飲料中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┑臏y(cè)定能力驗(yàn)證

康 婕，李 媛，石 菲，梁喜玲，劉娟娟，樊 成

（陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，陜西西安 710048）

安賽蜜又稱(chēng)為乙酰磺胺酸鉀，是一種白色結(jié)晶物質(zhì)（單斜結(jié)晶形），是一種可作為甜味劑的食品添加劑，對(duì)光、熱、酸、堿及微生物具有很高的穩(wěn)定性，在空氣中不吸潮，適用范圍較廣泛，是當(dāng)前世界上第4代合成甜味劑，24 h可以排出體外，因此沒(méi)有卡路里[1-6]。安賽蜜在國(guó)際甜味劑市場(chǎng)備受青睞[7]。安賽蜜為人工合成甜味劑，在飲料類(lèi)中安賽蜜最大允許使用量為0.3 g/kg。食品中超標(biāo)使用會(huì)給人們的身體健康帶來(lái)威脅，因此加強(qiáng)食品中安賽蜜等食品添加劑的監(jiān)管及檢測(cè)工作任重道遠(yuǎn)。

本能力驗(yàn)證項(xiàng)目旨在了解目前省內(nèi)實(shí)驗(yàn)室在飲料中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┑仁称诽砑觿z測(cè)領(lǐng)域的整體水平，提高全省乙?；前匪徕洠ò操惷郏┑臋z測(cè)能力結(jié)果作為為政府遴選承擔(dān)監(jiān)抽任務(wù)的依據(jù)。本次能力驗(yàn)證計(jì)劃的方案計(jì)劃遵循GB/T 27043—2012[8]、GB/T 28043—2019、CNAS—GL002：2014[9]、CNAS—GL003：2018[10]等相關(guān)規(guī)定。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

YP5002型電子天平（上海佑科儀器儀表有限公司）；TG16-WS型臺(tái)式高速離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器公司）；Breeye1525型高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；超聲清洗儀；抽濾瓶；G3耐酸漏斗；0.45 μm微孔濾膜；層析柱。

甲醇、乙腈、硫酸銨、硫酸、中性氧化鋁、乙?；前匪徕洏?biāo)準(zhǔn)品，Bepure公司；實(shí)驗(yàn)室用水均為一級(jí)水。

1.2 實(shí)施方案

制定科學(xué)合理的方案→組織專(zhuān)家對(duì)方案進(jìn)行研討及提出建設(shè)性意見(jiàn)→樣品制備及均勻性穩(wěn)定性檢驗(yàn)→發(fā)放“能力驗(yàn)證報(bào)名表”，告知試驗(yàn)室參加并返回報(bào)名表并審核→作業(yè)指導(dǎo)書(shū)編制→樣品登記、編號(hào)、貼標(biāo)→樣品發(fā)放→回收結(jié)果→數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、處理及中期報(bào)告編寫(xiě)→補(bǔ)測(cè)及數(shù)據(jù)報(bào)送→最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理、技術(shù)分析→報(bào)告編制。

1.3 保密措施

為確保本次能力驗(yàn)證工作嚴(yán)格的公平公正，結(jié)果真實(shí)可靠，協(xié)調(diào)組織單位分組（督察組和統(tǒng)計(jì)組）實(shí)施編號(hào)和統(tǒng)計(jì)工作。由督察組對(duì)參加本次能力驗(yàn)證的單位進(jìn)行編號(hào)，并對(duì)樣品進(jìn)行編號(hào)、發(fā)放，編號(hào)原則由督察組統(tǒng)一管理。待能力驗(yàn)證結(jié)果匯總至統(tǒng)計(jì)組后，從督察組拿到編號(hào)原則，統(tǒng)計(jì)組按照預(yù)定的統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行計(jì)算。

1.4 能力驗(yàn)證樣品設(shè)計(jì)及制備

安賽蜜在飲料生產(chǎn)企業(yè)廣泛應(yīng)用，是國(guó)家和省級(jí)食品安全監(jiān)督抽檢的檢驗(yàn)項(xiàng)目，樣品制備是能力驗(yàn)證的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本次能力驗(yàn)證活動(dòng)的檢測(cè)樣品基質(zhì)采用市售的同一批次飲料，檢測(cè)篩選不含安賽蜜的飲料作為空白樣品基質(zhì)，添加目標(biāo)物食品添加劑安賽蜜，并加入干擾物質(zhì)阿斯巴甜和紐甜，添加一定量的防腐劑，采用逐級(jí)放大的方式經(jīng)振搖、攪拌混勻并均質(zhì)制備成安賽蜜濃度為0.12～0.20 g/L的A、B、C 3組樣品（其中C為備用樣），每組樣品制備2 L，分裝后高溫高壓滅菌，防止微生物滋生；測(cè)試樣品采用雙樣發(fā)樣，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室獲得A+B樣品。

1.5 能力驗(yàn)證樣品的包裝、標(biāo)識(shí)、發(fā)放

量取制備好的樣品約30 mL分裝于玻璃瓶中，高溫高壓滅菌（115 ℃，30 min），對(duì)樣品進(jìn)行唯一性標(biāo)識(shí)，隨機(jī)編號(hào)SP-XXX，置于冷藏條件下保存，向報(bào)名的實(shí)驗(yàn)室分發(fā)2個(gè)不同濃度的樣品，即A+B樣品組合。每家參加實(shí)驗(yàn)室獨(dú)立編號(hào)，收到兩份各帶有唯一編號(hào)的供測(cè)試樣品。發(fā)放樣品時(shí)同時(shí)發(fā)放作業(yè)指導(dǎo)書(shū)、樣品接收狀態(tài)確認(rèn)表和測(cè)試結(jié)果報(bào)告單。運(yùn)輸過(guò)程按照樣品的保存條件儲(chǔ)存，對(duì)于個(gè)別因素引起的樣品丟失或損壞，盡快通知實(shí)施機(jī)構(gòu)，重新領(lǐng)取樣品。

1.6 能力驗(yàn)證檢測(cè)方法

本次能力驗(yàn)證推薦參加的實(shí)驗(yàn)室采用《飲料中乙酰磺胺酸鉀的測(cè)定》（GB/T 5009.140—2003）進(jìn)行測(cè)定。如果參加實(shí)驗(yàn)室采用推薦方法以外的方法（如實(shí)驗(yàn)室常用方法、非標(biāo)方法或者其他標(biāo)準(zhǔn)方法），需在結(jié)果報(bào)告單中標(biāo)明。

1.7 結(jié)果回收

檢測(cè)機(jī)構(gòu)在作業(yè)指導(dǎo)書(shū)規(guī)定的時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè)工作后填寫(xiě)測(cè)試結(jié)果報(bào)告單，并在報(bào)送電子版的同時(shí)將測(cè)試結(jié)果報(bào)告單和原始記錄一同寄送項(xiàng)目實(shí)施單位，以便后續(xù)的技術(shù)分析。

1.8 能力驗(yàn)證統(tǒng)計(jì)方法

將參加能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果進(jìn)行匯總，校對(duì)無(wú)誤后，按穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的Z值和實(shí)驗(yàn)室間的Z值。Z比分?jǐn)?shù)判定原則是|Z|≤2為滿(mǎn)意結(jié)果，2＜|Z|＜3為可疑結(jié)果（有問(wèn)題），|Z|≥3為不滿(mǎn)意結(jié)果（離群值）。

2 結(jié)果與分析

2.1 均勻性測(cè)定

采用本次能力驗(yàn)證推薦的方法GB/T 5009.140—2003中高效液相色譜法對(duì)樣品中安賽蜜含量進(jìn)行測(cè)定，并采用單因素方差分析進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)。從制備好的A、B、C 3個(gè)濃度水平樣品中隨機(jī)抽取10份樣品用于均勻性檢驗(yàn)，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定2次。在短時(shí)間內(nèi)由同一測(cè)試人員，使用《飲料中乙?；前匪徕浀臏y(cè)定》（GB/T 5009.140—2003）測(cè)試方法、相同測(cè)試條件對(duì)樣品進(jìn)行安賽蜜的檢測(cè)。均勻性采用單因子方差統(tǒng)計(jì)分析，采用F檢驗(yàn)查詢(xún)F檢驗(yàn)臨界值表，只有當(dāng)樣品中安賽蜜含量的F值小于F臨界值（F0.05(9,10)=3.02）時(shí)，表明制備樣品均勻。

由表1～表3可知，均勻性檢驗(yàn)計(jì)算的F值＜F臨界值，表明在0.05顯著性水平時(shí)，樣品間不存在顯著性差異，樣品A、B、C中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┖渴蔷鶆虻?。

表1 樣品A中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┚鶆蛐詸z驗(yàn)數(shù)據(jù)分析結(jié)果

表3 樣品C中乙酰磺胺酸鉀（安賽蜜）均勻性檢驗(yàn)數(shù)據(jù)分析結(jié)果

2.2 穩(wěn)定性測(cè)定

本次能力驗(yàn)證計(jì)劃在7～10月完成檢測(cè)，參加實(shí)驗(yàn)室均在省內(nèi)。在此過(guò)程中，不同地方氣溫差異不大，本次能力驗(yàn)證樣品采用領(lǐng)樣形式，1 d內(nèi)可到達(dá)各參加實(shí)驗(yàn)室，樣品在傳遞過(guò)程中加冰袋運(yùn)輸保存，穩(wěn)定性采用t檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，模擬樣品傳遞過(guò)程中的條件，在試驗(yàn)期間抽取10個(gè)樣本，每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定2次，人機(jī)料法環(huán)與均勻性檢驗(yàn)保持一致。穩(wěn)定性試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間為37 d，測(cè)定時(shí)間間隔按先密后疏的原則設(shè)計(jì)，共分為4個(gè)間隔。樣品分別于制樣后第1 d（9月4日）、第5 d（9月8日）、第10 d（9月13日）、第37 d（10月10日，補(bǔ)測(cè)發(fā)樣日）進(jìn)行檢測(cè)。以均勻性試驗(yàn)所得結(jié)果為參比數(shù)據(jù)，采用t檢驗(yàn)方法進(jìn)行穩(wěn)定性檢驗(yàn)。當(dāng)t值小于tα(n1+n2-2)時(shí)，表明兩個(gè)相鄰時(shí)間抽取的樣品中安賽蜜的含量無(wú)顯著性差異，即制備樣品穩(wěn)定。

表2 樣品B中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┚鶆蛐詸z驗(yàn)數(shù)據(jù)分析結(jié)果

由表4可知，計(jì)算所得的t值均＜t臨界值（t0.05(18)=2.101），表明在0.05顯著性水平時(shí)，樣品A、B、C中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┖渴欠€(wěn)定的。

表4 樣品中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┓€(wěn)定性檢驗(yàn)數(shù)據(jù)分析結(jié)果

3 能力驗(yàn)證結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3.1 初測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

本次能力驗(yàn)證全省共有31家實(shí)驗(yàn)室報(bào)名參加，其中質(zhì)監(jiān)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室9家，食品藥品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)室9家，社會(huì)和企業(yè)實(shí)驗(yàn)室13家。收到有效測(cè)試報(bào)告30份（1家逾期上報(bào)結(jié)果，不計(jì)入統(tǒng)計(jì)），對(duì)30家實(shí)驗(yàn)室上報(bào)的結(jié)果依據(jù)《能力驗(yàn)證結(jié)果的統(tǒng)計(jì)處理和能力評(píng)價(jià)指南》（CNAS—GL002：2018）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，詳見(jiàn)表5。由表6可知，其中結(jié)果為滿(mǎn)意的實(shí)驗(yàn)室有22家，占73.3%；結(jié)果為可疑的實(shí)驗(yàn)室有1家；結(jié)果為離群的實(shí)驗(yàn)室有7家。

表5 檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)健統(tǒng)計(jì)值匯總表

表6 各實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證初測(cè)結(jié)果

3.2 統(tǒng)計(jì)圖表

為使參加者更直觀(guān)地了解本次能力驗(yàn)證活動(dòng)的結(jié)果，采用直方圖來(lái)表示有關(guān)的統(tǒng)計(jì)量。Z比分?jǐn)?shù)序列直方圖按照Z(yǔ)比分?jǐn)?shù)的大小順序顯示出每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的Z比分?jǐn)?shù)，并標(biāo)有實(shí)驗(yàn)室唯一代碼，安賽蜜Z比分?jǐn)?shù)序列直方圖參見(jiàn)圖1～圖2。由圖1可以看出，實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果可疑和不滿(mǎn)意的實(shí)驗(yàn)室有SP-007、SP-009、SP-011和SP-017，主要反應(yīng)這4家實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果存在系統(tǒng)誤差。由圖2可以看出，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)結(jié)果可疑和不滿(mǎn)意的實(shí)驗(yàn)室有SP-003、SP-007、SP-009、SP-013、SP-017、SP-024和SP-030，說(shuō)明這7家實(shí)驗(yàn)室安賽蜜的分割樣品對(duì)結(jié)果間差值太大。

圖1 樣品A+B安賽蜜測(cè)定值ZB比分?jǐn)?shù)序列直方圖

圖2 樣品A+B安賽蜜測(cè)定值ZW比分?jǐn)?shù)序列直方圖

3.3 補(bǔ)測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

對(duì)第一次檢驗(yàn)結(jié)果不滿(mǎn)意或可疑的檢測(cè)機(jī)構(gòu)在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室整改后給予一次補(bǔ)測(cè)機(jī)會(huì)。本次能力驗(yàn)證共有9家實(shí)驗(yàn)室參加了補(bǔ)測(cè)，收到補(bǔ)測(cè)測(cè)試報(bào)告9份，其中7家實(shí)驗(yàn)室結(jié)果滿(mǎn)意，還有2家結(jié)果不滿(mǎn)意。

4 分析和建議

4.1 檢測(cè)方法的差異

參加本次能力驗(yàn)證的31家實(shí)驗(yàn)室均采用《飲料中乙?；前匪徕浀臏y(cè)定》的國(guó)標(biāo)方法進(jìn)行測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)中只有高效液相色譜法一種檢測(cè)方法，故實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)方法不存在差異。

4.2 檢測(cè)過(guò)程的質(zhì)量控制

影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的因素有人員、設(shè)備、使用的試劑、環(huán)境條件和所采用的方法等。檢測(cè)過(guò)程中要嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，保證使用的儀器處于良好的工作狀態(tài)，使用的標(biāo)準(zhǔn)溶液按照標(biāo)準(zhǔn)要求配制，特別是測(cè)試人員要具備相應(yīng)的能力。對(duì)于飲料中的安賽蜜的測(cè)定過(guò)程，尤其應(yīng)注意以下幾個(gè)問(wèn)題。

（1）樣品提取。樣品若未完全溶解于提取溶劑，會(huì)導(dǎo)致結(jié)果偏低。

（2）樣品凈化。①固相萃取柱。不同批次中性氧化鋁固相萃取柱回收率存在差異。②樣液淋洗速度。樣液淋洗速度未控制恰當(dāng)和保持一致，其中速度過(guò)快的，目標(biāo)物沒(méi)有被完全吸附；洗脫速度太慢，則不能把目標(biāo)物完全洗脫下來(lái)。③樣品收集。用流動(dòng)相洗脫時(shí)，要準(zhǔn)確收集洗脫液25 mL并混勻。

（3）樣品測(cè)定。①標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度。在配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度折算出標(biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)際濃度。②標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)濃度范圍要覆蓋試樣。③液相色譜儀儀器狀態(tài)不穩(wěn)定。紫外檢測(cè)器狀態(tài)不穩(wěn)定，或儀器流動(dòng)相管路堵塞，導(dǎo)致流動(dòng)相系統(tǒng)不穩(wěn)定，干擾了進(jìn)樣。

（4）檢測(cè)人員。在譜圖處理過(guò)程中，若檢測(cè)人員對(duì)檢測(cè)結(jié)果計(jì)算有誤，則會(huì)直接導(dǎo)致最后結(jié)果產(chǎn)生偏差。

4.3 檢測(cè)報(bào)告原始記錄分析

通過(guò)對(duì)31家實(shí)驗(yàn)室的原始記錄進(jìn)行審核，發(fā)現(xiàn)存在以下問(wèn)題：計(jì)算錯(cuò)誤導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤；圖譜與原始記錄不相符；原始記錄和檢測(cè)報(bào)告單位不相符；未按標(biāo)準(zhǔn)要求取樣、檢測(cè)。

5 建議

陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院開(kāi)展的飲料中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┑臏y(cè)定能力驗(yàn)證制備了滿(mǎn)足均勻性和穩(wěn)定性要求的飲料樣品，制定了詳細(xì)的實(shí)施方案，編制了作業(yè)指導(dǎo)書(shū)，考核單位覆蓋食藥系統(tǒng)、質(zhì)檢系統(tǒng)、出入境以及第三方檢驗(yàn)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，對(duì)全省31家通過(guò)取得計(jì)量認(rèn)證合格證書(shū)的食品檢測(cè)機(jī)構(gòu)的乙?；前匪徕洠ò操惷郏z測(cè)能力進(jìn)行考核，識(shí)別各實(shí)驗(yàn)室間存在的差異，在一定程度上反應(yīng)了陜西省檢驗(yàn)檢測(cè)整體能力和水平。

考核結(jié)果不僅對(duì)驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)內(nèi)控的有效性進(jìn)行了確認(rèn)，同時(shí)對(duì)提升質(zhì)量控制的能力和檢驗(yàn)人員的檢測(cè)水平有所幫助，也可作為政府機(jī)構(gòu)遴選監(jiān)督抽檢項(xiàng)目實(shí)施單位的依據(jù)。本次能力驗(yàn)證滿(mǎn)意率為93.5%，這說(shuō)明大部分實(shí)驗(yàn)室對(duì)分析方法的掌握應(yīng)用較好，少數(shù)實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)離群或可疑結(jié)果，需要其自行整改。建議參加實(shí)驗(yàn)室參照本報(bào)告給出的信息，根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，結(jié)合自身實(shí)際，重點(diǎn)從儀器狀態(tài)（如儀器的使用、調(diào)試、維護(hù)和方法是否優(yōu)化符合要求等）、標(biāo)準(zhǔn)品（如標(biāo)準(zhǔn)品是否過(guò)期、標(biāo)準(zhǔn)品純度是否折算等）、人員操作（樣品的提取、數(shù)據(jù)處理等操作過(guò)程加強(qiáng)培訓(xùn)）及結(jié)果計(jì)算等環(huán)節(jié)上查找原因，找出差距和問(wèn)題所在，制定糾正措施，有效整改，使參加此次能力驗(yàn)證達(dá)到真正目的。