沉默IL-37表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的影響及其作用機(jī)制研究

陳海堡?宋毅昌?彭磊?曾統(tǒng)?張迪?靳松

【摘要】目的 探討IL-37對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響及其作用機(jī)制。方法 定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-qPCR）檢測(cè)人正常成骨細(xì)胞（hFOB1.19）和骨肉瘤細(xì)胞（U2OS、MG63、Saos-2）中IL-37 mRNA的表達(dá)情況;設(shè)計(jì)沉默IL-37的小干擾RNA（siRNA）序列轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞系，將轉(zhuǎn)染干擾序列siIL-37沉默IL-37表達(dá)的細(xì)胞作為siIL-37組，轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照序列作為陰性對(duì)照組（siNC組），檢測(cè)沉默IL-37后骨肉瘤細(xì)胞IL-37 mRNA的表達(dá)。采用CCK-8法、Transwell法檢測(cè)沉默IL-37表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)沉默IL-37表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞凋亡的影響;蛋白免疫印跡法檢測(cè)沉默IL-37表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞中B淋巴細(xì)胞瘤（BCL） 關(guān)聯(lián)X蛋白（BAX）/

BCL-2和Wnt/β-catenin信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果 IL-37 mRNA在U2OS、MG63和Saos-2細(xì)胞中均高于其在hFOB1.19細(xì)胞中的表達(dá)（P均< 0.05）。siIL-37組中的IL-37 mRNA相對(duì)表達(dá)量均低于siNC組（P均< 0.05）。與siNC組比較，siIL-37組的細(xì)胞增殖比例下降，細(xì)胞凋亡率升高，遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)量增多，BAX表達(dá)上調(diào)而BCL-2表達(dá)下調(diào)，Wnt/β-catenin信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白c-Myc、β-catenin、轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子1、細(xì)胞周期蛋白D1和基質(zhì)金屬蛋白酶-7表達(dá)均下調(diào)（P均< 0.05）。結(jié)論 IL-37在骨肉瘤細(xì)胞中表達(dá)升高，沉默IL-37表達(dá)可促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞凋亡，并抑制其增殖、遷移和侵襲。IL-37可能通過BAX/BCL-2和Wnt/β-catenin信號(hào)通路調(diào)控骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】骨肉瘤;白介素-37;B淋巴細(xì)胞瘤關(guān)聯(lián)X蛋白/B淋巴細(xì)胞瘤-2;Wnt/β-catenin信號(hào)通路

Effect and mechanism of IL-37 silencing on osteosarcoma cells Chen Haibao， Song Yichang， Peng Lei， Zeng Tong， Zhang Di， Jin Song. Department of Spinal Surgery， the Eighth Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University， Shenzhen 518033， China

Corresponding author， Jin Song， E-mail： jingso@163.com

【Abstract】Objective To investigate the effect of IL-37 on the proliferation， apoptosis， migration and invasion of osteosarcoma cells and its mechanism. Methods The expression of IL-37 in human normal osteoblasts （hFOB1.19） and osteosarcoma cell lines （U2OS， MG63， Saos-2） was detected by quantitative reverse transcription polymerase chain reaction （RT-qPCR）. The siRNA sequence silencing IL-37 was designed and transfected into the osteosarcoma cell lines. Cells transfected with siRNA sequence silencing IL-37 were assigned into the siIL-37 group， and those transfected with negative controls were allocated into the siNC group. The expression of IL-37 mRNA in osteosarcoma cells after IL-37 silencing was detected. The effect of IL-37 silencing on the proliferation， invasion and migration of osteosarcoma cells was evaluated by CCK-8 and Transwell chamber test. The effect of IL-37 silencing on the apoptosis of osteosarcoma cell lines was detected by flow cytometry. The expression levels of key proteins in the BAX/BCL-2 and Wnt/β-catenin signaling pathway of osteosarcoma cell lines before and after silencing IL-37 were determined western blot. Results The expression levels of IL-37 mRNA in osteosarcoma cell lines U2OS， MG63 and Saos-2 were significantly higher than that in normal osteoblast cell line （all P < 0.05）. For osteosarcoma cell lines U2OS， MG63 and Saos-2， the relative expression levels of IL-37 mRNA in the siIL-37 group were significantly lower than those in the siNC group （all P < 0.05）. Compared with the siNC group， cell proliferation rate was declined， cell apoptosis rate was increased， the quantity of cell migration and invasion was elevated， BAX expression was up-regulated， BCL-2 expression was down-regulated， and the expression levels of c-Myc， β-catenin， TEF1， Cyclin D1 and MMP-7 in the Wnt/β-catenin signal pathway were down-regulated in the siIL-37 group （all P < 0.05）. Conclusions The expression level of IL-37 is up-regulated in osteosarcoma cell lines. Silencing IL-37 can promote the apoptosis of osteosarcoma cells and inhibit the proliferation， migration and invasion. IL-37 plays an important carcinogenic role in the occurrence and development of osteosarcoma possibly through the BAX/BCL-2 and Wnt/ β-catenin signaling pathways.7F944AAC-4598-448F-B03E-000D20C17999

【Key words】Osteosarcoma; IL-37; BAX/BCL-2; Wnt/β-catenin signaling pathway

骨肉瘤是世界上最常見的兒童骨惡性腫瘤，也是兒童惡性腫瘤死亡的第八大原因。隨著治療理念及技術(shù)的改進(jìn)，骨肉瘤患者的5年總體生存率明顯提高，但治愈率未有提高，而且出現(xiàn)轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)患者的預(yù)后較差[1]。分子靶向治療是骨肉瘤的治療新策略，識(shí)別新的靶點(diǎn)和驅(qū)動(dòng)骨肉瘤發(fā)病的潛在分子機(jī)制至關(guān)重要。IL-37是近年被發(fā)現(xiàn)的IL-1家族成員，具有天然的炎癥和免疫抑制作用，與調(diào)控腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移相關(guān)[2]。然而IL-37在骨肉瘤中的生物學(xué)功能尚未被闡明。B淋巴細(xì)胞瘤（BCL）家族蛋白是細(xì)胞凋亡的重要調(diào)控因子，其通過調(diào)節(jié)線粒體通透性來調(diào)節(jié)凋亡激活物如細(xì)胞色素C的釋放來影響細(xì)胞的狀態(tài)，BCL-2家族包括促凋亡蛋白BCL關(guān)聯(lián)X蛋白（BAX）和抗凋亡蛋白BCL-2[3]。Wnt/β-catenin通路是骨肉瘤中常見的信號(hào)通路，在調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮重要作用[4]。在正常的體細(xì)胞中，β-catenin僅作為一種細(xì)胞骨架蛋白在胞膜處與鈣黏蛋白形成復(fù)合體，在維持同型細(xì)胞的黏附、防止細(xì)胞的移動(dòng)中發(fā)揮作用。當(dāng)細(xì)胞外Wnt信號(hào)分子與細(xì)胞膜上特異性受體Frizzled蛋白結(jié)合后，激活胞內(nèi)蛋白Dvl。Dvl通過抑制糖原合成酶激酶3β（GSK3β）等蛋白形成的β-catenin降解復(fù)合物的降解活性，穩(wěn)定細(xì)胞質(zhì)中游離狀態(tài)的β-catenin蛋白。胞漿中穩(wěn)定積累的β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核后結(jié)合淋巴增強(qiáng)因子/ T細(xì)胞因子（LEF/TCF）轉(zhuǎn)錄因子家族，啟動(dòng)下游靶基因如轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子1（TEF1）、c-Myc、細(xì)胞周期蛋白D1（Cyclin D1）和基質(zhì)金屬蛋白酶-7（MMP-7）等的轉(zhuǎn)錄。為此，本研究中通過定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-qPCR）檢測(cè)IL-37在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)，并且進(jìn)一步探討IL-37對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響及與Wnt/β-catenin信號(hào)通路關(guān)系，為骨肉瘤的靶向治療提供新的證據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

材料與方法

一、主要材料

本實(shí)驗(yàn)所用的人類正常成骨細(xì)胞系（hFOB1.19）和骨肉瘤細(xì)胞系（U2OS、MG63、Saos-2）均購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院;10%胎牛血清（FBS）購(gòu)自美國(guó)HyClone公司;高糖型DMEM培養(yǎng)基、谷氨酰胺購(gòu)自美國(guó)Gibco公司;胰酶、0.02%乙二胺四乙酸（EDTA）、青霉素-鏈霉素混合液（雙抗）、β-甘油磷酸鈉、地塞米松、細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)試劑盒（CCK-8法）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;逆轉(zhuǎn)錄（RT）試劑盒及qPCR試劑盒、Trizol RNA抽提試劑、Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司;Transwell孔板購(gòu)自美國(guó)Corning公司;IL-37（ab93959，兔抗人）購(gòu)自美國(guó)Abcam公司;β-actin抗體（AA128，鼠抗人）、BAX抗體﹑

BCL-2抗體﹑TEF1抗體﹑c-Myc抗體、Cyclin D1抗體﹑MMP-7抗體購(gòu)自美國(guó)CST公司，辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，Matrigel基質(zhì)膠購(gòu)自美國(guó)BD公司。

二、方 法

1. 細(xì)胞培養(yǎng)與小干擾RNA（siRNA）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

hFOB1.19細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基，骨肉瘤細(xì)胞系（U2OS、MG63和Saos-2）使用含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基，在37 ℃、5% CO2、95%濕度下培養(yǎng)，24 h后更換新鮮的培養(yǎng)基，在顯微鏡下觀察細(xì)胞的密度分布及其生長(zhǎng)狀態(tài)，以后每3 d換液1次。將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的骨肉瘤細(xì)胞按照上述步驟消化后接種在需要進(jìn)行相應(yīng)實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)孔板上，待細(xì)胞生長(zhǎng)匯合度為80%，棄除培養(yǎng)基加入適量的無血清培養(yǎng)基。干擾序列siIL-37（5′-ACAAAACUCCCCUUUAGAG AC-3′）及轉(zhuǎn)染無意義的陰性對(duì)照序列（5′-CUCUAA

AGGGGAGUUUUGUCU-3′）由上海吉瑪基因股份有限公司設(shè)計(jì)合成。嚴(yán)格按照Lipofectamine? RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑盒說明書制備轉(zhuǎn)染混合物。將上述的siRNA轉(zhuǎn)染混合物加入相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)板孔，置于37 ℃、5% CO2、95%濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d，用RT-qPCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率并進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。其中轉(zhuǎn)染干擾序列siIL-37沉默IL-37表達(dá)的細(xì)胞作為siIL-37組，轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照序列作為陰性對(duì)照組（siNC組）。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2. RT-qPCR

根據(jù)TRIzol試劑盒使用說明書提取細(xì)胞中的總RNA。取100 ng的總RNA為模板，通過RT試劑盒合成模板DNA（cDNA），取cDNA和引物，嚴(yán)格按照TaKaRa公司SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒說明書配制PCR反應(yīng)液。RT-qPCR反應(yīng)參數(shù)為：95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃變性5 s，60 ℃退火34 s，40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，PCR擴(kuò)增儀自動(dòng)分析并得出Ct值，采用2-ΔΔCt法計(jì)算IL-37 mRNA相對(duì)表達(dá)量。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司設(shè)計(jì)合成，具體序列見表1。

3. CCK-8 法檢測(cè)細(xì)胞增殖

選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的hFOB1.19細(xì)胞常規(guī)消化后按1000個(gè)/孔的密度接種于96孔板，均勻鋪板置于37 ℃、5% CO2、95%濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。按上述的步驟轉(zhuǎn)染siRNA干擾序列，沉默IL-37的表達(dá)，設(shè)置陰性對(duì)照的siNC組。轉(zhuǎn)染培養(yǎng)72 h后棄除培養(yǎng)基，加入含有10 ?L CCK-8試劑的完全培養(yǎng)基110 ?L，置于37 ℃、5%CO2、95%濕度的培養(yǎng)箱中孵育2 h。在全自動(dòng)酶標(biāo)儀上測(cè)定每孔在450 nm處的吸光度（A）值并分析結(jié)果。細(xì)胞增殖比例=（As-Ab） / （Ac-Ab），其中As為實(shí)驗(yàn)孔A值（含培養(yǎng)基、CCK-8 溶液、分別予siIL-37或siNC轉(zhuǎn)染細(xì)胞），Ac為對(duì)照孔A值（含培養(yǎng)基、CCK-8溶液，未使用siRNA處理的細(xì)胞），Ab為空白孔A值（含培養(yǎng)基、CCK-8 溶液，不含細(xì)胞）。7F944AAC-4598-448F-B03E-000D20C17999

4. 細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)

按照Transwell染色試劑盒說明書用無血清培養(yǎng)基將其稀釋至250 ?g/mL的工作濃度，取100 ?L

稀釋的基質(zhì)膠加入Transwell上層小室，置于37 ℃的培養(yǎng)箱中孵育4 h。選擇瞬時(shí)轉(zhuǎn)染48 h后的骨肉瘤細(xì)胞，常規(guī)消化后用含1% FBS培養(yǎng)基重懸細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度至約1.25×105/mL。24孔板中每孔加入含20% FBS培養(yǎng)基作為下層小室，取200 ?L細(xì)胞懸液加入Transwell遷移和侵襲上層小室，小心地將上層小室置入24孔板中，置于

37 ℃、5% CO2、95%濕度的培養(yǎng)箱中孵育24 h。取出遷移及侵襲小室，用4%多聚甲醛穿過小室的細(xì)胞固定30 min，再用結(jié)晶紫將其染色15 min。然后用棉簽輕柔拭去小室里面未遷移穿膜的細(xì)胞。靜置干燥后在顯微鏡下通過計(jì)數(shù)穿膜細(xì)胞的數(shù)量反映細(xì)胞侵襲能力，用Image J計(jì)數(shù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

5. 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡

轉(zhuǎn)染48 h后的骨肉瘤細(xì)胞用不含EDTA的胰酶消化，上清培養(yǎng)液終止消化，1000轉(zhuǎn)/分離心

5 min，收集細(xì)胞，使用500 μL連接緩沖液重懸細(xì)胞，然后加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI染液，避光，室溫孵育15 min。孵育染色后，然后往每管加入400 ?L連接緩沖液混勻，1 h內(nèi)上機(jī)檢測(cè)。所得數(shù)據(jù)用相關(guān)配套軟件分析并繪制散點(diǎn)圖。

6. 蛋白免疫印跡法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)

采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)siIL-37組和siNC組細(xì)胞中的BAX、BCL-2以及Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、MMP-7、TEF1的表達(dá)，檢測(cè)步驟參照前期研究[5]。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0處理數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)均經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)符合正態(tài)分布，計(jì)量資料以? 表示，2組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用Dunnett-t檢驗(yàn)。P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、正常成骨細(xì)胞系和骨肉瘤細(xì)胞系細(xì)胞中IL-37 mRNA的表達(dá)情況比較

RT-qPCR結(jié)果顯示，IL-37 mRNA在3種骨肉瘤細(xì)胞系（U2OS、MG63、Saos-2細(xì)胞）中的相對(duì)表達(dá)量均高于其在正常成骨細(xì)胞系hFOB1.19細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量（F = 13.332，P < 0.01;Dunnett-t檢驗(yàn)P均< 0.05），見圖1。

二、沉默siIL-37表達(dá)對(duì)3種骨肉瘤細(xì)胞中IL-37 mRNA表達(dá)的影響

3種骨肉瘤細(xì)胞在siIL-37組中的IL-37 mRNA相對(duì)表達(dá)量均低于其在siNC組中的相對(duì)表達(dá)量

（P均< 0.05），其中IL-37 mRNA在U2OS（t = 138.276，P < 0.01）和MG63（t = 151.863，P < 0.001）細(xì)胞中的表達(dá)抑制率均> 80%，故后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇這2種細(xì)胞作進(jìn)一步的研究分析，見圖2。

三、沉默IL-37表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖的影響

CCK-8法結(jié)果顯示，U2OS細(xì)胞和MG63細(xì)胞中siIL-37組的細(xì)胞增殖比例均低于siNC組（t分別為78.521和68.672，P均< 0.001），見圖3。

四、沉默IL-37表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞凋亡的影響

流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，U2OS細(xì)胞和MG63細(xì)胞中siIL-37組的細(xì)胞凋亡率均高于siNC組（t分別為4.257和22.532，P均< 0.05），見圖4。

五、沉默IL-37表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞遷移和侵襲的影響

Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，無論是在U2OS細(xì)胞中還是在MG63細(xì)胞中siIL-37組的遷移細(xì)胞數(shù)量（t分別為33.213和24.427，P均< 0.001）和侵襲細(xì)胞數(shù)量（t分別為15.856和45.123，P均< 0.01）均多于siNC組，見圖5。

六、沉默IL-37表達(dá)對(duì)凋亡和Wnt/β-catenin信號(hào)通路各蛋白表達(dá)的影響

蛋白免疫印跡法結(jié)果顯示，與siNC組比較，無論是在U2OS細(xì)胞中還是在MG63細(xì)胞中siIL-37組BAX蛋白表達(dá)均上調(diào)（t分別為6.371和4.968，P均< 0.05），而BCL-2蛋白表達(dá)均下調(diào)（t分別為14.576和8.946，P均< 0.01），且TEF1（t分別為9.758和7.968，P均< 0.01）、c-Myc（t分別為14.652和10.572，P均< 0.01）、Cyclin D1（t分別為19.629和17.384，P均< 0.001）和MMP-7（t分別為21.728和16.368，P均< 0.001）蛋白表達(dá)均下調(diào)。進(jìn)一步檢測(cè)β-catenin蛋白顯示，siIL-37組U2OS和MG63細(xì)胞中的β-catenin蛋白相對(duì)表達(dá)量均低于siNC組（t分別為6.873和8.173，P均< 0.01），見圖6。

討論

骨肉瘤具有病死率高、治愈率低的特點(diǎn)。現(xiàn)階段，新輔助化學(xué)治療、切除腫瘤和保肢重建手術(shù)是治療骨肉瘤的主要策略。經(jīng)過有效治療，高級(jí)別骨肉瘤患者的5年生存率可達(dá)60%～70%，因此有必要尋找更精確的診斷生物標(biāo)志物及闡明骨肉瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，為骨肉瘤的治療提供潛在治療靶點(diǎn)[6]。本研究驗(yàn)證了IL-37在人骨肉瘤細(xì)胞系有高表達(dá)。沉默IL-37表達(dá)可抑制細(xì)胞增殖并同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞凋亡，證實(shí)IL-37與骨肉瘤的發(fā)生有關(guān)。本研究還顯示，沉默IL-37表達(dá)可抑制骨肉瘤細(xì)胞遷移和侵襲，這也表明IL-37可能與骨肉瘤的侵襲性生物行為有關(guān)。骨肉瘤的惡性生物學(xué)行為涉及復(fù)雜的分子機(jī)制和不同信號(hào)通路的激活。BCL-2家族蛋白是細(xì)胞凋亡的重要調(diào)控因子，包括促凋亡蛋白BAX和抗凋亡蛋白BCL-2。本研究蛋白免疫印跡結(jié)果顯示，沉默IL-37表達(dá)上調(diào)骨肉瘤細(xì)胞中BAX表達(dá)，而下調(diào)BCL-2的表達(dá)，研究結(jié)果表明IL-37可能通過BAX/BCL-2調(diào)控骨肉瘤增殖凋亡的惡性生物學(xué)行為。前期研究表明，Wnt/β-catenin信號(hào)通路在人類骨肉瘤的發(fā)病和發(fā)展中起著關(guān)鍵作用，該途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞中β-catenin表達(dá)水平，促進(jìn)腫瘤血管生成和逃避免疫監(jiān)測(cè)，對(duì)骨肉瘤侵襲性進(jìn)展起關(guān)鍵作用[7]。Wnt/β-catenin通路中的下游靶標(biāo)TEF1、c-Myc、Cyclin D1和MMP-7在調(diào)控腫瘤增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[8-10]。本研究7F944AAC-4598-448F-B03E-000D20C17999

中，沉默IL-37表達(dá)后Wnt/β-catenin通路的關(guān)鍵蛋白β-catenin及其下游靶標(biāo)（TEF1、c-Myc、Cyclin D1和MMP-7）均相應(yīng)下調(diào)。c-Myc是人類常見的活化原癌基因之一，參與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[11]。作為轉(zhuǎn)錄因子，早期研究發(fā)現(xiàn)c-Myc轉(zhuǎn)錄靶標(biāo)參與了許多生物過程，如代謝、細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)和細(xì)胞凋亡。Cyclin D1充當(dāng)細(xì)胞周期進(jìn)程的中央調(diào)節(jié)器，該蛋白的異常表達(dá)促使細(xì)胞的周期發(fā)生改變是腫瘤發(fā)生的重要因素[12]。MMP家族組成一系列轉(zhuǎn)錄因子，它們能夠調(diào)節(jié)腫瘤的微環(huán)境，主要是通過細(xì)胞外基質(zhì)的降解來實(shí)現(xiàn)的，外基質(zhì)的降解為細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造了條件[13]。MMP-7的表達(dá)和激活在幾乎所有類型的惡性腫瘤中都存在，尤其與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)[14]。研究結(jié)果表明，IL-37可能通過BAX/BCL-2和Wnt/β-catenin信號(hào)通路調(diào)控骨肉瘤發(fā)生發(fā)展，因此有望成為骨肉瘤臨床早期診療的腫瘤標(biāo)志物和治療靶標(biāo)。

綜上所述，IL-37在骨肉瘤細(xì)胞中上調(diào)，沉默IL-37可以抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，其機(jī)制可能與BAX/BCL-2表達(dá)和調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路有關(guān)。研究結(jié)果為骨肉瘤發(fā)生機(jī)制的深入研究奠定了基礎(chǔ)，對(duì)骨肉瘤的預(yù)防及治療具有一定意義，但本研究?jī)H在體外評(píng)估了IL-37的生物學(xué)功能，下一步將用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行體內(nèi)驗(yàn)證。

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（收稿日期：2022-02-15）

（本文編輯：林燕薇）7F944AAC-4598-448F-B03E-000D20C17999