老年膿毒癥患者血清miR-206及miR-451水平與疾病嚴重程度和預后的相關性研究

于 莉，張 敏，張小華，李麗華（儋州市人民醫(yī)院檢驗科，海南儋州 571799）

膿毒癥是由感染、創(chuàng)傷、手術等引起的全身炎癥反應綜合征，在老年人中有著極高的發(fā)病率和死亡率，是目前世界范圍內(nèi)威脅人類健康的主要疾病之一[1]。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）作為一類長度為18～24bp的非編碼RNA分子，參與組織炎癥損傷等病理過程，在膿毒癥的發(fā)生發(fā)展及預后判斷中發(fā)揮著重要的作用[2-3]。近年來有研究指出，miR-206及miR-451通過多種方式調(diào)節(jié)免疫應答，對膿毒癥的發(fā)生發(fā)展有重要影響，有望為膿毒癥的治療提供新方向[4-5]。然而，目前還沒有老年膿毒癥決定性的診斷或預后生物標志物。為此，本研究通過檢測老年膿毒癥患者第1，3和7天血清miR-206及miR-451表達水平變化，分析其對老年膿毒癥患者嚴重程度及預后判斷的價值，為了解miR-206及miR-45是否可能是老年膿毒癥的有用生物標志物。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2018年1月～2020年12月儋州市人民醫(yī)院收治的158例老年膿毒癥患者，其中男性93例，女性65例，年齡60～82（70.83±9.52）歲。根據(jù)國際嚴重膿毒癥及膿毒性休克診療指南[6]，將158例膿毒癥患者分為膿毒癥非休克組（n=94）和膿毒癥休克組（n=64）。以158例膿毒癥患者住院當天為研究起始點，根據(jù)患者28天的生存情況，將其分為存活組（n=115）和死亡組（n=43）。死亡時間為15.30±10.20天，死亡原因為休克、多器官功能衰竭、腎衰竭、心力衰竭及呼吸衰竭。納入標準：①符合國際嚴重膿毒癥及膿毒性休克診療指南；②住院時間≥7天。排除標準：①并發(fā)血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病及惡性腫瘤者；②不能配合研究者。膿毒癥非休克組和膿毒癥休克組的性別、年齡及基礎疾病等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）。

1.2 儀器與試劑 7300型熒光定量PCR儀（美國ABI公司），PCR試劑盒、RNeasy試劑盒、miRNA Easy試劑盒和Trizol試劑盒均購自北京奧科生物有限公司。

1.3 方法 所有患者于住院第1，3和7天采集靜脈血3 ml離心分離血清，使用ABI 7300型熒光定量PCR儀進行實時熒光定量聚合酶鏈反應(RTPCR)。以U6為實驗內(nèi)參，PCR總反應體系為20 μl：1μl 引物及探針Mix（20×），10μl TaqMan通用混合物溶液（2×），1.33 μl反轉錄產(chǎn)物cDNA，7.67μl雙蒸水；反應條件：95℃變性15 s，60℃退火60 s，72℃延伸60s，進行45個循環(huán)。采用2-△△Ct法計算結果。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗。計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗。應用受試者工作特征（ROC）曲線分析miR-206及miR-451預測老年膿毒癥患者死亡的價值。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 膿毒癥休克組和膿毒癥非休克組血清miR-206及miR-451表達水平比較 見表1。膿毒癥休克組第1，3，7天血清miR-206及miR-451表達水平均明顯高于膿毒癥非休克組，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01）。

表1 膿毒癥休克組和非休克組血清miR-206及miR-451表達水平比較（±s）

表1 膿毒癥休克組和非休克組血清miR-206及miR-451表達水平比較（±s）

項目 膿毒癥非休克組（n=94） 膿毒癥休克組（n=64） t P miR-206 第1天 2.62±1.05 4.28±1.60 13.512 ＜0.01第3天 3.15±1.40 5.63±2.19 16.715 ＜0.01第7天 2.96±1.27 6.05±2.58 19.630 ＜0.01 miR-451 第1天 1.93±0.86 3.08±1.42 10.417 ＜0.01第3天 2.46±1.02 4.27±1.53 14.615 ＜0.01第7天 2.30±0.95 4.93±1.80 16.804 ＜0.01

2.2 膿毒癥死亡組和膿毒癥存活組血清miR-206及miR-451表達水平比較 見表2。死亡組第1，3，7天血清miR-206及miR-451表達水平均明顯高于存活組，差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01）。

表2 膿毒癥死亡組和存活組血清miR-206及miR-451表達水平比較（±s）

表2 膿毒癥死亡組和存活組血清miR-206及miR-451表達水平比較（±s）

項目 存活組（n=115） 死亡組（n=43） t P miR-206 第1天 2.50±0.97 4.45±1.66 14.730 ＜0.01第3天 2.90±1.35 6.12±2.64 20.153 ＜0.01第7天 2.83±1.31 6.37±2.71 22.814 ＜0.01 miR-451 第1天 1.80±0.81 3.35±1.48 12.506 ＜0.01第3天 2.17±0.92 4.70±1.72 16.375 ＜0.01第7天 2.05±0.86 5.37±1.80 20.748 ＜0.01

2.3 miR-206及miR-451預測老年膿毒癥患者死亡的價值 見表3和圖1，圖2，圖3。在單項指標中，第3天miR-206最佳截值取4.52時，其預測老年膿毒癥患者死亡的敏感度和特異度較好，分別為82.7%和88.0%。第3天miR-206及miR-451兩項聯(lián)合預測老年膿毒癥患者死亡的曲線下面積（0.936，95%CI ：0.877～0.994）明顯高于單項miR-206（0.853，95% CI ：0.794～0.915）及miR-451（0.828，95%CI ：0.770～0.884），差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其敏感度和特異度為97.2%和86.0%。

圖3 miR-206及miR-451兩項聯(lián)合預測老年膿毒癥患者死亡的ROC曲線

表3 miR-206及miR-451預測老年膿毒癥患者死亡的價值 （%）

圖1 血清miR-206表達水平預測老年膿毒癥患者死亡的ROC曲線

3 討論

膿毒癥是一種免疫反應失調(diào)的危重癥，影響全球人類生命健康。miRNA是一類基因表達的重要調(diào)控因子，參與調(diào)控細胞增生、凋亡、免疫炎性反應等多種機體生物學過程，在膿毒癥相關性炎癥反應以及器官損傷過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用[7-8]。LI等[9]研究證實，miRNA表達水平的變化與膿毒癥病程發(fā)展密切相關，監(jiān)測分析miRNA水平有助于輔助診斷膿毒癥，判斷疾病預后，有望作為膿毒癥治療的潛在靶點。ROGOBETE等[10]研究認為，miRNA是一類內(nèi)源性非編碼RNA，通過調(diào)控炎癥信號通路中關鍵分子的表達，參與調(diào)控膿毒癥的炎癥反應及免疫抑制，在膿毒癥診斷和預后評估中具有較大的潛力。

本研究膿毒癥休克組第1，3，7天血清miR-206及miR-451表達水平均明顯高于膿毒癥非休克組；死亡組第1，3，7天血清miR-206及miR-451表達水平均明顯高于存活組。說明血清miR-206及miR-451表達水平在膿毒癥休克患者早期即可明顯升高，其水平變化可在一定程度上反映膿毒癥患者的病情嚴重程度，死亡患者引起的炎癥反應無法得到有效地控制，血清miR-206及miR-451表達水平顯著升高。提示miR-206及miR-451高表達的患者，病情較為嚴重，臨床上應及時采取有效的治療措施。GUI等[11]研究顯示，隨著膿毒癥患者病情加重，miRNA表達水平逐漸升高，提示miRNA表達與膿毒癥患者病情嚴重程度相關，是反映膿毒癥患者病情嚴重程度的新型指標。SZILáGYI等[12]研究表明，miRNA的異常表達與膿毒癥的臨床特征和預后相關，可以作為膿毒癥潛在的診斷和預后的生物標志物，為膿毒癥基因水平治療提供新的思路。

本研究ROC曲線顯示，不同時間點血清miR-206及miR-451表達水平預測老年膿毒癥患者死亡的曲線下面積不同，第3天miR-206及miR-451兩項聯(lián)合預測老年膿毒癥患者死亡的曲線下面積最大，對預測老年膿毒癥患者死亡的價值較高。LIANG等[13]研究指出，與健康人相比，膿毒癥患者miR-206顯著上調(diào)，血清miR-206的表達與膿毒癥的嚴重程度及預后呈正相關，可能是評估膿毒癥嚴重程度和預后的潛在生物標志物。WANG等[14]研究發(fā)現(xiàn)，血清miR-451a升高與膿毒癥嚴重程度和炎癥反應相關，可作為膿毒癥的診斷生物標志物和判斷疾病嚴重程度的潛在指標。另有研究認為，miRNA表達水平升高與膿毒癥患者病情嚴重和預后不良相關，可以作為評估膿毒癥患者病情嚴重程度和預后的一個有用的生物學指標[15]。

綜上所述，血清miR-206及miR-451表達水平在老年膿毒癥患者中明顯升高，其高表達與老年膿毒癥的病情嚴重程度及預后相關，動態(tài)監(jiān)測第3天血清miR-206及miR-451表達水平對預測老年膿毒癥患者死亡具有較好的價值。