2個(gè)參與脂肪分解的限速酶，ATGL可以特異性水解甘油三酯為甘油二酯，HSL參與了甘油三酯分解為甘油二酯再到甘油一酯的整個(gè)過程[34]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)M組的肝臟AMPK、ATGL和HSL的mRNA相對(duì)表達(dá)量高于ESPI25組和ESPI50組，說明FM組肝臟脂肪分解比較旺盛。有研究指出，肝臟中脂肪沉積的增加會(huì)提升脂肪分解的速率[35]。艾慶輝等[36]研究發(fā)現(xiàn)，飼料脂肪水平升高會(huì)顯著促進(jìn)半滑舌鰨內(nèi)臟團(tuán)HSL基因的表達(dá)；Han等[37]在羅非魚上的研究也得到類似結(jié)果，肝臟和肌肉中HSL的mRNA相對(duì)表達(dá)量隨著飼料脂肪水平的升高而升高。本試驗(yàn)中，F(xiàn)M組肝臟脂肪分解相關(guān)基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量高于ESPI25組和ESPI50組，原因可能是FM組花鱸對(duì)外源脂肪的吸收較多，內(nèi)源脂肪的合成也高于ESPI25組和ESPI50組，為促進(jìn)肝臟的脂肪代謝，脂肪分解相關(guān)基因上調(diào)，加快脂肪分解的速率，維持肝臟穩(wěn)態(tài)。

4 結(jié) 論

高比例酶解大豆分離蛋白替代魚粉會(huì)導(dǎo)致花鱸的攝食量降低，從而抑制其生長(zhǎng)性能。但飼料中酶解大豆分離蛋白替代魚粉可以通過降低血清和肝臟甘油三酯和總膽固醇含量，抑制脂肪合成基因的表達(dá)，從而減少花鱸機(jī)體脂肪的沉積。