基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接探討芪藶強(qiáng)心膠囊治療慢性心力衰竭的作用機(jī)制

駱睿翔，張 晨，吳 旸，崔 杰，范宗靜

慢性心力衰竭(chronic heart failure，CHF)是由于各種原因?qū)е滦呐K結(jié)構(gòu)或功能異常，繼而引起心排血量減少的臨床綜合征[1]，具有患病率高、預(yù)后差的特點(diǎn)，是各種心臟疾病的終末階段[2]。有研究顯示，CHF患病率占全球人口的1%～3%，且呈逐年升高趨勢(shì)[3]。有研究表明，CHF病人5年生存率與某些惡性腫瘤相當(dāng)[4]。目前，西醫(yī)治療CHF主要應(yīng)用利尿劑降低心臟負(fù)荷，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑/血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ACEI/ARB)類藥物逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)，β受體阻滯劑抑制交感神經(jīng)興奮，伊伐布雷定特異性抑制心臟竇房結(jié)起搏電流，洋地黃類藥物抑制Na+/K+-ATP酶，進(jìn)而抑制神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)等[5]。但適應(yīng)證局限，禁忌證繁多，可能產(chǎn)生一系列不良反應(yīng)[6]。相比之下，中醫(yī)治療CHF顯示出獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

古代醫(yī)籍中無(wú)關(guān)于CHF的命名，根據(jù)臨床特征將其歸屬于“心水”“水腫”“心脹”“喘證”等范疇[7]。本病以心腎陽(yáng)衰、血瘀飲停為主要病因病機(jī)，治療以溫陽(yáng)化飲、化瘀利水為主[8]。芪藶強(qiáng)心膠囊是由11味藥物組成的中藥制劑，可提高CHF臨床療效，改善病人預(yù)后[9]。該藥已被納入《中國(guó)心力衰竭診斷和治療指南2018》的臨床推薦用藥[10]。有研究表明，芪藶強(qiáng)心膠囊通過(guò)調(diào)節(jié)關(guān)鍵酶促使心肌細(xì)胞進(jìn)行厭氧糖酵解，區(qū)域性地保留心肌細(xì)胞代謝的靈活性，從而保證能源效率而改善心力衰竭[11]。相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，芪藶強(qiáng)心膠囊可促進(jìn)糖酵解，減輕大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，改善心肌舒張功能[12-13]。多數(shù)研究?jī)H從單一成分或通路進(jìn)行探討，而芪藶強(qiáng)心膠囊成分復(fù)雜，故治療CHF的具體機(jī)制有待進(jìn)一步闡釋。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)具有系統(tǒng)性、整體性等特點(diǎn)，與中醫(yī)“整體觀念”的基本理論相似[14]，可全方位、多角度、多層次地展示中藥復(fù)方治療疾病的作用機(jī)制[15]。本研究旨在運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討芪藶強(qiáng)心膠囊治療CHF的潛在機(jī)制，以期為進(jìn)一步開(kāi)展相關(guān)基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 芪藶強(qiáng)心膠囊化學(xué)成分及相應(yīng)靶點(diǎn)的獲取 借助中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)(TCMSP，https：//tcmspw.com/tcmsp.php/)[16]，獲取芪藶強(qiáng)心膠囊中黃芪、人參、附子、丹參、葶藶子、澤瀉、玉竹、桂枝、紅花、香加皮、陳皮11味藥的化學(xué)成分及相應(yīng)蛋白靶點(diǎn)，通過(guò)限定口服生物利用度(oral bioavailability，OB)≥30%及類藥性(drug likeness，DL)≥0.18對(duì)其有效成分進(jìn)行篩選。利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.uniprot.org/)查詢蛋白靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的基因名稱。通過(guò)中藥分子機(jī)制綜合數(shù)據(jù)庫(kù)(TCMID)和中藥分子機(jī)制的生物信息學(xué)分析工具(BATMAN-TCM)加以補(bǔ)充。

1.2 “中藥-有效成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將中藥、有效成分及靶點(diǎn)基因?qū)隒ytoscape 3.7.2軟件，從而得到芪藶強(qiáng)心膠囊“中藥-有效成分-靶點(diǎn)”相互作用的網(wǎng)絡(luò)圖。

1.3 CHF相關(guān)靶點(diǎn)的獲取 借助人類基因數(shù)據(jù)庫(kù)(GeneCards，https：//www.genecards.org/)和人類孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)(OMIM，https：//www.omim.org/)篩選CHF的疾病靶點(diǎn)，以“chronic heart failure”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，合并檢索數(shù)據(jù)并刪除重復(fù)數(shù)據(jù)后得到CHF的相關(guān)靶點(diǎn)信息。

1.4 芪藶強(qiáng)心膠囊與CHF共同靶點(diǎn)韋恩圖及蛋白-蛋白互作(PPI)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將芪藶強(qiáng)心膠囊對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)和CHF相關(guān)靶點(diǎn)取交集后，得到芪藶強(qiáng)心膠囊和CHF的共同靶點(diǎn)，通過(guò)微生信在線作圖平臺(tái)(http：//www.bioinformatics.com.cn/)繪制出芪藶強(qiáng)心膠囊與CHF共同靶點(diǎn)的韋恩圖。將共同靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//string-db.org/)，設(shè)定置信度為0.700(highest confidence)，并將游離靶點(diǎn)進(jìn)行隱藏，其他參數(shù)不變，構(gòu)建共同靶點(diǎn)蛋白的PPI網(wǎng)絡(luò)圖。

1.5 芪藶強(qiáng)心膠囊與CHF共同靶點(diǎn)的富集分析 將共同靶點(diǎn)導(dǎo)入Metascape數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//metascape.org/)，進(jìn)行基因本體(Gene ontology，GO)功能富集分析，包括生物過(guò)程(biological process，BP)、分子功能(molecular function，MF)、細(xì)胞組成(cellular component，CC)3個(gè)部分；同時(shí)進(jìn)行京都基因與基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Gnomes，KEGG)通路富集分析，預(yù)測(cè)芪藶強(qiáng)心膠囊治療CHF的可能機(jī)制。

1.6 分子對(duì)接驗(yàn)證 根據(jù)篩選出的活性成分和核心靶點(diǎn)，運(yùn)用PDB數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//www.rcsb.org/)獲取相應(yīng)靶點(diǎn)的蛋白結(jié)構(gòu)，采用AutoDock Tools 1.5.6軟件對(duì)其進(jìn)行刪除水分子、添加氫原子離配體和受體、計(jì)算電荷，輸出保存為pdbqt格式；利用TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)下載相應(yīng)化合物的mol2結(jié)構(gòu)文件并轉(zhuǎn)換為pdb格式；運(yùn)行AutoDock Vina[17]進(jìn)行分子對(duì)接，評(píng)估靶點(diǎn)蛋白與化合物的結(jié)合情況；最后運(yùn)用Pymol軟件進(jìn)行可視化分析。

2 結(jié) 果

2.1 芪藶強(qiáng)心膠囊成分及靶點(diǎn)的獲取 借助TCMSP并根據(jù)OB≥30%及DL≥0.18，共篩選出芪藶強(qiáng)心膠囊有效成分209種，去除未查到靶點(diǎn)的成分，共得到158種有效成分，其中黃芪16種，人參17種，附子5種，丹參58種，葶藶子9種，澤瀉7種，玉竹6種，桂枝6種，紅花16種，香加皮13種，陳皮5種。利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)獲取對(duì)應(yīng)的基因靶點(diǎn)2 025個(gè)，其中黃芪347個(gè)，人參192個(gè)，附子22個(gè)，丹參646個(gè)，葶藶子246個(gè)，澤瀉9個(gè)，玉竹29個(gè)，桂枝50個(gè)，紅花352個(gè)，香加皮64個(gè)，陳皮68個(gè)，合并去重后最終獲得基因靶點(diǎn)236個(gè)。

2.2 “中藥-有效成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 結(jié)果表明：槲皮素、山奈酚、異鼠李素、毛蕊異黃酮、β-谷甾醇、人參皂苷Rh2、植物甾醇、黃芩素、β-胡蘿卜素、木犀草素、丹參酮 ⅡA 、柚皮素等有效成分連接的靶點(diǎn)較多，詳見(jiàn)表1。將11味中藥、158種有效成分和236個(gè)靶點(diǎn)基因?qū)隒ytoscape 3.7.2軟件，得到芪藶強(qiáng)心膠囊的“中藥-有效成分-靶點(diǎn)”相互作用的網(wǎng)絡(luò)圖，詳見(jiàn)圖1。其中節(jié)點(diǎn)(node)表示中藥、有效成分和靶點(diǎn)基因，共405個(gè)；邊(edge)表示相互作用關(guān)系，共2 183條；六邊形代表中藥、圓形代表有效成分、菱形代表靶點(diǎn)基因。由此預(yù)測(cè)上述成分可能是芪藶強(qiáng)心膠囊治療CHF的主要活性成分。

表1 芪藶強(qiáng)心膠囊的核心成分

圖1 “中藥-有效成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖

2.3 CHF相關(guān)靶點(diǎn)的獲取 借助人類基因數(shù)據(jù)庫(kù)(GeneCards，https：//www.genecards.org/)和人類孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)(OMIM，https：//www.omim.org/)篩選CHF的疾病靶點(diǎn)，以“chronic heart failure”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，合并檢索數(shù)據(jù)并刪除重復(fù)值后，在 Excel中運(yùn)用“MEDIAN”算法依次計(jì)算中位數(shù)，并依據(jù)大于中位數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，最終保留CHF相關(guān)靶點(diǎn)1 296個(gè)。

2.4 芪藶強(qiáng)心膠囊與CHF共同靶點(diǎn)韋恩圖及PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將芪藶強(qiáng)心膠囊對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)236個(gè)和CHF相關(guān)靶點(diǎn)1 296個(gè)，取交集后得到共同靶點(diǎn)108個(gè)，并通過(guò)微生信在線作圖平臺(tái)繪制出芪藶強(qiáng)心膠囊與CHF共同靶點(diǎn)的韋恩圖，詳見(jiàn)圖2。將108個(gè)共同靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)，將置信度設(shè)定為0.700(highest confidence)，并將游離靶點(diǎn)進(jìn)行隱藏，其他參數(shù)不變，構(gòu)建共同靶點(diǎn)蛋白的PPI網(wǎng)絡(luò)圖，其中節(jié)點(diǎn)表示蛋白，共108個(gè)；邊表示相互作用關(guān)系，共460條，平均節(jié)點(diǎn)數(shù)為8.52，平均局部聚類系數(shù)為0.46，詳見(jiàn)圖3。將PPI網(wǎng)絡(luò)圖導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件中以突出核心基因并進(jìn)行可視化，選取Degree值排名居前12位的核心基因，分別為：絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(AKT1)、白細(xì)胞介素6(IL6)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(VEGFA)、腫瘤壞死因子(TNF)、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGF)、胱天蛋白酶3(CASP3)、細(xì)胞腫瘤抗原p53(TP53)、絲裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、絲裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、轉(zhuǎn)錄因子AP-1(JUN)、白細(xì)胞介素1B(IL1B)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)，詳見(jiàn)圖4。PPI網(wǎng)絡(luò)篩選圖見(jiàn)圖5。

圖2 芪藶強(qiáng)心膠囊與CHF共同靶點(diǎn)的韋恩圖

圖3 芪藶強(qiáng)心膠囊與CHF的PPI 網(wǎng)絡(luò)圖

圖4 PPI網(wǎng)絡(luò)核心基因

圖5 PPI篩選網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 GO功能富集分析 通過(guò)Metascape數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)共同靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集分析，包括BP、MF、CC 3個(gè)部分，共富集507個(gè)條目，其中生物過(guò)程294條，分子功能111條，細(xì)胞組成102個(gè)。將排名居前10位的富集結(jié)果以弦圖的方式可視化，詳見(jiàn)圖6～圖8。結(jié)果表明：共同靶點(diǎn)主要參與對(duì)無(wú)機(jī)物的反應(yīng)(response to inorganic substance)、積極調(diào)控細(xì)胞遷移(positive regulation of cell migration)、對(duì)有毒物質(zhì)的反應(yīng)(response to toxic substance)、對(duì)細(xì)胞外刺激的反應(yīng)(response to extracellular stimulus)、血液循環(huán)(blood circulation)、對(duì)氧氣水平的反應(yīng)(response to oxygen levels)等生物過(guò)程；細(xì)胞因子受體結(jié)合(cytokine receptor binding)、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合(transcription factor binding)、蛋白質(zhì)均二聚活性(protein homodimerization activity)等分子功能；膜筏(membrane raft)、囊泡腔(vesicle lumen)、質(zhì)膜蛋白復(fù)合物(plasma membrane protein complex)等細(xì)胞組成。

圖6 GO功能富集分析：“核心靶點(diǎn)-BP”弦圖

圖7 GO富集分析：“核心靶點(diǎn)-MF”弦圖

圖8 GO功能富集分析：“核心靶點(diǎn)-CC”弦圖

2.6 KEGG通路富集分析 通過(guò)Metascape數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)共同靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG富集分析，共富集112條信號(hào)通路。最終將富集顯著的前20條通路以柱狀圖和氣泡圖的方式可視化，詳見(jiàn)圖9、圖10。其中在癌癥通路(pathways in cancer)、流體切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化(fluid shear stress and atherosclerosis)、卡波西氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染(Kaposi sarcoma-associated herpesvirus infection)、丙型肝炎(hepatitis C)、TNF信號(hào)通路(TNF signaling pathway) 、缺氧誘導(dǎo)因子-1信號(hào)通路(HIF-1 signaling pathway)6條通路富集較多。由此預(yù)測(cè)上述通路可能與芪藶強(qiáng)心膠囊治療CHF關(guān)系密切。

圖9 KEGG通路富集分析：“核心靶點(diǎn)-信號(hào)通路”柱狀圖

圖10 KEGG通路富集分析：“核心靶點(diǎn)-信號(hào)通路”氣泡圖

2.7 分子對(duì)接結(jié)果 一般認(rèn)為配體與受體結(jié)合能越低，結(jié)合越穩(wěn)定，對(duì)接活性越大[18]。將芪藶強(qiáng)心膠囊中篩選出的10個(gè)關(guān)鍵活性成分和排名居前10位的核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證。分子對(duì)接結(jié)果顯示，90%的靶心蛋白和對(duì)應(yīng)的化合物分子結(jié)合能<-20.9 kJ/mol，表明核心靶蛋白和化合物分子有較好的結(jié)合性，詳見(jiàn)圖11。其中部分靶蛋白與化合物的結(jié)合力超過(guò)了原配體，表明這些化合物可能通過(guò)抑制原配體與靶點(diǎn)結(jié)合而發(fā)揮作用。選擇排名最低的結(jié)合能繪制對(duì)接模型圖，詳見(jiàn)圖12。

圖11 芪藶強(qiáng)心膠囊核心成分與核心靶點(diǎn)蛋白對(duì)接熱圖

圖12 9個(gè)結(jié)合能最低的分子對(duì)接模型圖(A為MOL005344-人參皂苷Rh2-TNF；B為MOL000358-β-谷甾醇-TNF；C為MOL000449-植物甾醇-TP53；D為MOL005344-人參皂苷Rh2-MMP9；E為MOL007154-丹參酮ⅡA-EGF；F為MOL005344-人參皂苷Rh2-CASP3；G為MOL007154-丹參酮ⅡA-VEGFA；H為MOL000417-毛蕊異黃酮-VEGFA；I為MOL000354-異鼠李素-IL6)

3 討 論

3.1 CHF與芪藶強(qiáng)心膠囊組方 中醫(yī)學(xué)認(rèn)為CHF屬“心水”“水腫”“心脹”“喘證”等范疇。芪藶強(qiáng)心膠囊是基于中醫(yī)脈絡(luò)理論研發(fā)的治療CHF的中成藥，方中黃芪、附子為君藥，人參、丹參、葶藶子為臣藥，佐以紅花、澤瀉、陳皮、玉竹、香加皮，使以桂枝[19]。其中君藥黃芪、附子益氣溫陽(yáng)、利水消腫；臣藥人參大補(bǔ)元?dú)猓⒒钛?，葶藶子瀉肺行水；佐藥紅花活血化瘀通絡(luò)，澤瀉、香加皮強(qiáng)心利水滲濕，陳皮調(diào)暢氣機(jī)；使藥桂枝引藥入絡(luò)。全方共奏益氣溫陽(yáng)、活血通絡(luò)、利水消腫之功。對(duì)于CHF，尤其是心肌梗死后心力衰竭的治療效果顯著[20]。

3.2 芪藶強(qiáng)心膠囊治療CHF的潛在活性成分 通過(guò)分析得到芪藶強(qiáng)心膠囊的有效成分158種，主要包括槲皮素、山奈酚、異鼠李素、β-谷甾醇、人參皂苷Rh2、黃芩素、β-胡蘿卜素、木犀草素、丹參酮ⅡA、柚皮素等。槲皮素抗炎、抗氧化及抗凋亡的作用顯著，通過(guò)增加內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮(NO)的生物利用度，從而改善內(nèi)皮細(xì)胞功能相關(guān)血管，同時(shí)保護(hù)心肌細(xì)胞[21]。山奈酚通過(guò)調(diào)節(jié)骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(BMP4)信號(hào)通路和mRNA表達(dá)，抑制血管平滑肌細(xì)胞生成，進(jìn)而預(yù)防血管重塑[22-23]。異鼠李素具有強(qiáng)大的心血管保護(hù)，抑制心肌細(xì)胞凋亡的作用[24]。β-谷甾醇和植物甾醇類似，具有抗炎、抗氧化、降脂等作用，可降低心血管事件發(fā)生率[25]。人參皂苷Rh2通過(guò)過(guò)氧化物酶體增殖激活受體(PPAR)δ-信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)信號(hào)通路改善心肌纖維化，發(fā)揮保護(hù)心臟的作用[26]。黃芩素通過(guò)抑制Toll樣受體4/核轉(zhuǎn)錄因子κB(TLR4/NF-κB)信號(hào)通路，延緩內(nèi)皮細(xì)胞損傷，減輕氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，對(duì)心肌缺血有一定的保護(hù)作用[27]。β-胡蘿卜素可潛在調(diào)節(jié)循環(huán)膽固醇濃度，對(duì)妊娠期婦女心臟肥大起到調(diào)節(jié)作用[28]。木犀草素可調(diào)節(jié)NF-κB及Nfr2信號(hào)通路，激活抗炎及抗氧化反應(yīng)[29]。丹參酮ⅡA通過(guò)單磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase，AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)依賴性自噬途徑，保護(hù)心肌梗死后心力衰竭，阻止甚至緩解心室重構(gòu)[30-31]。柚皮素可抑制NF-κB p65的表達(dá)，減輕心肌細(xì)胞炎癥反應(yīng)；通過(guò)環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷酸(cGMP)-cGMP依賴性蛋白激酶I(PKGI)信號(hào)傳導(dǎo)減弱心肌缺血-再灌注損傷[32]。由此推測(cè)，芪藶強(qiáng)心膠囊的相關(guān)成分在治療CHF過(guò)程中發(fā)揮了主要作用。

3.3 芪藶強(qiáng)心膠囊治療CHF的關(guān)鍵作用靶點(diǎn) 通過(guò)PPI網(wǎng)絡(luò)分析得到芪藶強(qiáng)心膠囊治療CHF的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)包括AKT1、IL6、VEGFA、TNF、EGF、CASP3、TP53、MAPK1、MAPK8、JUN、IL1B、MMP9等。AKT1是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的一種，通過(guò)抑制AKT減輕心肌梗死后心力衰竭大鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)，同時(shí)減輕心臟纖維化[33]。炎癥反應(yīng)是CHF發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，IL6和IL1B均為免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)因子，其中IL6是這一環(huán)節(jié)的主要調(diào)控者[34-35]。VEGFA屬于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，通過(guò)抑制冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮炎性因子表達(dá)，保護(hù)心肌細(xì)胞[36]。通過(guò)TNF途徑可抑制心肌和內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[37]。CASP3的激活在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著核心作用，其是CHF病人心肌細(xì)胞代謝中的持續(xù)過(guò)程[38]。TP53是一種抑癌基因，通過(guò)調(diào)控炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等影響CHF的發(fā)生和發(fā)展[39-40]。MAPK1與MAPK8均為絲裂原活化蛋白激酶，CHF的發(fā)生發(fā)展與MAPK蛋白磷酸化程度呈正相關(guān)，因此抑制MAPK蛋白磷酸化的過(guò)度表達(dá)是治療CHF的重要途徑[41]。JUN是轉(zhuǎn)錄因子AP-1家族的成員之一，適當(dāng)抑制AP-1的表達(dá)，可延緩心肌肥厚及心肌細(xì)胞凋亡[42]。MMP9屬于基質(zhì)金屬蛋白酶的一種，MMP可影響與心肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞凋亡相關(guān)的心室重構(gòu)，高水平MMP與CHF不良預(yù)后密切相關(guān)[43-44]?？傊嗡瀼?qiáng)心膠囊可能通過(guò)調(diào)節(jié)AKT1、TNF、VEGFA、EGF等關(guān)鍵作用靶點(diǎn)，多途徑發(fā)揮對(duì)CHF的治療作用。

3.4 芪藶強(qiáng)心膠囊治療CHF的核心信號(hào)通路 通過(guò)對(duì)共同靶點(diǎn)的KEGG富集分析，得到芪藶強(qiáng)心膠囊主要通過(guò)癌癥通路、流體切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、卡波西氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、丙型肝炎、TNF信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路等發(fā)揮對(duì)CHF的治療作用。有研究表明，癌癥通路可改變主要的心臟信號(hào)通路，促進(jìn)心力衰竭的發(fā)展[45]。流體切應(yīng)力是血流作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的摩擦力，通過(guò)影響內(nèi)皮細(xì)胞基因的表達(dá)，發(fā)揮抗炎、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞等作用，這一機(jī)制與心血管疾病的發(fā)生有內(nèi)在聯(lián)系[46]。TNF可觸發(fā)NF-κB和MAPK等途徑的激活，從而降低炎性因子水平，為CHF的治療提供了新方向[47]。HIF-1是預(yù)防細(xì)胞缺氧的主要信號(hào)通路，通過(guò)調(diào)節(jié)多種基因如VEGF、GLUT4等調(diào)節(jié)氧氣的輸送[48]。有研究顯示，芪藶強(qiáng)心膠囊通過(guò)調(diào)節(jié)HIF-1通路，可減輕心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)的損傷[49]。

3.5 分子對(duì)接 通過(guò)對(duì)有效活性成分、核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果顯示90%的核心成分與靶點(diǎn)間有較好的結(jié)合能力，其中VEGFA、TNF、MMP9與有效活性成分結(jié)合力顯著，表明芪藶強(qiáng)心膠囊通過(guò)多藥物、多靶點(diǎn)協(xié)同發(fā)揮作用。

綜上所述，基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)芪藶強(qiáng)心膠囊中槲皮素、山奈酚、異鼠李素、毛蕊異黃酮、β-谷甾醇、人參皂苷Rh2、植物甾醇、黃芩素、β-胡蘿卜素、木犀草素、丹參酮ⅡA、柚皮素等活性成分通過(guò)AKT1、IL6、VEGFA、TNF、EGF、CASP3、TP53、MAPK1、MAPK8、JUN、IL1B、MMP9等關(guān)鍵靶點(diǎn)調(diào)節(jié)癌癥通路、流體切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化、TNF、HIF-1等信號(hào)通路，進(jìn)而發(fā)揮對(duì)CHF的治療作用。分子對(duì)接技術(shù)驗(yàn)證了有效活性成分與核心靶點(diǎn)具有較好的結(jié)合活性。初步證實(shí)了芪藶強(qiáng)心膠囊治療CHF具有多成分、多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn)，有利于進(jìn)一步開(kāi)展相關(guān)基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用。