瓦氏雅羅魚胚后發(fā)育與早期生長(zhǎng)

楊培民，金廣海，劉義新，王 雷，解 涵，胡宗云

( 遼寧省淡水水產(chǎn)科學(xué)研究院，遼寧省水生動(dòng)物病害防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 遼陽(yáng) 111000 )

瓦氏雅羅魚(Leuciscuswaleckii)俗稱華子魚、滑魚、沙包，屬鯉科、雅羅魚亞科、雅羅魚屬[1]，廣泛分布于我國(guó)三北地區(qū)天然水域，在東北地區(qū)屬“三花五羅”中的“五羅”之一，也是遼寧省重要的土著經(jīng)濟(jì)魚類[2]，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。瓦氏雅羅魚肌肉營(yíng)養(yǎng)成分均衡，味道鮮美[3-4]；此外，該魚具有優(yōu)良的耐鹽堿、耐寒特性[4]，在提升鹽堿水域開發(fā)利用效率上極具推廣價(jià)值。目前，有關(guān)瓦氏雅羅魚的研究主要集中在池塘養(yǎng)殖[5-6]、漁業(yè)生物學(xué)[7-8]、耐鹽堿機(jī)制研究[9-11]、群體遺傳學(xué)[12-13]等方面，有關(guān)瓦氏雅羅魚早期生活史的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。筆者對(duì)瓦氏雅羅魚的胚后發(fā)育和早期生長(zhǎng)進(jìn)行研究，以期為豐富瓦氏雅羅魚仔、稚魚生物學(xué)特性提供參考。

1 材料與方法

1.1 瓦氏雅羅魚仔、稚魚獲取和飼養(yǎng)

本試驗(yàn)在遼寧省淡水水產(chǎn)科學(xué)研究院試驗(yàn)基地進(jìn)行，親魚源自鴨綠江水系，全長(zhǎng)(28.00±1.41) cm，體質(zhì)量(275.74±44.72) g。2019年3月26日按如下劑量注射催產(chǎn)激素：每千克雌魚注射促黃體素釋放激素類似物2號(hào)15 μg、絨毛膜促性腺激素2000 IU及馬來(lái)酸地歐酮15 mg，雄魚劑量減半。在水溫10.4～13.8 ℃、溶解氧3.9～10.4 mg/L的環(huán)境下，注射激素48～52 h后采用干法受精獲得受精卵，脫黏處理后置于40目篩絹錐體孵化桶內(nèi)孵化。受精卵經(jīng)13 d孵出仔魚，隨機(jī)挑選1000尾仔魚，置于架設(shè)在池塘(面積0.8 hm2，平均水深2.0 m)內(nèi)的一個(gè)2.0 m×1.0 m×1.5 m的40目篩絹網(wǎng)箱內(nèi)培育，放養(yǎng)密度為450尾/m3。培育期間采用水質(zhì)在線監(jiān)測(cè)系統(tǒng)(魚兒樂(lè)X5，南京祿輝物聯(lián)科技有限公司)記錄池塘水溫和溶解氧含量的變化(圖1)。試驗(yàn)全程采用山東升索漁用飼料研發(fā)中心生產(chǎn)的微粒子配合飼料：前期(6～35日齡)采用S1型微顆粒飼料(粒徑150～300 μm，粗蛋白含量>50%)；后期(36～67日齡)投喂S2型微顆粒飼料(粒徑300～600 μm，粗蛋白含量>50%)。每日于8：00、11：00、14：00和17：00各投喂1次，前期按3～5 g/(千尾·次)投喂，后期按5～8 g/(千尾·次)投喂。為保持網(wǎng)箱的透水性，每隔20 d更換網(wǎng)箱1次。

圖1 試驗(yàn)期間水溫和溶解氧質(zhì)量濃度的日變化

1.2 形態(tài)觀察和生長(zhǎng)性狀測(cè)量

參照文獻(xiàn)[14]的方法，將仔、稚魚形態(tài)發(fā)育劃分為卵黃囊期仔魚、后期仔魚和稚魚3個(gè)階段。根據(jù)仔、稚魚形態(tài)發(fā)育規(guī)律，0～10日齡時(shí)，每天取樣1次，11～30日齡，每2 d取樣1次；31日齡后，3～5 d取樣1次。每次取樣數(shù)不低于20尾，樣品置于載玻片或培養(yǎng)皿中，在體視顯微鏡(SZ66，重慶奧特)下進(jìn)行活體觀察和拍照(Canon Power shot G11，日本)。以臺(tái)微尺為參照配合圖像處理軟件ImageJ(Version 1.52a)測(cè)量全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、卵黃囊長(zhǎng)徑及短徑等參數(shù)，精確至0.01 mm。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2016軟件計(jì)算各次測(cè)量參數(shù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，全長(zhǎng)的生長(zhǎng)曲線以及卵黃囊體積變化分別采用Excel 2016 擬合、作圖，以決定系數(shù)r2最大或殘差平方和最小為擬合標(biāo)準(zhǔn)。

卵黃囊體積(V，mm3)計(jì)算公式為：

V=πRr2/6

式中，R為卵黃囊長(zhǎng)徑(mm)，r為卵黃囊短徑(mm)。

全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率(RSG，%/d)計(jì)算公式為：

RSG=(lnL2-lnL1)/(t2-t1)×100%

式中，t1、t2為日齡(d)，L1、L2分別為t1、t2時(shí)的全長(zhǎng)(mm)。

2 結(jié) 果

2.1 瓦氏雅羅魚胚后發(fā)育

瓦氏雅羅魚產(chǎn)具有黏性的沉性卵，卵呈圓形，帶有橄欖色(圖2a)，卵徑(2.53±0.09) mm，卵膜較厚，胚體不易觀察。在10.4～13.8 ℃環(huán)境下，孵化期為13 d。根據(jù)仔、稚魚形態(tài)特征變化，瓦氏雅羅魚胚后發(fā)育可細(xì)分為卵黃囊期(0～8日齡)、后期仔魚期(9～54日齡)及稚魚期(55～67日齡)。

2.1.1 卵黃囊期(初孵仔魚至卵黃囊吸收完全，0～8日齡)

0日齡：全長(zhǎng)(7.04±0.30) mm，身體呈半透明狀，后半部由透明鰭膜包裹。頭部略帶淡黃色，眼睛外凸呈黑色，耳石、鰓弓及胸鰭芽輪廓清晰，頭背部有少量黑色素沉著；腹部有一長(zhǎng)梨形卵黃囊：前部膨大呈球形，后部細(xì)長(zhǎng)呈棒狀；心臟位于卵黃囊前端，呈囊狀，平均心率為81次/分，卵黃囊前端和尾柄腹側(cè)可見(jiàn)明顯的紅色血細(xì)胞流動(dòng)；肌節(jié)41～43對(duì)，呈“V”排列(圖2b)。初孵仔魚常側(cè)臥水底，無(wú)明顯運(yùn)動(dòng)。

2日齡：全長(zhǎng)(7.60±0.42) mm，鰾原基出現(xiàn)，卵黃囊前端明顯縮小，胸鰭擴(kuò)張呈扇形；仔魚頭部、背部及卵黃囊與軀體交界處有樹枝狀黑色素分布；口裂形成，但上、下頜不能開合；鰾原基下方的消化道形成：前端開闊如喇叭狀，后端細(xì)長(zhǎng)如管狀(圖3a)；眼睛的晶體呈黑色，外周玻璃體略帶灰褐色(圖2c)。肛凹后緣紅色血流明顯，附近膀胱清晰可見(jiàn)(圖3b)。仔魚常聚集于背光處，受刺激后可做短促“竄動(dòng)”。

3日齡：全長(zhǎng)(7.77±0.42) mm，鰾充氣膨脹呈橢圓形，體表尤其是背部、卵黃囊與脊椎交界處的黑色素明顯增多，上、下頜可以開合，肛門后緣腹側(cè)紅色血流仍很明顯(圖2d)。消化道前端內(nèi)壁褶皺明顯(圖3c)，后端與肛門貫通。此時(shí)，仔魚運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)，常做上浮運(yùn)動(dòng)。

6日齡：全長(zhǎng)(8.49±0.34) mm，仔魚開口攝食，50%以上個(gè)體腸道內(nèi)充塞著食物；以鰾為界，卵黃囊被分割成前后兩部分：前部呈塊狀，后部呈三角形；頭部和背部略帶淡黃色，尾柄腹側(cè)紅色的血流變得模糊(圖2e)。此時(shí)，仔魚可以“平游”。

8日齡：全長(zhǎng)(8.90±0.27) mm，卵黃囊消失，鰾膨大呈狹長(zhǎng)形，腹側(cè)肛門前部鰭?cǎi)奕暂^寬大，背部及尾柄腹側(cè)鰭?cǎi)奘湛s明顯(圖2f)。頂面觀，仔魚頭的背部略帶黃色；眼睛外凸，外側(cè)包裹一層透明的膜，胸鰭末端可延伸至鰾的前部1/4處(圖3d)。此時(shí)，仔魚攝食旺盛，可上浮至水面吞食粉料。

圖2 瓦氏雅羅魚仔、稚魚形態(tài)發(fā)育

2.1.2 后期仔魚期(卵黃囊吸收完畢至各鰭條發(fā)育完善，鱗片出現(xiàn)，9～54日齡)

10日齡：全長(zhǎng)(9.19±0.42) mm，脊索末端開始向上彎曲，仔魚背部、尾柄腹側(cè)及脊索末端黑色素明顯增多；在反射光下，仔魚軀體呈淡黃色(圖2g)。尾鰭有放射狀彈性絲生成(圖3e)。

13日齡：全長(zhǎng)(9.62±0.40) mm，仔魚背鰭、臀鰭開始分化，脊索末端上彎至約15°角(圖2h)；尾鰭下葉有鰭條出現(xiàn)(圖3f)。

18日齡：全長(zhǎng)(11.68±1.28) mm，鰾前室形成，背部和尾柄處鰭?cǎi)尴?，背鰭條和臀鰭條出現(xiàn)：背鰭條4～5枚、臀鰭條3～4枚(圖2i)。脊索末端上彎至約45°角，尾下骨出現(xiàn)(圖3g)。

25日齡；全長(zhǎng)(14.19±1.18) mm，尾鰭中央內(nèi)凹，尾鰭條分節(jié)；腹鰭芽出現(xiàn)，腸道上方體表開始有虹彩細(xì)胞生成，腹側(cè)局部呈銀色(圖2j)。

29日齡：全長(zhǎng)(16.74±1.87) mm，腹鰭鰭條形成，腹部鰭?cǎi)廾黠@收縮；虹彩細(xì)胞擴(kuò)展至鰓蓋和整個(gè)腹部，鰾、腸道等內(nèi)部器官不可觀察；眼睛晶體外周玻璃體呈亮銀色(圖2k)。

39日齡：全長(zhǎng)(22.72±3.11) mm，各鰭發(fā)育完善，僅在肛門至腹鰭基存在小部分鰭?cǎi)?；體側(cè)的銀色區(qū)域擴(kuò)展至尾柄的脊椎位置。仔魚背部呈青色，軀體肌肉明顯增加，脊椎和肋骨不宜觀察(圖2l)。

2.1.3 稚魚期(鱗片出現(xiàn)至全身被鱗，55～67日齡)

55日齡：全長(zhǎng)(25.92±2.66) mm，鱗片出現(xiàn)在尾柄處脊椎骨附近的體表，初生鱗為近圓形，帶有1～2 個(gè)鱗紋(圖3h)，長(zhǎng)徑和短徑分別為(0.54±0.02) mm、(0.35±0.03) mm。自然光下，魚體頭背部略帶淺黃色，背部呈青色，體側(cè)大部由銀色反光物質(zhì)覆蓋(圖2m)。

圖3 瓦氏雅羅魚仔、稚魚局部特征

59日齡：全長(zhǎng)(25.98±2.74) mm，鰓蓋后緣、魚體腹部出現(xiàn)鱗片，其中腹部鱗片近圓形，帶有2～3個(gè)鱗紋(圖3i)，直徑(0.36±0.05) mm。魚體頭部黃色減淡，肉眼可觀察到體側(cè)的鱗片(圖2n)。

67日齡：全長(zhǎng)(29.84±3.21) mm，除頭部外，魚體全身被鱗；魚體背部和頭部略帶青黃色，體側(cè)和尾柄呈銀白色(圖2o)。此時(shí)，稚魚外部形態(tài)與成魚相近，即將進(jìn)入幼魚階段。

2.2 瓦氏雅羅魚卵黃囊的吸收

瓦氏雅羅魚初孵仔魚的卵黃囊體積為(1.65±0.37) mm3，6日齡開口攝食時(shí)，卵黃囊體積減小為(0.35±0.22) mm3，仔魚在內(nèi)源營(yíng)養(yǎng)期消耗卵黃囊體積的78.79%。經(jīng)回歸分析，卵黃囊體積(V)與日齡(t)的關(guān)系可以用以下方程來(lái)描述：V=0.0057t2-0.2604t+1.723(r2=0.8035，n=123)(圖4)。

圖4 瓦氏雅羅魚仔魚卵黃囊吸收過(guò)程

2.3 瓦氏雅羅魚仔、稚魚生長(zhǎng)

經(jīng)67 d培育，瓦氏雅羅魚全長(zhǎng)由(7.04±0.30) mm 增至(29.87±4.37) mm，全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率為2.16%/d，其中仔魚期特定生長(zhǎng)率為2.42%/d，高于稚魚期(1.16%/d)(表1)。不同時(shí)期全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率存在差異：卵黃囊期生長(zhǎng)率最高(2.89%/d)，后期仔魚次之(2.34%/d)，稚魚期最低。曲線擬合可知，全長(zhǎng)(L)與日齡(t)呈指數(shù)函數(shù)關(guān)系，相關(guān)方程為L(zhǎng)=7.6529e0.0231t(r2=0.9393，n=522)。

表1 瓦氏雅羅魚仔、稚魚不同階段全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率

圖5 瓦氏雅羅魚仔、稚魚全長(zhǎng)的生長(zhǎng)

3 討 論

3.1 瓦氏雅羅魚的胚后發(fā)育

3.2 瓦氏雅羅魚與其他雅羅魚亞科魚類胚后發(fā)育的比較

由幾種雅羅魚仔、稚魚形態(tài)發(fā)育比較可知(表2)，瓦氏雅羅魚卵徑略大于大頭歐雅魚(L.cephalus)[27]，與雅羅魚(L.leuciscus)[28]相近，而初孵仔魚較雅羅魚[28-29]、高體雅羅魚(L.idus)[30]要小，僅大于大頭歐雅魚[28]。初孵仔魚規(guī)格通常與卵徑大小正相關(guān)[31]，而卵徑的大小除與物種屬性有關(guān)之外，還受親魚規(guī)格[32]、營(yíng)養(yǎng)水平[33]及產(chǎn)卵批次影響[34]。因此，3種雅羅魚卵徑的大小范圍可能是交錯(cuò)重疊的，彼此間沒(méi)有絕對(duì)的大小關(guān)系。盡管如此，具有低溫繁殖習(xí)性的雅羅魚亞科魚類的卵徑較一些棲息于熱帶或亞熱帶的魚類要大，比如唐魚(Tanichthysalbonubes)[35](1.017 mm)、粘皮鯔蝦虎魚(Mugilogobiusmyxodermus)[36](0.4～0.6 mm)及印度鲇[37](Heteropneustesfossilis)(1.1～1.2 mm)。這可能是雅羅魚亞科魚類適應(yīng)低溫環(huán)境的一種繁殖策略：在較低溫度條件下，孵化期長(zhǎng)、代謝率低，對(duì)大卵有利[14]。同時(shí)，較大卵徑意味著含有更多的能量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有利于應(yīng)對(duì)繁殖季節(jié)水溫低、餌料生物匱乏的惡劣條件[38]。

表2 瓦氏雅羅魚與其他雅羅魚亞科魚類仔、稚魚形態(tài)發(fā)育比較

幾種雅羅魚亞科魚類的器官、行為發(fā)生的先后順序是一致的，但在開口攝食、卵黃囊消失、鰭和鱗片發(fā)生時(shí)間及生長(zhǎng)速度上存在較大差異。如瓦氏雅羅魚仔魚6日齡時(shí)開口攝食，開口時(shí)間較高體雅羅魚、雅羅魚和大頭歐雅魚要晚；瓦氏雅羅魚卵黃囊期仔魚全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率為2.89%，在幾種雅羅魚中處于較低水平；而后期仔魚全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率達(dá)到2.34%，僅高于雅羅魚在12 ℃培育溫度下全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率(1.55%/d～1.61%/d)。仔魚開口時(shí)間一方面受卵黃囊大小影響，一般情況下，卵黃囊體積越大，開口攝食時(shí)間越晚[39]；另一方面也受培育溫度影響，因?yàn)椴煌疁貤l件下仔魚卵黃囊吸收速度不同，從而對(duì)初次攝食時(shí)間產(chǎn)生了影響[40]。此外，溫度也會(huì)影響生長(zhǎng)速度，這是因?yàn)轸~類作為變溫動(dòng)物，一般情況下溫度會(huì)強(qiáng)烈影響代謝，進(jìn)而影響生長(zhǎng)[41]；當(dāng)培育溫度增加時(shí)，發(fā)育速度和生長(zhǎng)速率也會(huì)增加[42]。試驗(yàn)期間，卵黃囊期全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率最大，后期仔魚期次之，稚魚期最低，仔魚期生長(zhǎng)速度要快于稚魚期。這與唇[21]、四川華鳊(Sinibramataeniatus)[39]的相關(guān)研究結(jié)果一致。這可能是因?yàn)槁腰S作為內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要用于仔魚快速生長(zhǎng)；仔魚開口攝食后，對(duì)餌料有一個(gè)適應(yīng)階段，生長(zhǎng)速度有所下降；稚魚期時(shí)，攝食所獲取的能量部分用于鱗片的生成，一定程度上影響了其生長(zhǎng)速度[39]。

3.3 瓦氏雅羅魚的早期培育

瓦氏雅羅魚繁殖時(shí)池塘水溫約10 ℃，此溫度下清塘后通常約需20 d才能達(dá)到輪蟲高峰期[43]。生產(chǎn)實(shí)踐中要統(tǒng)籌考慮環(huán)境溫度、仔魚開口時(shí)間及發(fā)塘?xí)r間多個(gè)因素來(lái)安排生產(chǎn)，確保仔魚下塘后有足夠的生物餌料供給。此外，本試驗(yàn)中，全程采用粗蛋白50%以上的微粒子飼料(前期粒徑150～300 μm，后期粒徑300～600 μm)成功進(jìn)行了瓦氏雅羅魚仔、稚魚的早期培育，微粒子飼料的粒徑和粗蛋白含量與常見(jiàn)輪蟲相當(dāng)：輪蟲大小為150～360 μm，粗蛋白含量為58.2%[44]。這表明投喂的微粒子飼料在適口性和營(yíng)養(yǎng)水平上基本滿足了瓦氏雅羅魚仔、稚魚的需求，具備替代生物餌料潛力。同時(shí)，這也說(shuō)明瓦氏雅羅魚仔、稚魚易飼性較高，適合在生產(chǎn)中推廣。

4 結(jié) 論

在12.7～26.7 ℃水溫條件下，瓦氏雅羅魚胚后發(fā)育經(jīng)歷3個(gè)時(shí)期，即卵黃囊期(0～8日齡)、后期仔魚期(9～54日齡)和稚魚期(55～67日齡)。就特定生長(zhǎng)率而言，卵黃囊期最高(2.89%/d)，后期仔魚期次之(2.34%/d)，稚魚期最低(1.16%/d)。