補(bǔ)骨脂乙素通過多途徑誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞死亡

乳腺癌在女性惡性腫瘤中發(fā)生率位于第1位，其病 死率在癌癥相關(guān)死亡中位于第2位，嚴(yán)重危害著女性的健康和生命。目前，雖然乳腺癌的臨床治療取得了一定的效果，但還存在一些不足和難題，如手術(shù)的創(chuàng)傷、化療的不良反應(yīng)以及靶向藥物昂貴的治療費(fèi)用等。因此，尋找和研制一種安全、有效及經(jīng)濟(jì)的乳腺癌治療藥物是醫(yī)藥工作者的使命。

天然產(chǎn)物具有結(jié)構(gòu)新穎、多靶點(diǎn)及低毒性的優(yōu)勢，已逐漸成為抗腫瘤新藥研發(fā)的重要來源之一。補(bǔ)骨脂乙素（IBC）是從中藥補(bǔ)骨脂（Psoralea corylifolia L.）中提取分離的查爾酮類黃酮，結(jié)構(gòu)中含有3個(gè)酚羥基，并且A環(huán)上有1個(gè)異戊烯基取代（圖1A）。黃酮類化合物添加官能團(tuán)異戊烯基，可增加脂溶性和對生物膜的親和力以及靶蛋白的相互作用，從而可以顯著提高化合物的生物活性。IBC作為中藥補(bǔ)骨脂中主要活性成分之一，具有多種機(jī)制的抗腫瘤作用，如抑制Akt信號通路而抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)急性髓系白血病HL-60細(xì)胞活性氧（ROS）依賴的線粒體凋亡和分化，調(diào)控ERK/RSK2 信號通路而誘導(dǎo)肝癌HepG2 和HepG3B細(xì)胞凋亡，下調(diào)ER乳腺癌細(xì)胞中CD44的表達(dá)而提高對E2誘導(dǎo)的紫杉醇耐藥敏感性等。然而，目前有關(guān)IBC對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞死亡的作用及機(jī)制尚不明確。因此，本研究將以MCF-7細(xì)胞為研究對象，探索和研究IBC對細(xì)胞增殖、凋亡、自噬的影響，闡明其作用機(jī)制，為抗乳腺癌藥物的研制提供研究基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞株及細(xì)胞培養(yǎng)

人乳腺癌MCF-7細(xì)胞（中科院上海細(xì)胞庫）培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中，在5%CO，37 ℃以及飽和濕度的無菌培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)，取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

按照國務(wù)院對地理國情監(jiān)測工作總體部署和測繪地理信息事業(yè)轉(zhuǎn)型發(fā)展需要，從2016年起地理國情信息獲取進(jìn)入常態(tài)化監(jiān)測階段。本文通過對在地理國情監(jiān)測生產(chǎn)中頻發(fā)性、關(guān)鍵性問題的分析，總結(jié)歸納了基礎(chǔ)性地理國情監(jiān)測成果質(zhì)量控制的方法。

1.2 主要試劑

DMEM高糖培養(yǎng)基、胰酶、胎牛血清（Gibco）；二甲基亞砜（DMSO）、四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）、Nec-1、z-VAD-fmk、氯喹（Sigma）；recilisib（MCE）；100×雙抗（青霉素/鏈霉素）、結(jié)晶紫染液、Annexin V-FITC/PI雙染試劑盒、ATP檢測試劑盒、ROS檢測試劑盒、JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒（杭州碧云天公司）；抗體Bax、Bcl-2、Akt、p-Akt（Ser473）、p62、LC3、β-actin（CST）；ECL發(fā)光液、PVDF（Millipore）；IBC由蚌埠醫(yī)學(xué)院藥物化學(xué)研究室提供，純度為96.9%。

1.3 MTT比色法檢測IBC對細(xì)胞增殖的影響

將處于對數(shù)成長期的MCF-7細(xì)胞經(jīng)胰酶消化、離心、重懸后接種于96孔板中，每一孔內(nèi)接種細(xì)胞數(shù)量為8000個(gè)，繼續(xù)培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁后，處理不同濃度IBC（5、10、20、40、80 μmol/L），與工具藥z-VAD-fmk、Nec-1或CQ合用時(shí)，先分別單獨(dú)加入20 μmol/L的工具藥預(yù)處理1 h后換培養(yǎng)液，再加入40 μmol/L的IBC。加藥之后，將96孔板置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)分別培養(yǎng)24、48、72 h，同時(shí)設(shè)置陰性對照組和空白對照組。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入5 μg/L的MTT溶液各10 μL，繼續(xù)放置培養(yǎng)箱內(nèi)孵育4 h，取出培養(yǎng)板，吸除各孔內(nèi)的液體，每孔加入100 μL的DMSO溶液，置于37 ℃培養(yǎng)箱孵育30 min后，用多功能酶標(biāo)儀（BioTek，上海艾研生物科技公司）檢測吸光度值。計(jì)算細(xì)胞存活率（%）=（實(shí)驗(yàn)組值-調(diào)零組值）/（對照組A值?調(diào)零組值）×100%。上述實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.4 Annexin V-FITC/PI染色結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡

將MCF-7細(xì)胞按1.5×10個(gè)密度接種于12孔板過夜貼壁后，處理不同濃度的IBC（10、20、40、80 μmol/L）。繼續(xù)培養(yǎng)3 h后，冰上收集細(xì)胞，置于1500 r/min離心10 min，吸除上清液。每管加入500 μL 稀釋好的DCFH-DA（按1∶1000用無血清培養(yǎng)基稀釋DCFH-DA，使其終濃度為10 μmol/L），置于37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育30 min。孵育結(jié)束后，再次離心，去除上清液后加入500 μL預(yù)冷的PBS，在流式細(xì)胞儀上檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平的變化。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5 熒光染色結(jié)合熒光顯微鏡觀察細(xì)胞死亡

將MCF-7細(xì)胞按1.5×10/孔的濃度接種于12孔板中，處理不同濃度的IBC（10、20、40 μmol/L）后繼續(xù)培養(yǎng)24 h。用PBS清洗2次，每孔加入4%多聚甲醛1 mL，在室溫條件下固定10 min。吸除固定液，并加入10 μL的DAPI染液，室溫孵育10 min后，洗除DAPI染液降低背景干擾。向各孔加入Annexin V-FITC染色液5 μL、PI染色液5 μL，室溫孵育15 min，在熒光顯微鏡（IX-71，Olympus）下觀察熒光強(qiáng)度的變化。

將MCF-7細(xì)胞按2×10細(xì)胞/孔的密度接種于6孔板，待細(xì)胞貼壁后，處理不同濃度的IBC（10、20、40、80 μmol/L）。繼續(xù)培養(yǎng)5 h后，每孔加入200 μL的裂解液，于冰上裂解10 min后，12 000 r/min離心5 min，取上清液用于后續(xù)測定。另取一塊不透光96孔板于冰上，每孔加入100 μL的ATP檢測工作液（按照ATP檢測試劑盒說明書1∶9稀釋，冰上配制）室溫放置5 min后，向96孔板分別加入40 μL的樣品，混勻，反應(yīng)2 s后，用多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.6 免疫印跡法

將處于對數(shù)生長期的MCF-7細(xì)胞按5.0×10/孔的濃度接種于6孔板中，繼續(xù)培養(yǎng)16 h至貼壁。更換含不同濃度的IBC（10、20、40、80 μmol/L）或等體積DMSO的新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。經(jīng)收集細(xì)胞、提取蛋白、采用BCA法進(jìn)行蛋白定量、SDS-PAGE電泳，PVDF膜進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，封閉后，按照抗體說明書比例用TBST稀釋一抗（Bax、Bcl-2、Akt、p-Akt、p62、LC3及β-actin）4 ℃孵育過夜。一抗孵育結(jié)束后，用TBST清洗PVDF膜，并加入相對應(yīng)的二抗，室溫孵育2 h。二抗孵育結(jié)束后，再次用TBST清洗PVDF膜，ECL曝光顯影，通過凝膠成像系統(tǒng)（Bio-Rad）進(jìn)行分析。

來形成和積累了完整的中醫(yī)藥理論體系及臨床使用經(jīng)驗(yàn)。例如，天然產(chǎn)物雷公藤甲素、和厚樸酚等作為天然藥物的活性成分，具有較好的抗癌活性，已成為具有較好的應(yīng)用前景的抗癌新藥。我們前期研究中，發(fā)現(xiàn)IBC 對人乳腺癌MCF-7 細(xì)胞具有一定的細(xì)胞毒性。IBC作為傳統(tǒng)中藥補(bǔ)骨脂的活性成分之一，對多種腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的殺傷作用，但對于乳腺癌MCF-7細(xì)胞的研究未見報(bào)道，具有較好的潛力值得挖掘。

1.7 透射電鏡

電鏡結(jié)果顯示（圖5A），IBC處理的MCF-7細(xì)胞胞漿內(nèi)觀察到了自噬泡以及自噬小體。隨著IBC濃度的增加，自噬相關(guān)蛋白p62、LC3-II的表達(dá)逐漸升高，LC3-I的表達(dá)逐漸降低，從而使LC3-II/I的比值顯著升高（圖5B）。另外，自噬抑制劑CQ預(yù)處理1 h后，合用IBC（40 μmol/L）組的細(xì)胞生存率比單用相同濃度的IBC 組下降了23.3%（圖5C）。

1.8 ATP檢測

評估模塊為整個(gè)系統(tǒng)的應(yīng)用層，是核心技術(shù)。通過人工智能技術(shù)，完善評估模塊，建立多種模型，耦合多個(gè)可能造成影響的因素，最終實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)自動(dòng)評估，主動(dòng)上傳，最后自動(dòng)實(shí)現(xiàn)無人值守式的地災(zāi)預(yù)警。

利用數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)分析HIF-1α在胃癌中的預(yù)后意義…………………………………孫美濤，自加吉，陳 瑩，嚴(yán)長寶，戴莉萍，余 敏，熊 偉（32）

國外政界人士、學(xué)術(shù)界和媒體對“習(xí)近平新時(shí)代中國特色社會(huì)主義思想”進(jìn)行了初步探究，研究成果對國內(nèi)研究有借鑒價(jià)值。

1.9 活性氧（ROS）水平的檢測

將處于對數(shù)成長期的MCF-7細(xì)胞按1.5×10/孔的濃度接種于12孔板中，待細(xì)胞貼壁后處理不同濃度的IBC（10、20、40 μmol/L）繼續(xù)培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束后，經(jīng)PBS清洗、胰酶消化、離心，將每管中內(nèi)細(xì)胞數(shù)控制在5×10。然后，每管分別加入緩沖液500 μL 和Annexin V-FITC染色液5 μL輕輕混勻15 min，再加入PI染色液5 μL，并在室溫下避光孵育10 min后，使用流式細(xì)胞儀（BD）進(jìn)行檢測分析。

1.10 JC-1試劑盒檢測線粒體膜電位

我們通過JC-1染色結(jié)合熒光顯微鏡檢測了細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的變化情況。不同濃度的IBC作用于細(xì)胞后，利用熒光顯微鏡觀察到紅色熒光逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榫G色，提示細(xì)胞線粒體膜電位下降（圖6A）。隨著IBC給藥濃度的增加，MCF-7細(xì)胞內(nèi)ATP的水平逐漸下降，當(dāng)IBC的濃度40 μmol/L和80 μmol/L時(shí)，細(xì)胞內(nèi)ATP水平分別下降至55.37%和26.86%（圖6B）。利用熒光探針DCFH-DA檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平時(shí)，發(fā)現(xiàn)與對照組相比，隨著IBC作用濃度的增加，細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著升高（＜0.05，圖6C）。

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS16.0、GraphPad Prism9.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，兩組間比較采取獨(dú)立樣本檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，所有實(shí)驗(yàn)每組均獨(dú)立重復(fù)3次以上，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IBC對MCF-7細(xì)胞的增殖的影響

為檢測IBC對乳腺癌細(xì)胞增殖的影響，我們采用MTT比色法檢測了不同濃度的IBC（0～80 μmol/L）作用于MCF-7細(xì)胞24、48、72 h后的細(xì)胞存活率。量-效曲線結(jié)果顯示（圖1B），隨著IBC給藥濃度的增加以及作用時(shí)間的延長，MCF-7細(xì)胞存活率逐漸降低，其作用24、48、72 h 的半數(shù)抑制濃度（IC）值分別為38.46±0.75、31.31±0.63、28.26±0.48 μmol/L。

2.2 IBC誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡的作用

Annexin V-FITC/PI雙染結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示（圖2A），隨著給藥濃度的增加，IBC誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生死亡比列逐漸升高，其死亡率分別為7.1%、36.2%、56.1%。熒光雙染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（圖2B），隨著IBC濃度的增加，代表晚期凋亡（或壞死）的紅色熒光和代表早期凋亡的綠色熒光的熒光強(qiáng)度均顯著增強(qiáng)。預(yù)處理z-VAD-fmk（pan-caspase抑制劑）后合用IBC，與單獨(dú)處理IBC 組（40 μmol/L）相比，合用組的細(xì)胞存活率為（63.88±6.41）%，明顯高于單獨(dú)處理IBC 組（36.85±3.52）%，z-VAD-fmk保護(hù)了IBC誘導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞死亡（＜0.05，圖2C）。與此相比，預(yù)處理程序性壞死抑制劑Nec-1時(shí)，合用組與單獨(dú)處理IBC組之間的細(xì)胞存活率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05）。

2.3 IBC對凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（圖3A），與對照組相比，隨著IBC濃度的增加，MCF-7細(xì)胞內(nèi)促凋亡蛋白Bax表達(dá)量逐漸升高，而抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)量降低，從而使Bax/Bcl-2的比值顯著升高（圖3B～C）。另外，IBC濃度依賴性地降低MCF-7 細(xì)胞內(nèi)Akt 蛋白以及磷酸化p-Akt（Ser473）的表達(dá)。預(yù)處理recilisib（Akt激動(dòng)劑）后合用IBC，與單獨(dú)處理IBC組（40 μmol/L）相比，合用組的蛋白表達(dá)顯著高于單獨(dú)處理IBC組（圖4A～C）。以上結(jié)果與對照組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。

2.4 IBC誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞自噬的作用

將生長狀態(tài)良好的MCF-7 細(xì)胞接種于10 cm 培養(yǎng)皿，待細(xì)胞生長密度達(dá)到80%左右時(shí)，更換含IBC（40 μmol/L）或等體積DMSO的新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。到達(dá)作用時(shí)間后終止培養(yǎng)，吸除培養(yǎng)液，經(jīng)消化、離心收集細(xì)胞。加入預(yù)冷的PBS，置于4 ℃離心機(jī)離心5 min，棄去上清液，加入固定液（2.5%戊二醛）固定細(xì)胞，低溫保存，委托武漢賽維爾公司進(jìn)行后續(xù)處理并通過透射電鏡觀察、拍照記錄給藥后細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)。

2.5 IBC對線粒體功能的影響

將MCF-7細(xì)胞按2×10個(gè)密度接種于6孔板過夜貼壁后，處理不同濃度的IBC（10、20、40、80 μmol/L）。繼續(xù)培養(yǎng)3 h后，吸除培養(yǎng)液，并用PBS清洗。每孔加入JC-1 染色工作液和培養(yǎng)液各1 mL，充分混勻，放置細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育20 min。在孵育期間，按照說明書要求配制適量的JC-1染色緩沖液，并放置于冰浴。孵育結(jié)束后，吸除上清液，用JC-1染色緩沖液清洗2次，并加入2 mL的細(xì)胞培養(yǎng)液，置于熒光顯微鏡下觀察，拍照記錄結(jié)果。

3 討論

化療藥物（如紫杉醇、阿霉素等）在臨床上對乳腺癌具有一定的治療效果，然而腫瘤的耐藥性和化療藥物毒副反應(yīng)的出現(xiàn)將導(dǎo)致患者對化療藥物“可耐受的最大劑量”不斷降低，甚至被迫中斷化療。因此，如何讓化療藥物增效減毒是目前腫瘤化療中需解決的另一個(gè)關(guān)鍵問題。天然產(chǎn)物具有結(jié)構(gòu)多樣性和低毒性的獨(dú)特優(yōu)勢，從中尋求安全、有效的治療藥物用于克服乳腺癌細(xì)胞耐受與降低毒副反應(yīng)不失為乳腺癌治療研究的一個(gè)亮點(diǎn)。我國中藥/天然藥物資源非常豐富，且?guī)浊?/p>

大腦通過觀察、觸摸，以及實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)得到的一種能思考物體形狀、結(jié)構(gòu)、大小、輕重、質(zhì)地、位置關(guān)系的思維能力。

關(guān)于程序性細(xì)胞死亡（PCD）機(jī)制的研究一直是生命科學(xué)領(lǐng)域所關(guān)注的熱點(diǎn)之一，尤其在癌癥的發(fā)生、發(fā)展和治療中扮演著重要角色，特異性地誘導(dǎo)癌細(xì)胞發(fā)生PCD成為治療癌癥的主要策略之一，如凋亡、自噬等。我們采用流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡檢測IBC作用于乳腺癌細(xì)胞后的凋亡率，結(jié)果顯示IBC對MCF-7細(xì)胞具有促凋亡作用，且呈現(xiàn)濃度依賴性。凋亡作為最經(jīng)典的PCD方式，在維持腫瘤細(xì)胞增殖與死亡的動(dòng)態(tài)平衡中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，在這過程中Bcl-2家族蛋白扮演者重要角色，特別是Bax/Bcl-2比值變化能夠反映出細(xì)胞存活和凋亡的平衡關(guān)系。本研究中，天然產(chǎn)物IBC能顯著上調(diào)MCF-7細(xì)胞內(nèi)促凋亡蛋白Bax表達(dá)水平，同時(shí)下調(diào)抑凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，使Bax/Bcl-2比例顯著升高，從而誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生凋亡。

所有患者均于入室后常規(guī)面罩吸氧 （2 L/min），于手術(shù)操作開始前15 min靜脈注射地佐辛（生產(chǎn)批號：，規(guī)格1 mL:5 mg）5 mg，并于手術(shù)開始前5 min靜脈注射丙泊酚(生產(chǎn)批號：H20030115，規(guī)格 20 mL:0.2 g)2 mg/kg。患者入睡后，持續(xù)泵注丙泊酚 4～6 mg/（kg·h），瑞芬太尼0.1～0.2 μg/（kg·min）。 手術(shù)儀器采用德國 Wolf宮腔鏡電切系統(tǒng)術(shù)，術(shù)中注入5%葡萄糖溶液膨?qū)m，膨?qū)m壓力為80 mmHg，進(jìn)液速度為200 mL/min。

Akt為一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，又稱蛋白激酶B，是細(xì)胞內(nèi)PI3K/Akt信號通路傳導(dǎo)的核心。多種藥物、信號蛋白、生長因子等可通過Akt 蛋白Thr308 和Ser473位點(diǎn)的磷酸化，激活A(yù)kt及其信號通路調(diào)節(jié)下游相關(guān)分子，對腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲與轉(zhuǎn)移等產(chǎn)生作用。免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，IBC 顯著降低MCF-7細(xì)胞內(nèi)的Akt及p-Akt-473蛋白表達(dá)水平，進(jìn)而可能抑制PI3K/Akt 信號通路的傳導(dǎo)，發(fā)揮促凋亡作用。另外，用凋亡抑制劑z-VAD-fmk預(yù)處理MCF-7后，IBC誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡被部分保護(hù)，而Nec-1（程序性壞死抑制劑）沒有保護(hù)作用，進(jìn)而證實(shí)了IBC誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡方式為凋亡。

有些時(shí)候，凋亡的發(fā)生伴隨著細(xì)胞自噬，它們之間的關(guān)系復(fù)雜，自噬對細(xì)胞凋亡產(chǎn)生積極或消極的作用，即自噬在腫瘤細(xì)胞中常常產(chǎn)生存活和死亡的雙重調(diào)控作用。自噬，也稱為II型PCD，在細(xì)胞生存、代謝、應(yīng)激適應(yīng)、免疫及抗衰老等方面起著重要的生理作用。微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3）蛋白作為自噬發(fā)生的生物標(biāo)志物之一，發(fā)生自噬時(shí)胞漿型LC3-I被酶解掉一小段多肽，轉(zhuǎn)變?yōu)槟ば蚅C3-II，即LC3-II/I比值的大小可推測自噬水平的高低。本研究中，我們使用IBC處理MCF-7細(xì)胞后，通過電鏡觀察到自噬小體的產(chǎn)生。同時(shí)，免疫印跡法實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)自噬相關(guān)蛋白p62、LC3-II/I的比值上調(diào)，證實(shí)了IBC誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生自噬。進(jìn)一步，用自噬抑制劑CQ預(yù)處理細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)抑制自噬增加了MCF-7細(xì)胞對IBC的敏感性，說明細(xì)胞自噬保護(hù)了乳腺癌MCF-7細(xì)胞的存活。

重介質(zhì)旋流器本身沒有運(yùn)動(dòng)部件，物料在旋流器中實(shí)現(xiàn)分選的關(guān)鍵是介質(zhì)泵所施加的能量產(chǎn)生了合適的離心力場，可以說介質(zhì)泵是重介質(zhì)旋流器的動(dòng)力源。

線粒體是細(xì)胞產(chǎn)生能量的重要細(xì)胞器，也是ROS產(chǎn)生和作用的主要部位。研究表明，線粒體功能障礙具體表現(xiàn)為ATP生成減少，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的ROS水平升高，使氧化應(yīng)激和抗氧化之間平衡被打破，導(dǎo)致線粒體膜損傷，從而誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。此外，ROS作為第二信使參與調(diào)控HIF-1α、PI3K/Akt、NF-κB、AMPK、PKM2 等信號通路，參與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、自噬及侵襲等多個(gè)生物學(xué)過程。本研究結(jié)果證實(shí)了IBC誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞死亡與線粒體功能變化密切相關(guān)，即IBC導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ATP水平下降、線粒體膜電位降低、產(chǎn)生和累積大量的ROS，從而誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生凋亡和自噬。

綜上所述，天然產(chǎn)物IBC 能顯著抑制人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)發(fā)生細(xì)胞凋亡和自噬，其機(jī)制可能為上調(diào)Bax、p62和LC3-II的表達(dá)、下調(diào)Bcl-2、Akt、p-Akt-473 及LC3-I 的表達(dá)，且細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生和積聚大量ROS，從而誘導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡。然而，IBC的體內(nèi)抗乳腺癌作用以及可能存在的潛在毒副作用有待進(jìn)一步研究。