香格里拉地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟病毒抗體檢測(cè)情況分析

余麗花，和彩云

摘要：為了了解香格里拉地區(qū)豬瘟病毒抗體水平，本文對(duì)香格里拉地區(qū)5個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的不同日齡階段的豬進(jìn)行抗體水平檢測(cè)，并進(jìn)行情況分析。結(jié)果顯示，5個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)的豬瘟抗體陽(yáng)性率分別為72.72%、81.45%、66.86%、79.81%和82.29%，有4個(gè)規(guī)?；膱?chǎng)高于國(guó)家規(guī)定的水平（>70%）;且5家規(guī)模化豬場(chǎng)的豬瘟抗體檢測(cè)離散度均小于40%，說(shuō)明這5家豬場(chǎng)的整體豬瘟疫苗免疫抗體水平整齊，疫苗的免疫效果良好;哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的豬瘟抗體陽(yáng)性率分別為28.85%、89.90%、85.45%、87.78%、78.46%和97.22%;各個(gè)階段的豬只的離散度分別為45.76%、30.77%、29.23%、22.47%、30.24%和22.31%，可以看出哺乳仔豬的豬瘟抗體離散度>40%，說(shuō)明該階段豬瘟抗體水平一般，哺乳仔豬的豬瘟抗體主要是從母源抗體獲得，所以其抗體水平間接反映了母豬群的抗體水平;保育豬、育肥豬、后備豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬豬瘟抗體水平離散度均較集中，豬瘟疫苗免疫效果良好。

關(guān)鍵詞：香格里拉地區(qū);豬瘟;抗體;情況分析

豬瘟是一種可以感染家豬和野豬的傳染病，對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)具有重大影響[1]。豬瘟病毒屬于黃病毒科、瘟病毒屬，是我國(guó)一類(lèi)動(dòng)物傳染病，各個(gè)階段和各個(gè)品種的豬均易感，感染豬的潛伏期有長(zhǎng)有短，最急性型的感染豬在48h后就會(huì)出現(xiàn)典型癥狀，急性型的潛伏期一般為2～4d，慢性感染豬在臨床上5d以上才出現(xiàn)臨床癥狀，更有甚者感染后20d才出現(xiàn)癥狀，該病隱蔽性較強(qiáng)，所以在日常生產(chǎn)中養(yǎng)戶(hù)和一些衛(wèi)生防疫部門(mén)很難及時(shí)發(fā)現(xiàn)，對(duì)豬瘟疫情造成忽視，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2，3]。疫苗免疫目前是預(yù)防豬瘟病毒感染的重要措施[4]。評(píng)價(jià)疫苗免疫效果，最重要的手段就是抗體檢測(cè)，對(duì)當(dāng)?shù)氐呢i場(chǎng)進(jìn)行豬瘟血清學(xué)檢測(cè)，可以了解當(dāng)?shù)刎i群豬瘟的免疫水平[5]。所以本文采用血清學(xué)方法對(duì)香格里拉地區(qū)的5個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)進(jìn)行豬瘟抗體檢測(cè)，以期為該地區(qū)的豬瘟疫苗免疫情況提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品

待檢血液樣品采集于香格里拉地區(qū)的5個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)，總共624份;按階段分為哺乳仔豬104份、保育豬99份、育肥豬110份、后備豬135份、經(jīng)產(chǎn)母豬104份、種公豬72份。

1.2 試劑和儀器設(shè)備

豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)于北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司;酶標(biāo)儀Infinite F50（美國(guó)帝肯），自動(dòng)洗板機(jī)（美國(guó)帝肯HydroFlex）。

1.3 試驗(yàn)方法

1）樣品采集方法。血液樣品按照5mL/頭進(jìn)行采集，采集部位選擇待檢豬的前腔靜脈，通過(guò)采血管采集的血液在室溫下靜置30min后，吸出血清，放于1.5mL無(wú)菌的EP管中，同時(shí)在管上做號(hào)分組標(biāo)記，最后用冷凍離心機(jī)3，000r/min進(jìn)行離心10min，使血清中的紅細(xì)胞充分分離，分離到的血清放于-20℃保存待用。

2）抗體檢測(cè)。購(gòu)買(mǎi)的抗體檢測(cè)試劑盒，根據(jù)其說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。首先按要求對(duì)抗原包被板進(jìn)行回溫處理，回溫處理之后的包被板不做任何處理，在稀釋板條上1：1稀釋好的樣品血清、陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照各取100μL加入包被板中，用微型振蕩器混勻后置于恒溫恒濕培養(yǎng)箱中孵育2h，孵育完后棄去板上的液體，然后用洗板機(jī)洗滌3次，后加入抗豬瘟病毒的辣根過(guò)氧化物標(biāo)記物，在恒溫箱中進(jìn)行30min標(biāo)記孵育，孵育完后再次洗滌3次，然后加入TMB底物避光顯色10min，最后加入終止液，利用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)450nm測(cè)定各反應(yīng)孔中的OD值。

3）結(jié)果判定。結(jié)果判定根據(jù)公式：樣品阻斷率（%）=100%*[陰性對(duì)照A（450）-樣品A（450）]/陰性對(duì)照A（450）。試驗(yàn)成立的條件為陰性對(duì)照的OD450值>0.500，陽(yáng)性對(duì)照的阻斷率≥50%。待檢樣品的阻斷率小于30%，該樣品豬瘟抗體為陰性，體內(nèi)無(wú)豬瘟抗體;若待檢樣品阻斷率≥40%，該樣品豬瘟抗體為陽(yáng)性，表示有豬瘟抗體;若待檢樣品的阻斷率在30%～40%，則為可疑，對(duì)其需要重新進(jìn)行檢測(cè)。

變異系數(shù)（CV）=（標(biāo)準(zhǔn)差/平均數(shù)）*100%。CV≤40%表示抗體水平整齊，豬瘟疫苗免疫效果良好;40%60%則表示抗體水平不集中，間接反映了疫苗免疫效果不好。

2 結(jié)果

2.1 不同規(guī)?；i場(chǎng)的整體抗體水平

由表1可以看出，5個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)的豬瘟抗體陽(yáng)性率分別為72.72%、81.45%、66.86%、79.81%和82.29%，有4個(gè)規(guī)模化的場(chǎng)高于國(guó)家規(guī)定的水平（>70%）;且5家規(guī)?；i場(chǎng)的豬瘟抗體檢測(cè)離散度均小于40%，說(shuō)明這5家豬場(chǎng)的整體豬瘟疫苗免疫抗體水平整齊，疫苗的免疫效果良好;但是這5個(gè)場(chǎng)的整體陽(yáng)性率為76.86%，陽(yáng)性率不是很高。

2.2 不同階段豬群的豬瘟抗體水平

由表2可以看出哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、后備豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬的豬瘟抗體陽(yáng)性率分別為28.85%、89.90%、85.45%、87.78%、78.46%和97.22%;各個(gè)階段的豬只的離散度分別為45.76%、30.77%、29.23%、22.47%、30.24%和22.31%，可以看出哺乳仔豬的豬瘟抗體離散度>40%，說(shuō)明該階段豬瘟抗體水平一般，哺乳仔豬的豬瘟抗體主要是從母源抗體獲得，所以其抗體水平間接反映了母豬群的抗體水平;保育豬、育肥豬、后備豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬豬瘟抗體水平離散度均較集中，豬瘟疫苗免疫效果良好。

3 討論

豬瘟病毒血清抗體的檢測(cè)對(duì)于臨床上診斷和免疫效果的評(píng)估、適宜免疫時(shí)機(jī)的選擇都有很重要的指導(dǎo)意義。目前豬瘟病毒的抗體檢測(cè)方法主要有正向間接血凝試驗(yàn)、間接ELISA、阻斷ELISA、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、膠體金免疫層析試紙條等[6-8]。本文采用阻斷ELISA方法對(duì)香格里拉地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟病毒抗體檢測(cè)情況分析，發(fā)現(xiàn)5家規(guī)?；呢i場(chǎng)有一家豬瘟抗體陽(yáng)性率低于國(guó)家的標(biāo)準(zhǔn)（<70%），造成該場(chǎng)豬瘟抗體水平較低的原因可以從多方面考慮，如豬場(chǎng)管理員免疫方法不當(dāng)、飼養(yǎng)環(huán)境條件差等，所以豬場(chǎng)應(yīng)結(jié)合自身的實(shí)際生產(chǎn)情況進(jìn)行豬瘟疫苗免疫程序的調(diào)整[9]。有研究報(bào)道抗體水平低于40%，不僅代表豬場(chǎng)的整體疫苗的免疫效果較好，同時(shí)還表示該豬場(chǎng)散發(fā)豬瘟的危險(xiǎn)度小[10];從香格里拉這5個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的整體抗體離散度均低于40%，說(shuō)明這5個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)的整體豬瘟疫苗免疫效果良好。

從不同階段的豬瘟抗體檢測(cè)情況來(lái)看，哺乳仔豬的抗體陽(yáng)性率為28.85%，說(shuō)明了哺乳仔豬的整體抗體水平偏低，對(duì)于哺乳仔豬的抗體是從母豬的母源抗體中獲得，抗體水平偏低可能是不同仔豬受母源抗體影響程度不同所致，同時(shí)受母源抗體水平均勻度和整齊度及受母體和個(gè)體影響[11];經(jīng)產(chǎn)母豬的豬瘟抗體陽(yáng)性率為78.46%，說(shuō)明香格里拉地區(qū)的這5個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)的整體母豬群的豬瘟疫苗免疫情況還是比較不理想，需要調(diào)整為更合適自身本場(chǎng)的免疫程序[12]。保育豬、育肥豬、后備豬、種公豬的豬瘟抗體陽(yáng)性率分別為89.90%、85.45%、87.78%和97.22%，表明這些階段的豬瘟疫苗免疫效果較好。

綜上所述，目前規(guī)?；i場(chǎng)對(duì)于豬瘟的防控主要還是要靠疫苗免疫，對(duì)疫苗整體的免疫水平進(jìn)行監(jiān)測(cè)是規(guī)?；i場(chǎng)完善自身免疫程序的一種重要手段;規(guī)?；i場(chǎng)可以根據(jù)本場(chǎng)豬瘟抗體水平的波動(dòng)來(lái)合理的安排和調(diào)整疫苗，從而提高疫苗的免疫效果，避免造成疫苗及人力的浪費(fèi)，所以是一種可以廣泛應(yīng)用于養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)的監(jiān)測(cè)方法[13]。

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