NY/T 761-2008農(nóng)殘檢測(cè)樣品前處理方法的優(yōu)化

陳云虹 劉 慧 符錦鋒

（海南省天然橡膠質(zhì)量檢驗(yàn)站，海南 ?？?570206）

蔬菜和水果是人們?nèi)粘Ｉ畋夭豢缮俚氖澄?，能夠?yàn)槿梭w提供各種營(yíng)養(yǎng)成分（如維生素C、胡蘿卜素等），滿足人體生長(zhǎng)發(fā)育的需要，經(jīng)常食用蔬菜水果能夠預(yù)防多種疾病的發(fā)生。蔬菜和水果在種植過程中容易受到各種病蟲害的侵害，噴灑農(nóng)藥是防治蔬菜水果病蟲害的主要方法之一，我國(guó)每年使用農(nóng)藥130-300萬(wàn)噸。目前，常用的農(nóng)藥有殺蟲劑（如毒死蜱、對(duì)硫磷、氯氰菊酯等）、殺菌劑（如百菌清、嘧菌酯、苯醚甲環(huán)唑等）、除草劑（如百草枯、敵草腈等）及植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（如多效唑、乙烯利等）。但由于農(nóng)藥具有水溶性、難以降解等化學(xué)性質(zhì)，且農(nóng)戶不合理使用（亂用、濫用），或者蔬菜水果沒有過安全采摘期，常引起農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留，嚴(yán)重危害人體健康。福建茶葉農(nóng)殘超標(biāo)、海南“毒豇豆”、山東青島“毒韭菜”，蔬菜水果農(nóng)藥殘留超標(biāo)事件頻頻發(fā)生。同時(shí)，噴灑的農(nóng)藥通過進(jìn)入土壤、水體，不僅污染環(huán)境，還會(huì)通過食物鏈進(jìn)入人體，進(jìn)一步影響人體健康。因此，準(zhǔn)確、及時(shí)、高效地對(duì)農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留進(jìn)行分析測(cè)定是保障人民安全的重要措施之一。

目前，農(nóng)藥多殘留檢測(cè)中常用的方法是NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》、GB 23200.8-2016《水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜法》及GB 23200.113-2018《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)植物源性食品中208種農(nóng)藥農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》。但氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀價(jià)格昂貴且對(duì)人員專業(yè)技術(shù)能力要求相對(duì)較高，在多數(shù)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室并未普及。而NY/T 761-2008雖然與之前的方法相比，該標(biāo)準(zhǔn)前處理步驟明顯減少，但是仍然存在復(fù)雜繁瑣、時(shí)間長(zhǎng)、有機(jī)溶劑用量大、回收率較低等問題?，F(xiàn)階段對(duì)單一基質(zhì)農(nóng)殘檢測(cè)前處理的優(yōu)化和單一種類農(nóng)殘（有機(jī)磷類或有機(jī)氯類）檢測(cè)前處理的優(yōu)化研究比較多，對(duì)多種基質(zhì)多農(nóng)藥殘留前處理的優(yōu)化研究較少。本研究在NY/T 761-2008的基礎(chǔ)上，將前處理步驟進(jìn)行優(yōu)化，選取4種基質(zhì)（黃瓜、豇豆、小白菜、百香果）作為試驗(yàn)樣品，5種常規(guī)農(nóng)藥（毒死蜱、三唑磷、三唑酮、甲氰菊酯、聯(lián)苯菊酯）作為測(cè)試農(nóng)藥，分別計(jì)算優(yōu)化后方法的回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差、最低檢出限等，以期為蔬菜水果農(nóng)藥多殘留檢測(cè)提供一種操作簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)高效、準(zhǔn)確可靠的前處理方法。

1.材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 儀器

7890 A氣相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）：配有FPD檢測(cè)器；Clarus 580氣相色譜儀（美國(guó)PerkinElmer公司）：配有ECD檢測(cè)器；DL-5C大容量離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；Vortex3渦旋振蕩器（德國(guó)IKA公司）；RE-2000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；玻璃器皿（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

乙腈、正己烷、丙酮等有機(jī)溶劑（美國(guó)Tedia公司）：色譜純；毒死蜱、三唑磷、三唑酮、甲氰菊酯、聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（天津農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境科研監(jiān)測(cè)所）：濃度為100ug/mL；弗羅里矽柱（德國(guó)Simon Aldrich公司）：體積6 mL，填充物1000mg；氯化鈉（廣州化學(xué)試劑廠）：分析純。

1.1.3 試驗(yàn)樣品

黃瓜、豇豆、小白菜、百香果樣品來(lái)源于海南省例行監(jiān)測(cè)樣品，經(jīng)檢測(cè)不含上述測(cè)試農(nóng)藥。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（10 μg/mL）：將購(gòu)買的100μg/mL各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)母液分別選用與母液相同的溶劑稀釋為10 μg/mL，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于-18℃冰箱保存待用。

純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)溶液配制：用移液管分別移取一定體積的10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液至10mL容量瓶中，毒死蜱、三唑磷一組，用丙酮定容；三唑酮、甲氰菊酯、聯(lián)苯菊酯一組，用正己烷定容，配制濃度分別為0.05、0.10、0.20、0.50、1.00μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.2 樣品前處理

（1）樣品制備

將待測(cè)樣品切碎，置于料理機(jī)打碎混勻，于-18℃冰箱保存待用。

（2）提取

稱取15g試樣（精確至0.01g）于100mL離心管中，加入30mL乙腈，隨后加入含有5～7g氯化鈉，蓋上離心管蓋，渦旋混勻震蕩2～3min后4200r/min離心5min。

（3）凈化

吸取5.00mL上清液至100mL平底燒瓶，將燒瓶放在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，40℃～45℃水浴蒸至近干，加入2.00mL丙酮復(fù)溶，過0.2μm微孔濾膜，7890A-FPD上機(jī)檢測(cè)。

另取5.00 mL上清液至100mL平底燒瓶，將燒瓶放在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，40℃～45℃水浴蒸至近干，加入2.00mL正己烷復(fù)溶，蓋上鋁箔，待凈化。將弗羅里矽柱依次用5.00mL丙酮+正己烷（10+90）、正己烷預(yù)淋洗，條件化，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即倒入上述待凈化溶液，用100mL平底燒瓶接收洗脫液，用5.00mL丙酮+正己烷（10+90）沖洗燒杯后淋洗弗羅里矽柱，并重復(fù)一次。將盛有淋洗液的圓底燒瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，40℃～45℃水浴蒸至近干，用2.00mL正己烷復(fù)溶，過0.2μm微孔濾膜，Clarus 580-ECD上機(jī)檢測(cè)。

1.2.3 上機(jī)檢測(cè)

（1）7890A-FPD氣相條件

色譜柱：DB-17（30m×0.25mm，0.25μm）；進(jìn)樣口溫度：220℃；檢測(cè)器溫度：250℃；燃?xì)饧傲髁浚簹錃猓?5 mL/min；助燃?xì)饧傲髁浚嚎諝猓?00mL/min；升溫程序：150℃；進(jìn)樣模式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1.00μL；載氣及流量：高純氮（99.999%），3.00 mL/min。

（2）Clarus 580-ECD氣相條件

色譜柱：DB-5（30m×0.25mm，0.25μm）；進(jìn)樣口溫度：200℃；檢測(cè)器溫度：320℃；升溫程序：；進(jìn)樣模式：分流進(jìn)樣，分流比10：1；進(jìn)樣量：1.00μL；載氣及流量：高純氮（99.999%），1.00 mL/min。

1.2.4 試驗(yàn)設(shè)置

在已稱好的待測(cè)樣品中分別加入5種農(nóng)藥(毒死蜱、三唑磷、三唑酮、甲氰菊酯、聯(lián)苯菊酯)標(biāo)樣，制成濃度為0.05、0.40、0.80mg/Kg的模擬加標(biāo)樣品，按1.2.2方法進(jìn)行前處理，按1.2.3方法上機(jī)測(cè)定。分別在0.05、0.20、0.40mg/Kg濃度水平下設(shè)置6次重復(fù)和1次扣除樣品背景的重復(fù)。定量時(shí)每次重復(fù)分別扣除樣品空白背景值。

2.結(jié)果與分析

2.1 方法的相關(guān)系數(shù)與檢出限

經(jīng)計(jì)算，5種農(nóng)藥的線性范圍為0.05～1.00μg/mL，r在0.9973～0.9999，以3倍信噪比（S/N）所對(duì)應(yīng)的農(nóng)藥濃度為檢出限，結(jié)果建見表1。

表1 5種農(nóng)藥檢測(cè)方法的相關(guān)系數(shù)與檢出限

由表1可知，5種農(nóng)藥的檢出限在0.001～0.02mg/Kg，能夠滿足測(cè)定蔬菜和水果農(nóng)藥殘留衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的要求。

2.2 回收率與精密度

4種空白樣品（黃瓜、豇豆、小白菜、百香果）中分別加入5種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，制成濃度為0.05、0.40、0.80mg/Kg的模擬加標(biāo)樣品，各重復(fù)6次，測(cè)定各組分的回收率和精密度（精密度用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示），結(jié)果見表2。

由表2可知，4種基質(zhì)中，加標(biāo)濃度為0.05mg/Kg時(shí)，5種農(nóng)藥的平均回收率為84.2%～110.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.0%～6.7%；加標(biāo)濃度為0.40mg/Kg時(shí)，5種農(nóng)藥的平均回收率為84.5%～104.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～6.8%；加標(biāo)濃度為0.80mg/Kg時(shí)，加標(biāo)濃度為85.5%～107.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.6%～7.8%。各基質(zhì)中五種農(nóng)藥三個(gè)加標(biāo)濃度的回收率都符合GB/T 27404-2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)檢驗(yàn)要求（80%～120%）。

表2 四種基質(zhì)中5種農(nóng)藥的平均回收率和精密度

豇豆毒死蜱 110.8 3.1 96.7 1.7 107.8 3.7三唑磷 93.5 5.2 88.3 4.6 90.7 5.2三唑酮 85.1 4.8 84.5 6.1 88.2 7.0聯(lián)苯菊酯 90.7 4.0 103.1 1.9 100.6 3.3甲氰菊酯 107.4 3.9 90.6 3.2 89.5 4.8小白菜毒死蜱 100.8 2.2 102.2 2.7 99.6 4.1三唑磷 87.8 3.5 90.6 5.1 85.7 5.7三唑酮 84.2 3.9 93.7 6.8 97.2 7.5聯(lián)苯菊酯 94.2 4.7 102.1 3.7 101.8 2.4甲氰菊酯 96.3 2.9 97.6 4.2 103.7 3.9百香果毒死蜱 105.3 2.0 98.8 2.6 106.6 4.0三唑磷 100.4 4.3 90.6 4.9 96.1 5.0三唑酮 90.6 6.7 91.2 5.0 87.2 7.8聯(lián)苯菊酯 95.5 3.2 101.1 3.6 92.4 1.6甲氰菊酯 87.6 4.8 92.9 3.8 85.5 5.6

3.結(jié)論

本研究在NY/T 761-2008基礎(chǔ)上，改變了前處理方法，以4500r/min離心5min代替過濾和靜置30min2個(gè)步驟，以40～45℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)代替氮吹，對(duì)線性相關(guān)系數(shù)、檢測(cè)線、回收率、精密度進(jìn)行考察。結(jié)果表明，該方法能夠滿足蔬菜水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多殘留檢驗(yàn)檢測(cè)需求。且運(yùn)用該方法具有回收率高、重復(fù)性好、耗時(shí)短、有機(jī)溶劑和玻璃器皿使用少等優(yōu)點(diǎn)，適用于批量樣品的前處理要求，可以應(yīng)用于氣相色譜法測(cè)定蔬菜和水果農(nóng)藥殘留實(shí)驗(yàn)中。

4.實(shí)際樣品檢測(cè)

將優(yōu)化后的前處理方法運(yùn)用于實(shí)際樣品檢測(cè)，共檢測(cè)海南省例行監(jiān)測(cè)樣品500多個(gè)，沒有禁用農(nóng)藥檢出，檢出氯氰菊酯11個(gè)，氯氟氰菊酯20個(gè)，均不超過食品中農(nóng)藥最大殘留限量。