不同消毒方式對義齒模具微生物數(shù)量的影響

馮群，李婧，王蕊，李軍

1 北檢潤和（北京）技術(shù)服務(wù)有限公司 （北京 101111）；2 弘潤同創(chuàng)（北京）資產(chǎn)管理有限公司 （北京 100010）；3 北京弘海微創(chuàng)科技有限公司 （北京 102308）

隨著人們生活水平逐步提高，物質(zhì)選擇越發(fā)豐富，口腔疾病發(fā)病率也隨之升高。口腔是眾多微生物的棲息地，口腔中的微生物種類繁多。目前，口腔中已發(fā)現(xiàn)600多種不同的細(xì)菌、真菌、病毒、支原體和衣原體等微生物物種，這些微生物統(tǒng)稱為口腔微生物組[1]。微生物是影響人體健康平衡的重要組成部分，細(xì)菌、真菌、控制菌是微生物的主要組成種類。（1）細(xì)菌：溶血性鏈球菌，可引起皮膚和皮下組織的化膿性炎癥、呼吸道感染，還可通過食品引起猩紅熱、流行性咽炎的暴發(fā)流行。（2）真菌：包含霉菌、酵母菌等，主要會對人體的皮膚系統(tǒng)和內(nèi)臟系統(tǒng)造成傷害。（3）控制菌：大腸桿菌感染會引起腹瀉、腹痛、惡心嘔吐、發(fā)熱等；綠膿桿菌感染會引發(fā)壞疽深膿皰病、綠甲綜合征、毛囊炎等；金黃色葡萄球菌可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至引發(fā)敗血癥、膿毒癥等全身感染[2]。

口腔內(nèi)存在的微生物多種多樣，其對牙齒健康有較大影響，因此牙齒疾病的出現(xiàn)在所難免。牙齒最大的作用是咀嚼食物，當(dāng)出現(xiàn)疾病時，牙齒無法正常行使咀嚼功能，因此要對牙齒及時修復(fù)。牙齒缺損是牙病的一種，治療需要根據(jù)其嚴(yán)重程度，選擇不同的治療方案。其中，安裝義齒是治療牙齒缺損的一種方案，義齒即人們常說的“假牙”。

制作義齒需要模具，義齒模具是通過印模和灌模兩個工藝流程制作的。（1）印模：口腔科一般使用硅膠材料進(jìn)行取模，從而獲取患者缺牙區(qū)、基牙、基托區(qū)的印模[3]，操作步驟是將軟化的硅膠材料填入托盤，放入患者口中，讓患者進(jìn)行咬合，等待數(shù)分鐘后，待硅膠材料硬化后即可得到患者個性化的印模（圖1）。（2）灌模：在取到的印模內(nèi)灌注石膏，石膏凝固后，即可得到患者的牙齒模型（圖2），然后根據(jù)石膏模型再進(jìn)行后續(xù)的工藝，制作用于替代壞牙的義齒。

圖1 印模

圖2 灌模后的模型

由此可見，義齒模具是由印模后硅膠模具和灌模后石膏模具兩部分組成，且義齒模具的兩個部分都會直接或者間接接觸患者的口腔，義齒模具上微生物的數(shù)量也會直接或間接對患者產(chǎn)生影響，因此控制義齒模具上微生物的數(shù)量非常必要?；诖?，本研究通過測試微生物的生長情況，驗證70 ℃時對義齒模具進(jìn)行有效消毒的時間，使義齒模具達(dá)到消毒級別。

1 試驗設(shè)計

1.1 樣品來源

本次試驗樣品由北京某口腔醫(yī)療科技有限公司提供。

1.2 試驗儀器

試驗用儀器包括立式壓力蒸汽滅菌器（山東博科消毒設(shè)備有限公司，型號BKQ-B50 Ⅱ）、潔凈工作臺（北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司，型號DL-CJ-2ND I）、微生物恒溫培養(yǎng)箱（山東博科消毒設(shè)備有限公司，型號BJPX-250）、霉菌培養(yǎng)箱[山東博科消毒設(shè)備有限公司，型號BJPXM250（PC）]、電子天平（METTLER-TOLEDO，型號XSR205DU）。

1.3 消毒方式

義齒模具于開放性的普通環(huán)境下制作而成，會附著大量的微生物。為了控制義齒模具中微生物的數(shù)量，降低微生物對人體健康的影響，需要選擇一種適合的消毒方式對義齒模具進(jìn)行消毒處理。本研究依次采用化學(xué)消毒劑、物理滅菌方法及低溫消毒+化學(xué)消毒劑3種方式對義齒模具進(jìn)行消毒。

1.3.1 化學(xué)消毒劑

采用75%醫(yī)用酒精對樣品表面進(jìn)行擦拭消毒，但是75%醫(yī)用酒精只能對樣品表面進(jìn)行消毒，無法達(dá)到穿透效果，樣品內(nèi)部無法消毒，該消毒方式無法達(dá)到對義齒模具進(jìn)行整體消毒的目的。

1.3.2 物理滅菌方法

采用壓力蒸汽滅菌器滅菌，設(shè)置滅菌器溫度為121 ℃，時間為30 min，滅菌結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)在高溫狀態(tài)下，硅膠模具的材質(zhì)出現(xiàn)軟化現(xiàn)象，導(dǎo)致硅膠模具損壞，因此，此方法不適合該樣品。

1.3.3 低溫消毒+化學(xué)消毒劑

由于硅膠材料不能耐受高溫，為了達(dá)到義齒模具整體消毒的目的，確保消毒效果，最終確定選用低溫消毒與化學(xué)消毒劑相結(jié)合的方式，低溫消毒設(shè)備為消毒柜，將消毒柜溫度固定在70 ℃，通過改變消毒時間，驗證不同消毒方式對義齒模具微生物消毒效果的差異。具體消毒方法為：義齒模具制作完成后，先用75%醫(yī)用酒精對樣品外表面進(jìn)行擦拭消毒，擦拭時間為30 s，然后將擦拭后的樣品放置于消毒柜內(nèi)，啟動消毒柜，將消毒柜溫度設(shè)置為70 ℃，將消毒時間依次設(shè)置為20、40、120 min 進(jìn)行試驗。

1.4 檢測標(biāo)準(zhǔn)

目前，業(yè)界缺少關(guān)于義齒模具微生物控制相關(guān)的現(xiàn)行有效的檢測標(biāo)準(zhǔn)，基于義齒模具的意義及用途，且其符合一次性使用衛(wèi)生用品的定義[使用一次后即丟棄的、與人體直接或間接接觸的、并為達(dá)到人體生理衛(wèi)生或衛(wèi)生保?。咕蛞志┠康亩褂玫母鞣N日常生活用品，產(chǎn)品性狀可以是固體也可以是液體]，因此本研究參考GB 15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》[4]對于微生物的要求進(jìn)行檢測，產(chǎn)品種類選擇消毒級，微生物指標(biāo)按該產(chǎn)品種類進(jìn)行控制。一次性使用衛(wèi)生用品微生物指標(biāo)（消毒級）見表1。

表1 一次性使用衛(wèi)生用品微生物指標(biāo)（消毒級）

1.5 樣品的選擇

依據(jù)GB 15979-2002附錄B《產(chǎn)品的微生物檢測方法》規(guī)定，每次應(yīng)至少抽取3個最小銷售包裝用于檢測使用，因印模的硅膠模具和灌模的石膏模具為一套樣品，所以每次試驗選取3套模具作為試驗樣品。

1.6 樣品的處理

將樣品在規(guī)定的消毒滅菌方式下處理后，在100級凈化條件下，用無菌方法打開消毒滅菌后的樣品，從3套樣品中隨機取樣，稱取共計（10±1）g 樣品，剪碎后加入200 ml 滅菌0.9%氯化鈉注射液中，充分混勻，得到一個0.9%氯化鈉注射液樣液，用于其他項目的檢測。

1.7 微生物試驗過程

1.7.1 細(xì)菌菌落總數(shù)檢測

取已滅菌的一次性平皿5個，將處理過的0.9%氯化鈉注射液樣液分別接種到平皿內(nèi)，每個平皿接種1 ml 0.9%氯化鈉注射液樣液，分別在5個平皿內(nèi)傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15～20 ml，混合均勻，待培養(yǎng)基凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置于35 ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，按照以下公式計算平板上的菌落數(shù)：

其中，X1為細(xì)菌菌落總數(shù)（單位cfu/g），A為5塊營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上的細(xì)菌菌落總數(shù)，K為稀釋度。

1.7.2 大腸菌群檢測

取0.9%氯化鈉注射液樣液5 ml 接種到50 ml 乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，置于35 ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則為大腸菌群陰性；如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需對乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)樣液進(jìn)行分離提純，取疑似菌落進(jìn)行革蘭染色，同時將疑似的菌落接種到新的乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，觀察并確定結(jié)果。

1.7.3 綠膿桿菌檢測

取0.9%氯化鈉注射液樣液5 ml 接種到50 ml SCDLP（增菌培養(yǎng)基）培養(yǎng)液中，充分混勻，置于35 ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，若培養(yǎng)液中有黃綠色或藍(lán)綠色菌膜生長，需對菌液進(jìn)行分離提純，取可疑菌落進(jìn)行革蘭染色，若鏡檢為革蘭陰性菌，需進(jìn)一步對可疑菌落進(jìn)行鑒定，鑒定試驗包括氧化酶試驗、綠膿菌素試驗、硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗、明膠液化試驗、42 ℃生長試驗。

1.7.4 金黃色葡萄球菌檢測

取0.9%氯化鈉注射液樣液5 ml 接種到50 ml SCDLP（增菌培養(yǎng)基）培養(yǎng)液中，充分混勻，置于35 ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，對菌液進(jìn)行分離提純，挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭染色，若鏡檢為革蘭陽性球菌，需進(jìn)一步對可疑菌落進(jìn)行鑒定，鑒定試驗包括甘露醇發(fā)酵試驗、血漿凝固酶試驗。

1.7.5 溶血性鏈球菌檢測

取0.9%氯化鈉注射液樣液5 ml 加入50 ml 葡萄糖肉湯中，置于35 ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，對菌液進(jìn)行分離提純，挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭染色，如鏡檢為革蘭陽性菌，需進(jìn)一步對可疑菌落進(jìn)行鑒定，鑒定試驗包括鏈激酶試驗、桿菌肽敏感試驗。

1.7.6 真菌菌落總數(shù)檢測

取已滅菌的一次性平皿5個，將0.9%氯化鈉注射液樣液分別接種到平皿內(nèi)，每個平皿接種1 ml 0.9%氯化鈉注射液樣液，分別在5個平皿內(nèi)傾注沙氏瓊脂培養(yǎng)基15～20 ml，混合均勻，待培養(yǎng)基凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置于25 ℃霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，分別于第3、5、7天觀察并根據(jù)以下公式計算平板上的菌落數(shù)，如果發(fā)現(xiàn)菌落蔓延，以前一次的菌落計數(shù)為準(zhǔn)：

其中，X2為真菌菌落總數(shù)（單位cfu/g），B為5塊沙氏瓊脂培養(yǎng)基平板上的真菌菌落總數(shù)，K為稀釋度。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌菌落總數(shù)檢測

表2為細(xì)菌菌落總數(shù)檢測結(jié)果，圖3為細(xì)菌菌落總數(shù)變化曲線圖。通過表2和圖3可知，消毒方式為溫度70 ℃、時間120 min時，細(xì)菌菌落總數(shù)最少。

圖3 細(xì)菌菌落總數(shù)變化曲線圖

表2 細(xì)菌菌落總數(shù)檢測結(jié)果

2.2 大腸菌群檢測

乳糖膽鹽發(fā)酵管經(jīng)過24 h 培養(yǎng)，未產(chǎn)酸產(chǎn)氣，可確定樣品內(nèi)未檢出大腸菌群。

2.3 綠膿桿菌檢測

樣品經(jīng)過24 h 培養(yǎng)后，未見黃綠色或藍(lán)綠色菌膜生成，可確定樣品內(nèi)未檢出綠膿桿菌。

2.4 金黃色葡萄球菌檢測

樣品經(jīng)過24 h 培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)SCDLP 培養(yǎng)液明顯渾濁，需對培養(yǎng)液進(jìn)一步鑒定。

革蘭染色：用接種環(huán)將菌液劃線接種在血瓊脂培養(yǎng)基上，35 ℃培養(yǎng)24 h 后，觀察菌落形態(tài)為白色，不透明，突起，表面光滑，鏡檢結(jié)果為革蘭陰性菌。

通過鏡檢結(jié)果可確定樣品內(nèi)未檢出金黃色葡萄球菌。

2.5 溶血性鏈球菌檢測

樣品經(jīng)過培養(yǎng)后，葡萄糖肉湯培養(yǎng)基變渾濁，需對培養(yǎng)液進(jìn)一步鑒定。

革蘭染色：用接種環(huán)將菌液劃線接種在血瓊脂培養(yǎng)基上，35 ℃培養(yǎng)24 h 后，觀察菌落形態(tài)為白色，不透明，突起，表面光滑，鏡檢結(jié)果為革蘭陰性菌。

通過鏡檢結(jié)果可確定樣品內(nèi)未檢出溶血性鏈球菌。

2.6 真菌菌落總數(shù)檢測

表3為真菌菌落總數(shù)檢測結(jié)果，圖4為真菌菌落總數(shù)變化曲線圖。通過表3和圖4可知，消毒方式為溫度70 ℃、時間120 min時，真菌菌落總數(shù)最少。

表3 真菌菌落總數(shù)檢測結(jié)果

3 小結(jié)

義齒模具作為義齒制作的一個重要環(huán)節(jié)，嚴(yán)格把控其微生物情況非常重要。本研究通過3組試驗數(shù)據(jù)對比，結(jié)果表明，在70 ℃下，延長消毒時間，細(xì)菌菌落總數(shù)和真菌菌落總數(shù)明顯下降，控制菌均未檢出。

圖4 真菌菌落總數(shù)變化曲線圖

綜上所述，以75%醫(yī)用酒精對義齒模具外表面進(jìn)行30 s 擦拭消毒，然后放入消毒柜中，在70 ℃下消毒120 min，可使義齒模具符合GB 15979-2002標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的微生物指標(biāo)要求。

本研究采用的方法，成本可控、易于操作、可行性強，而且效果穩(wěn)定，為義齒模具及其他相同材質(zhì)的不同產(chǎn)品的消毒方式的驗證選擇均提供了參考。