蒙藥協(xié)日嘎四味湯對(duì)糖尿病大鼠腎保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究

摘要：為探究蒙藥協(xié)日嘎四味湯對(duì)糖尿病大鼠腎保護(hù)作用。選取雄性健康Wister大鼠48只，隨機(jī)分為6組，即正常組、DM模型組、協(xié)日嘎四味湯低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對(duì)照組。除正常組外其余各組均注射鏈脲佐菌素糖尿病模型。協(xié)日嘎四味湯低劑量組以0.34g/kg/d、中劑量組以0.68 g/kg/d和高劑量組以1.35g/kg/d灌胃給藥，正常組和模型組給予等量20g/kg/d蒸餾水灌胃，陽性對(duì)照組依那普利1.5mg/kg/d灌胃給藥，每周稱體重調(diào)整用藥劑量，連續(xù)用藥8周。結(jié)果發(fā)現(xiàn)協(xié)日嘎四味湯對(duì)于DM大鼠的腎臟損傷有一定的保護(hù)作用，其中高劑量蒙藥組血糖較模型組顯著降低，可降低糖尿病大鼠的血糖。

【中圖分類號(hào)】 ?R587.1【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1673-9026（2022）15--02

前言

隨著人們生活水平的提高，人均壽命延長，一些慢性疾病的患病率正逐年增長。糖尿?。―iabetes Mellitus，DM）是一種由胰島素分泌及作用缺陷引起，以血糖升高為主要特征的慢性代謝性疾病[1]。2016年4月6日首次發(fā)布的全球糖尿病報(bào)告顯示：在最近40年，全球范圍內(nèi)的糖尿病患者已達(dá)到4.22億人，較之前增加了3倍。據(jù)世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）預(yù)測(cè)，到2030年，糖尿病將成為第七項(xiàng)主要死亡原因[2]。目前，糖尿病在全球范圍內(nèi)廣泛流行，糖尿病及其并發(fā)癥已成為嚴(yán)重危害人類健康的世界性公共衛(wèi)生問題，引起了世界各國的高度重視。

氧化應(yīng)激在糖尿病發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著非常重要作用，幾乎所有糖尿病并發(fā)癥相關(guān)通路的激活均與機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)[3]。機(jī)體內(nèi)抗氧化與促氧化物質(zhì)相互作用而處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。機(jī)體各種病理因素導(dǎo)致抗氧化物質(zhì)數(shù)量減少，或者促氧化物質(zhì)數(shù)量增多，以及抗氧化應(yīng)激反應(yīng)不充分等，使得機(jī)體內(nèi)活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）含量增加。ROS能夠氧化蛋白、脂類、細(xì)胞膜等生命基本物質(zhì)，使其結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生變化，導(dǎo)致糖尿病、腫瘤等疾病發(fā)生[4]。因此，清除體內(nèi)過剩自由基、抑制體內(nèi)氧化應(yīng)激，已成為預(yù)防和治療糖尿病有效途徑之一。蒙藥在防治糖尿病等方面有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，從天然藥物中探尋抗氧劑成為目前研究熱點(diǎn)[5]。

蒙藥協(xié)日嘎四味湯是由姜黃、蒺藜、梔子、黃柏這四味中藥材組成的中藥方劑。蒙藥協(xié)日嘎四味湯在蒙醫(yī)臨床治療中常用于降血糖、利尿等的蒙藥煮散制劑[6]。蒙藥協(xié)日嘎四味湯又被稱為勇瓦四湯、沙日嘎四湯、姜黃四味湯等，其最早記載于蒙醫(yī)古籍《觀者之喜》[7]。本文通過鏈脲佐菌素誘導(dǎo)建立糖尿病大鼠模型，并探究蒙藥協(xié)日嘎四味湯對(duì)糖尿病大鼠的保護(hù)作用，為蒙藥防治糖尿病提供理論依據(jù)。

1、實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

清潔級(jí)健康Wister大鼠，雄性，體重200±10g，由遼寧長生生物中心提供，編碼SCXX（遼）2015-0001。

1.2 主要試劑與藥物

蒙藥協(xié)日嘎四味湯：由內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院蒙藥制劑室提供（編碼：20180704）。每次3～5 g，臨用時(shí)水煎煮提取后，并用蒸餾水調(diào)配至試驗(yàn)所需濃度。依那普利（上海鑫雅藥物有限公司，編碼H20083534）;鏈脲佐菌素（上海原葉生物有限公司）;水合氯醛（浙江福田藥物有限公司）;其他試劑均為分析純。

1.3 主要儀器

微量移液器（德國Eppendorf AG）;血糖儀（羅氏公司）;酶標(biāo)儀（美國Bio-Rad公司）;全自動(dòng)生化分析儀（日本日立有限公司）。

2、實(shí)驗(yàn)方法

2.1 模型制備及給藥分組

選取體重200±10g清潔級(jí)雄性健康Wister大鼠48只，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，隨機(jī)分為6組，即正常組、DM模型組、協(xié)日嘎-4味湯低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對(duì)照組（依那普利組）。除正常組外其余各組在空腹12h狀態(tài)下腹腔注射鏈脲佐菌素50mg/kg建立DM模型，測(cè)定模型組大鼠空腹血糖，血糖值在≥16.7 mmol/L范圍者視為造模成功[8]。

協(xié)日嘎四味湯低劑量組以0.34g/kg/d、中劑量組以0.68 g/kg/d和高劑量組以1.35g/kg/d灌胃給藥，正常組和模型組給予等量20g/kg/d蒸餾水灌胃，陽性對(duì)照組依那普利1.5mg/kg/d灌胃給藥，每周稱體重調(diào)整用藥劑量，連續(xù)用藥8周。在實(shí)驗(yàn)過程中，平均第2、4、6、8周每周測(cè)一次空腹血糖和尿糖，若出現(xiàn)低血糖現(xiàn)象，適當(dāng)增加飲食次數(shù)，避免對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成不良影響。

2.2 取材

大鼠于末次給藥后，單籠收集大鼠24 h尿液，離心，4 ℃保存，用于尿蛋白（ALB）檢測(cè);將大鼠禁食不禁水12 h，臨處死前稱重、測(cè)血糖，10 %水合氯醛腹腔注射麻醉后，腹主動(dòng)脈采血，2000 rpm，低溫離心10 min，取血清，-20 ℃保存，用于Scr、BUN含量測(cè)定。

2.3腎組織病理變化

取大鼠腎組織，4%多聚甲醛溶液固定腎臟組織，經(jīng)乙醇脫水，石蠟包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察腎臟形態(tài)學(xué)改變。

2.4 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3、結(jié)果

3.1各組大鼠一般情況比較

研究過程中，正常對(duì)照組大鼠精神狀況良好，毛發(fā)有光澤，動(dòng)作自如、反應(yīng)靈敏;模型組大鼠精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，活動(dòng)倦怠，毛發(fā)雜亂泛黃無光澤偶有脫毛，尿量明顯增多，大便稀;協(xié)日嘎-四味湯高劑量組大鼠反應(yīng)較靈敏，毛色可，尿多、大便尚可;陽性對(duì)照組與協(xié)日嘎-四味湯低、中劑量組大鼠反應(yīng)較為遲鈍，毛發(fā)尚可，尿量多，大便稀釋。874A93C3-A243-42D9-AB06-06265A1C55B2

3.2各組大鼠血糖、體重的比較

如表1所示，模型組大鼠的血糖在造模成功后一直處于高血糖狀態(tài)，且逐漸上升，與正常組比較差異顯著（P <0.01）;協(xié)日嘎-四味湯低、中、高劑量組中，在藥物干預(yù)后與模型組比較，血糖均有顯著性差異（P <0.05）;協(xié)日嘎-四味湯低、中劑量組間無明顯變化;協(xié)日嘎-四味湯高劑量組與模型組比較，血糖有顯著性差異（P <0.01）;陽性對(duì)照組與模型組比較無顯著性差異。正常組大鼠的體重持續(xù)增長;其他各組大鼠的體重均有所增長，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型組大鼠體重與正常組比較已有顯著性差異（P <0.01），其中協(xié)日嘎-四味湯低、中、高劑量組與模型組比較均有顯著性差異（P<0.05）。

3.3各組大鼠生化指標(biāo)的比較

如表2所示，與正常組大鼠比較，模型組的BUN、SCr 、ALB均明顯升高（P<0.01）;經(jīng)藥物干預(yù)后，協(xié)日嘎-四味湯高劑量組大鼠BUN、SCr、ALB含量較模型組均明顯減少（P <0.05），陽性對(duì)照組和協(xié)日嘎-四味湯低劑量組中BUN、SCr的含量與模型組比較無顯著性差異;陽性對(duì)照組和協(xié)日嘎-四味湯低、中劑量組中ALB的含量與模型組比較無顯著性差異;協(xié)日嘎-四味湯中、高劑量組中BUN、SCr的含量相比于模型組均明顯減少（P <0.05），且陽性藥物對(duì)BUN、SCr、ALB未表現(xiàn)出明顯作用。

3.4各組大鼠腎臟病理切片的比較

如圖1所示，正常組大鼠腎組織形態(tài)正常，腎小球形態(tài)規(guī)則，腎小管排列緊密整齊。與正常組相比，模型組腎小球未見明顯病變，腎小管可見上皮細(xì)胞較多空化空泡變性壞死，腎小管管腔可見蛋白管型和細(xì)胞管型。陽性對(duì)照組部分腎小管可見上皮細(xì)胞空化空泡變性壞死。蒙藥高劑量組偶見腎小管可見上皮細(xì)胞空化空泡變性。蒙藥低劑量組部分腎小管可見上皮細(xì)胞空化空泡變性壞死，較陽性藥物組差。蒙藥中劑量組較多腎小管可見上皮細(xì)胞空化空泡變性，較低劑量組差。可得出結(jié)論，蒙藥協(xié)日嘎-四味湯干預(yù)DM大鼠腎臟病理損傷較模型組得到了明顯改善，尤其高劑量協(xié)日嘎-四味湯對(duì)于DM大鼠腎臟病理損傷有明顯改善作用。

4.討論

4.1 正常大鼠喂養(yǎng)普通飼料，注射一定劑量STZ可造成胰島β細(xì)胞某些功能的損傷，胰島素分泌量降低，從而建立II型糖尿病模型。

4.2諸多研究已證實(shí)蒙藥協(xié)日嘎四味湯單味藥都具有良好的降血糖及降血脂、抗炎、抗氧化等作用，在治療糖尿病及并發(fā)癥方面均有良好的運(yùn)用前景[9]。且蒙藥協(xié)日嘎四味湯的處方成分價(jià)格低廉、不良反應(yīng)少，具有給藥方便等優(yōu)勢(shì)，蒙藥協(xié)日嘎四味湯具有很大的開發(fā)利用價(jià)值和潛力。本研究發(fā)現(xiàn)協(xié)日嘎四味湯對(duì)糖尿病大鼠腎臟病理損傷有明顯改善作用，但其降糖機(jī)制及有效成分仍未研究透徹，藥物之間的配伍應(yīng)用也有待探索。

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【作者簡介】

姓名：房私日吉 出生年月—：1993.06.02 性別：女 民族：蒙古族 籍貫：內(nèi)蒙古自治區(qū)通遼市 職務(wù)/職稱：住院醫(yī)師 學(xué)歷：碩士研究生 ?研究方向：內(nèi)科874A93C3-A243-42D9-AB06-06265A1C55B2