不同支氣管鏡介導(dǎo)標(biāo)本的結(jié)核分枝桿菌基因檢測(cè)對(duì)痰涂片陰性肺結(jié)核患者的診斷價(jià)值

汪繼勝，方 佳，王 云，鄭祝權(quán)，翟冬旭，張偉龍 (.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬東莞第一醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，廣東 東莞 570；.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬東莞第一醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 東莞 570；.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬東莞第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 東莞 570)

肺結(jié)核患者多會(huì)出現(xiàn)低熱、盜汗、乏力、咳嗽咳痰等癥狀，對(duì)患者身體健康、生命安全具有極其不利的影響[1]。對(duì)于此癥臨床診斷多根據(jù)胸影像學(xué)、患者臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查等進(jìn)行診斷，但此癥患者臨床癥狀并不典型，且影像學(xué)表現(xiàn)無(wú)明顯特異性；由于化療、免疫功能障礙等影響，結(jié)核桿菌某些生物學(xué)特性還會(huì)發(fā)生一定的變異，增加了常規(guī)涂片檢查的難度[2]。此外，痰菌含量少、肺部病灶的局限性等因素，也會(huì)導(dǎo)致痰涂片檢查陰性。支氣管鏡檢查可對(duì)肺部病變部位進(jìn)行最直觀的觀察，從而可直接取材，有助于提高標(biāo)本診斷陽(yáng)性率[3]。但關(guān)于采取何種標(biāo)本取材方式的檢測(cè)價(jià)值更高臨床報(bào)道較少且探討并不深入，本研究對(duì)不同支氣管鏡介導(dǎo)標(biāo)本的結(jié)核分枝桿菌基因(TB-DNA)檢測(cè)痰涂片陰性肺結(jié)核價(jià)值分析如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：以隨機(jī)樣本抽樣法于我院2019年1月～2021年1月收治的痰涂片陰性肺結(jié)核患者中抽取60例，其中男39例，女21例；年齡18～60歲，平均(34.00±4.12)歲；病程1～10個(gè)月，平均(5.50±2.12)個(gè)月。本研究符合《赫爾辛基宣言》，且經(jīng)過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核同意。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者具有低熱、盜汗、乏力、咳嗽咳痰等癥狀；進(jìn)行胸部CT等檢查，診斷為疑似肺結(jié)核；可耐受肺泡灌洗術(shù)、刷檢；痰涂片結(jié)核桿菌檢測(cè)結(jié)果為陰性；患者知情且簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：免疫抑制者；嚴(yán)重肺動(dòng)脈高壓；近兩周采用抗凝藥物；支氣管肺活動(dòng)性出血者；語(yǔ)言、智力功能障礙無(wú)法清晰表達(dá)者；臨床資料不完整；依從性不佳者。

1.2方法

1.2.1支氣管鏡檢查：依據(jù)文獻(xiàn)[4]中相關(guān)操作規(guī)范，采用電子支氣管鏡(生產(chǎn)廠家：日本OLYMPUS公司，型號(hào)：240及290型)，行支氣管鏡檢查。應(yīng)用2%利多卡因麻醉，之后采用電子支氣管鏡詳細(xì)檢查患者各段支氣管。

1.2.2支氣管肺泡灌洗收集痰液標(biāo)本：詳細(xì)分析患者胸部CT檢查圖像，進(jìn)一步明確主要病變區(qū)將其作為灌洗區(qū)域，之后將支氣管鏡末端插入支氣管開(kāi)口部位，應(yīng)用100 ml 0.9%的氯化鈉注射液(灌洗液)，將其溫度控制于37℃左右，應(yīng)用注射器將其分3～4次由工作孔道注入，每次持續(xù)注入20～30 ml后，行負(fù)壓吸引吸收灌洗液，吸收率需超過(guò)40%。

1.2.3毛刷刷檢收集痰液標(biāo)本：依據(jù)胸部CT檢測(cè)結(jié)果，應(yīng)用保護(hù)性套管黏膜刷(生產(chǎn)廠家：常州晨濤醫(yī)療器械有限公司)對(duì)其主要病變區(qū)域進(jìn)行刷檢，采用鉗孔將黏膜刷插入患者病變部位，稍加壓力并旋轉(zhuǎn)，持續(xù)擦3次，將黏膜刷取出，待檢。

1.2.4熒光定量PCR檢測(cè)TB-DNA：應(yīng)用無(wú)菌灌洗瓶(生產(chǎn)廠家：興平市偉斯瑞儀器設(shè)備有限公司)將5 ml的灌洗液回收，應(yīng)用Eppendorf試管(生產(chǎn)廠家：深圳瑞華希科技有限公司)回收5 ml的黏膜毛刷標(biāo)本，分別向灌洗瓶、試管內(nèi)加入4%的NaOH溶液，充分振蕩5 min，放置于室溫環(huán)境下持續(xù)30 min，之后以2 000 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心處理，持續(xù)10 min棄去上清液，于所得沉淀物樣本中加入DNA提取液5 μl，將其充分振蕩、搖勻，進(jìn)行沸水浴10 min，之后以10 000 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心處理，持續(xù)5 min選取上層清液進(jìn)行DNA擴(kuò)增。按照結(jié)核核酸檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)廠家)說(shuō)明書(shū)操作步驟進(jìn)行檢測(cè)。

1.3觀察指標(biāo)：對(duì)比兩種介導(dǎo)標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果及不良事件發(fā)生率。不良事件發(fā)生率=氣胸發(fā)生率+氣促發(fā)生率+黏膜出血發(fā)生率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS22.0對(duì)本文數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料對(duì)比采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩種介導(dǎo)標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果對(duì)比：肺泡灌洗液提取標(biāo)本陽(yáng)性41例，陽(yáng)性率68.33%；黏膜毛刷刷檢提取標(biāo)本陽(yáng)性55例，陽(yáng)性率91.67%，兩種提取標(biāo)本方法檢測(cè)陽(yáng)性率對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=34.698，P<0.05)。

2.2兩種介導(dǎo)標(biāo)本檢測(cè)安全性對(duì)比：兩種介導(dǎo)標(biāo)本方法不良事件發(fā)生率對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩種介導(dǎo)標(biāo)本檢測(cè)安全性對(duì)比[n(%),n=60]

3 討論

肺結(jié)核是臨床常見(jiàn)的慢性傳染病，該病不具備臨床癥狀特異性，嚴(yán)重者會(huì)侵及患者多個(gè)臟器，最為常見(jiàn)的為肺部結(jié)核感染，對(duì)患者身體健康造成極大威脅[5]。因此，早期準(zhǔn)確、快捷的診斷，對(duì)于結(jié)核病患者預(yù)后具有十分重要的作用。相關(guān)報(bào)道顯示，痰涂片抗酸染色，于肺結(jié)核疾病臨床診斷中具有顯著的臨床價(jià)值，且操作較為簡(jiǎn)便、快捷，特異性較高。但該檢查方法陽(yáng)性檢出率相對(duì)較低，易產(chǎn)生誤診、漏診情況，影響后續(xù)治療[6]。肺結(jié)核患者入院后進(jìn)行痰涂片檢查，多數(shù)患者檢測(cè)結(jié)果均呈陰性，可能是由于細(xì)菌負(fù)荷程度低、痰液/涂片質(zhì)量低、引流支氣管不暢等多種因素的影響，且該癥患者具有極高的隱匿性，增加了臨床診斷的難度，該病對(duì)患者身體造成極大危害，嚴(yán)重者危及生命安全[7-8]。近些年來(lái)，支氣管鏡檢查技術(shù)不斷在臨床推廣，且對(duì)肺結(jié)核患者的臨床診斷越來(lái)越受重視，但關(guān)于采取何種標(biāo)本取材方法診斷價(jià)值更顯著，相關(guān)報(bào)道較少[9-10]。本研究發(fā)現(xiàn)，兩種介導(dǎo)標(biāo)本方法不良事件發(fā)生率對(duì)比無(wú)明顯差異，提示兩種標(biāo)本采集方法均具有較高的安全性。但肺泡灌洗液提取標(biāo)本陽(yáng)性41例、陽(yáng)性率68.33%，黏膜毛刷刷檢提取標(biāo)本陽(yáng)性55例、陽(yáng)性率91.67%，數(shù)據(jù)提示，與肺泡灌洗液提取方式相比，黏膜毛刷刷檢提取標(biāo)本的陽(yáng)性率更高，價(jià)值更顯著。黏膜毛刷刷檢為一種新型的技術(shù)，于支氣管鏡下采用黏膜毛刷刷檢標(biāo)本可使醫(yī)師更直觀觀察患者肺部病變區(qū)域，從而可應(yīng)用保護(hù)性套管黏膜刷對(duì)其主要病變區(qū)域進(jìn)行準(zhǔn)確的刷檢，操作簡(jiǎn)單、快捷，之后將5 ml的黏膜毛刷標(biāo)本放置于Eppendorf試管中，進(jìn)行定量PCR檢測(cè)，可有效避免外界因素對(duì)其標(biāo)本帶來(lái)不良影響，從而可保證較高的檢測(cè)陽(yáng)性率。

綜上所述，與肺泡灌洗液提取標(biāo)本相比，毛刷刷檢收集標(biāo)本TB-DNA診斷痰涂片陰性肺結(jié)核效能更顯著，可繼續(xù)推廣。