中國(guó)“檳榔黃化病”研究40年——病原、防控措施新進(jìn)展

唐慶華　孟秀利　于少帥　林兆威　牛曉慶　宋薇薇　覃偉權(quán)

摘 ?要：自1981年海南省屯昌縣首次發(fā)現(xiàn)檳榔黃化?。▂ellow leaf disease of areca palm， YLD）以來，檳榔黃化問題日趨嚴(yán)重，現(xiàn)已成為制約中國(guó)檳榔產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的最重要的因素。同時(shí)，鑒于生產(chǎn)中除檳榔黃化病外，炭疽病、細(xì)菌性葉斑病、椰心葉甲、干旱等一些其他因素也可引起檳榔黃化，以及“檳榔黃化病”病原或病因認(rèn)識(shí)上存在混淆的問題，學(xué)界暫用“檳榔黃化現(xiàn)象”的表述。近年來，針對(duì)上述問題開展了一系列深入研究并取得突破性進(jìn)展。本文首先簡(jiǎn)要回顧了中國(guó)檳榔黃化病的發(fā)生及病原方面的研究進(jìn)展，介紹了另一種致黃關(guān)鍵新病害——由檳榔隱癥病毒1（Areca palm velarivirus 1， APV1）引起的檳榔黃葉病毒?。╝reca palm leaf yellowing virus disease， ALYVD），以及其他2種新發(fā)現(xiàn)的病毒病害——檳榔壞死環(huán)斑病毒病和檳榔壞死環(huán)斑病毒病的研究進(jìn)展。對(duì)6個(gè)示范基地的病原檢測(cè)結(jié)果表明，部分黃化植株被檳榔黃化植原體（areca palm yellow leaf phytoplasma， AYLP）或APV1單獨(dú)感染，部分植株被AYLP和APV1復(fù)合感染。本文還探討了檳榔黃化病研究中存在的病原分布不均、含量低引起的檢測(cè)困難和田間診斷易混淆等問題，并對(duì)YLD、ALYVD、葉斑類病害、根腐病害、芽腐病、椰心葉甲、干旱、寒害、除草劑藥害等9類因子引起的黃化癥狀特征進(jìn)行了總結(jié)。進(jìn)而分析了YLD和ALYVD 防控中存在的問題以及現(xiàn)階段面臨的緊迫形勢(shì)，從防控策略和具體措施解讀了《檳榔“黃化病“防控明白紙》，并指出了其有待進(jìn)一步完善之處及防控中亟待解決的問題。最后，展望了YLD和ALYVD 2種致黃關(guān)鍵病害綜合防控中亟待實(shí)施的措施。本文旨在讓廣大科研工作者和農(nóng)技人員更好地了解檳榔“黃化病”方面的最新成果。

關(guān)鍵詞：檳榔黃化病（YLD）;檳榔黃化植原體;檳榔隱癥病毒1;檳榔黃葉病毒?。ˋLYVD）;防控明白紙中圖分類號(hào)：S436.67??????文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Forty Years of Research on “Yellow Leaf Disease of Areca Palm” in China： New Progress of the Casual Agent and the Management

Abstract： Since yellow leaf disease of areca palm （YLD） was observed in Tunchang County， Hainan Province in 1981， issues regarding to areca palm leaf yellowing are increasingly serious which have become the most important factors restricting the sustainable development of the areca palm industry in China. Meanwhile， a temporary conception ‘a(chǎn)reca yellow leaf phenomenon was proposed by the academic circle based on the facts that some other factors including areca anthracnose， areca bacterial leaf spot， coconut leaf beetle， and drought stress etc. except YLD could cause areca palm leaves to turn yellow and confusions were existed in the understanding of the causal agent or cause of ‘YLD. The questions above have been researched systematically and breakthroughs have been achieved recently. In this review， firstly， the occurrence and progress on the etiological agent of YLD were briefly retrospected， achievements of another key novel areca palm yellow leaf related disease， areca palm leaf yellowing virus disease （ALYVD） caused byAreca palm velarivirus 1（APV1）， together with 2 recently reported virus diseases areca palm necrotic spindle-spot virus disease and areca palm necrotic ringspot virus disease were introduced. Detection of the pathogens of diseased leaf samples showing yellow symptom collected from 6 demonstration bases showed that a part of the samples were only infected by AYLP or APV1 while another parts were co-infected by AYLP and APV1. Questions that the difficulty in the detection caused the even distribution and low title of the pathogen AYLP and that the easy-to-cofused symptoms for the diagnosis in field in the research of YLD were probed and characteristic yellow symptoms caused by 9 types of factors including YLD and ALYVD， leaf-spot-type diseases， root-rot-type diseases， bud rot， coconut leaf beetle， drought & chilling stress， herbicide phytotoxicity etc were summarized. Problems in the control practices and the pressing situations confronted in the management currently were then analyzed， and key points from tactical and detailed methodical perspectives in the plain paper for the management of areca palm ‘leaf yellowing related diseases were elaborated and its aspects to be further improved together certain problems in the management were pointed out. At the end， foresight of the integrated control measures for the two key leaf yellowing related diseases， which were urgent to implement， were prospected. The aim of this review is to make the latest progress regarding ‘YLD known to researchers and agricultural technicians.DA667E26-CCFB-4AE7-805F-E2D72A702372

Keywords： yellow leaf disease of areca palm?（YLD）; areca palm yellow leaf phytolasma;Areca palm velarivirus 1; areca palm leaf yellowing virus disease?（ALYVD）; plain paper for disease management

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2022.05.016

檳榔（Areca catechuL.）是海南省農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中重要的“三棵樹”（橡膠、檳榔、椰子）經(jīng)濟(jì)作物之一，是種植面積僅次于天然橡膠的第二大經(jīng)濟(jì)作物^[1]。近年來，隨著消費(fèi)人群持續(xù)擴(kuò)大和價(jià)格不斷攀升，海南檳榔種植面積及產(chǎn)值逐年增加。根據(jù)海南省統(tǒng)計(jì)年鑒，2018年底全省檳榔種植面積超過10.99萬hm²，產(chǎn)值達(dá)到404.9億元;2020年產(chǎn)值達(dá)到543.0億元，是2010年產(chǎn)值（69.9億元）的7.77倍。目前，檳榔已成為230多萬農(nóng)民的主要經(jīng)濟(jì)來源之一^[2]，在全省農(nóng)業(yè)和農(nóng)村發(fā)展、廣大農(nóng)民增收致富中具有重要的地位。

1981年，海南省屯昌縣首次發(fā)現(xiàn)檳榔黃化病^[3]（yellow leaf disease of areca palm， YLD）。此前，國(guó)內(nèi)已有學(xué)者^[4]根據(jù)大田流行規(guī)律、電鏡、抗生素檢測(cè)得出中國(guó)的YLD病原為植原體的結(jié)論，后續(xù)的分子檢測(cè)^[5-6]也支持該結(jié)論。然而，調(diào)查發(fā)現(xiàn)除黃化病外，一些生物因素（如炭疽病、椰心葉甲等病蟲害）、非生物因素（生理性缺素、氣候條件、除草劑等）也可引起檳榔葉片變黃。在陵水、萬寧等重病區(qū)，已有大面積檳榔園遭受YLD以及其他黃化因子等為害，產(chǎn)量損失嚴(yán)重，重病園幾近絕產(chǎn)，造成許多農(nóng)戶喪失種植信心，致使黃化檳榔園失管情況非常突出。許多農(nóng)戶甚至一些農(nóng)技人員在檳榔黃化病病原或病因認(rèn)識(shí)上產(chǎn)生了較大混淆^[2]，把不同原因造成的檳榔黃化均稱為“檳榔黃化病”，“檳榔黃化”由此成為一個(gè)由多種病蟲及生理性因素等伴隨發(fā)生的復(fù)雜問題。因此，再用“檳榔黃化病”來描述生產(chǎn)中的檳榔黃化問題顯然不切實(shí)際。在此背景下，學(xué)界暫用“檳榔黃化現(xiàn)象”的概括性說法，旨在留待后續(xù)研究者對(duì)各種因子引起的黃化癥狀進(jìn)行澄清和區(qū)分。近10年來，YLD以及其他黃化相關(guān)病害日趨嚴(yán)重^[7-9]，已對(duì)海南農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展造成嚴(yán)重威脅，引起了各級(jí)政府部門、廣大檳榔種植戶以及相關(guān)企業(yè)的普遍關(guān)注。為了加快YLD及相關(guān)病害的基礎(chǔ)與防控技術(shù)研究，海南省科學(xué)技術(shù)廳設(shè)立了“2018年海南省檳榔病蟲害重大科技計(jì)劃項(xiàng)目”（No. ZDKJ201817，簡(jiǎn)稱“海南省重大項(xiàng)目”），以支持相關(guān)科研團(tuán)隊(duì)進(jìn)行重點(diǎn)攻關(guān)。近年來，筆者項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)在檳榔黃化相關(guān)病害、病原及檢測(cè)技術(shù)等基礎(chǔ)研究上取得了突破性進(jìn)展。例如，研究發(fā)現(xiàn)除檳榔黃化植原體（areca palm yellow leaf phytoplasma， AYLP）外，檳榔隱癥病毒1^[10]（Areca palm velarivirus 1， APV1）也是引起生產(chǎn)上檳榔大面積黃化的一種病原，其所致病害現(xiàn)命名為檳榔黃葉病毒?。?em>Areca palm leaf yellowing virusdisease， ALYVD）^[11]。同時(shí)，還發(fā)現(xiàn)了2種新的病毒病害，即檳榔壞死梭斑病毒?。?em>Areca palm necrotic spindle-spot virus， ANSSV）^[12]和檳榔壞死環(huán)斑病毒?。?em>Areca palm necrotic ringspot virus， ANRSV）^[13]。目前，對(duì)YLD和這3種病毒病害的病原檢測(cè)技術(shù)等方面取得了豐碩進(jìn)展。新病害ALYVD的發(fā)現(xiàn)以及YLD的研究基礎(chǔ)依然薄弱的現(xiàn)狀給當(dāng)前和今后的研究提出了新的課題，促使筆者對(duì)這2種病害的癥狀及流行規(guī)律等進(jìn)行進(jìn)一步深入研究。在生產(chǎn)上，鑒于YLD和ALYVD日趨嚴(yán)重而缺乏一套系統(tǒng)的防控措施的現(xiàn)狀，筆者項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)于2020年7—9月撰寫了《檳榔黃化病防控明白紙》，并在萬寧市召開了“《檳榔黃化病防控明白紙》研討推介會(huì)”（以下簡(jiǎn)稱為《明白紙》。召開該推介會(huì)時(shí)由APV1引起的檳榔黃葉病毒病尚稱為檳榔黃化病或病毒性檳榔黃化病），這標(biāo)志著國(guó)內(nèi)“檳榔黃化病”在防控策略和方法上已上升到一個(gè)新階段。然而，迄今尚無評(píng)論性文章對(duì)《明白紙》進(jìn)行解讀。為此，對(duì)上述問題進(jìn)行分析總結(jié)進(jìn)而明確今后的攻關(guān)重點(diǎn)，以加快推進(jìn)《明白紙》的宣貫，促進(jìn)YLD和ALYVD這2種致黃關(guān)鍵病害的基礎(chǔ)研究與科學(xué)防控。

本文通過介紹YLD和ALYVD?2種致黃關(guān)鍵病害及其病原、病原檢測(cè)技術(shù)上的最新進(jìn)展，分析由于發(fā)現(xiàn)ALYVD而延伸的新問題，探討新的攻關(guān)重點(diǎn);梳理“檳榔黃化現(xiàn)象”各因子引起的黃化癥狀特點(diǎn);解讀《明白紙》，并分析其有待進(jìn)一步補(bǔ)充、完善之處，對(duì)今后5～10 a在YLD和ALYVD?2種致黃關(guān)鍵病害攻關(guān)中有望獲得突破的檢測(cè)及防控技術(shù)進(jìn)行展望。

1 ?檳榔黃化病及相關(guān)病毒病研究進(jìn)展

1.1 ?檳榔黃化病

檳榔黃化病（yellow leaf disease of areca palm， YLD）于1914年在印度喀拉拉邦（Kerala）部分地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)^[14]。關(guān)于印度YLD的病原或病因探索史，國(guó)內(nèi)學(xué)者（如車海彥等^[9]、朱輝等^[15]）已做了相關(guān)綜述，本文重點(diǎn)介紹檳榔黃化病原及檢測(cè)技術(shù)上的研究進(jìn)展。1971年，NAYAR^[16]從病葉組織上培養(yǎng)獲得一種微生物，電鏡觀察后發(fā)現(xiàn)這是一種類菌原體MLO（即植原體）^[17]，由此最早提出植原體與黃化病相關(guān)。隨后的常規(guī)技術(shù)（包括電鏡觀察^[17-18]、狄納氏染色^[19]）、菟絲子^[20]、媒介昆蟲甘蔗斑袖蠟蟬（Proutista moesta）接種^[20]、血清學(xué)^[18]和分子檢測(cè)技術(shù)[包括巢式PCR^[21-22]、實(shí)時(shí)熒光PCR（Real-time PCR）^[22]、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（loop-?ediated isothermal amplification， LAMP）^[23]]均證實(shí)印度檳榔黃化病病原為植原體。迄今，已發(fā)現(xiàn)印度檳榔黃化植原體具有組或亞組水平上的多樣性^[24]，存在16SrⅪ-B亞組^{[21-22， 25]}、16SrⅠ-B組^[26]和16SrⅪⅤ組^[27]3個(gè)組或亞組的植原體。由于植原體難以人工培養(yǎng)，無法完成經(jīng)典的柯赫氏法則。因此，菟絲子、甘蔗斑袖蠟蟬接種實(shí)驗(yàn)為印度檳榔黃化植原體的病原性質(zhì)提供了充分證據(jù)。同時(shí)，檳榔體內(nèi)植原體含量低的特點(diǎn)制約了印度檳榔黃化植原體的檢出，即便用LAMP技術(shù)檢測(cè)，40份病株DNA樣品中僅30份檢測(cè)呈陽性^[23]。DA667E26-CCFB-4AE7-805F-E2D72A702372

在中國(guó)，YLD（早期稱為檳榔黃葉?。┳钤缬?981年在海南省屯昌縣發(fā)現(xiàn)^[3]，剛開始認(rèn)為是一種土壤缺鉀引起的生理性病害^[1]，但采取追施鉀肥措施后黃化癥狀并未得到減輕，病害仍繼續(xù)發(fā)展^[3]，這表明YLD并不是一種生理性病害。1995年，金開璇等^[3]開展了電鏡觀察試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)病株中存在類菌原體和類細(xì)菌，由此提出中國(guó)檳榔黃化病為類細(xì)菌（引起束頂型癥狀）和類菌原體（引起黃化型癥狀）復(fù)合侵染引起。隨后，羅大全等^[4]先后進(jìn)行了2次電鏡觀察實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)黃化型和束頂型2種癥狀類型的病株葉脈和花苞組織樣品韌皮部篩管細(xì)胞均存在植原體，但未觀察到其他病原物。同時(shí)，羅大全等^[4]發(fā)現(xiàn)四環(huán)素注射可抑制染病檳榔病情，由此提出植原體是引起海南省黃化病的一種病原。隨后，羅大全等^[5]通過巢式PCR從病樣DNA成功擴(kuò)增到植原體特異條帶（束頂型樣品未檢測(cè)到，但電鏡實(shí)驗(yàn)中觀察到植原體），實(shí)驗(yàn)證明黃化型的檳榔黃化病由植原體引起，但并未明確束頂型檳榔黃化病病原問題。車海彥等^[6]、周亞奎等^[28]根據(jù)巢式PCR產(chǎn)物測(cè)序和比對(duì)結(jié)果分別將擴(kuò)增得到的AYLP劃分為16SrI-G亞組和16SrI-B亞組。于少帥等^[29]則將保亭、屯昌、萬寧等市（縣）擴(kuò)增到的AYLP劃分為16SrI組。同時(shí)，還發(fā)現(xiàn)各株系與海南苦棟叢枝、長(zhǎng)春花綠變、馬松子變?nèi)~、辣椒黃化皺縮、蛇婆子叢枝、細(xì)圓藤叢枝等植原體同源性為100%。該結(jié)果表明YLD可能通過這些寄主植物進(jìn)行傳播擴(kuò)散。車海彥^[30]以16S rDNA序列開發(fā)了Real-time PCR檢測(cè)方法，結(jié)果顯示該方法與傳統(tǒng)巢式PCR方法的檢測(cè)靈敏度相同。隨后用該方法對(duì)表現(xiàn)黃化癥狀的30株病株的未展開花苞、心葉以及第2、3、5片葉葉脈總DNA樣品進(jìn)行了檢測(cè)，檢出率分別為100.0%、80.0%、26.7%、46.7%、60.0%，根及病株果實(shí)育出的幼苗樣品DNA中均未檢測(cè)到植原體信號(hào)。不同部位植原體檢測(cè)率不同，這表明檳榔黃化植原體在檳榔體內(nèi)具有不均勻分布的特點(diǎn)。此外，車海彥等^[31]于2019年2月至2020年1月對(duì)瓊海市嘉積鎮(zhèn)和萬寧市龍滾鎮(zhèn)2個(gè)染病檳榔園葉片內(nèi)的病原植原體進(jìn)行了連續(xù)監(jiān)測(cè)和病原檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)病葉中AYLP的檢出率總體隨著溫度升高而增加，反之減少。該結(jié)果表明病株葉片內(nèi)AYLP含量具有一定的周年消長(zhǎng)規(guī)律性：在一定的溫度范圍內(nèi)，葉片中的AYLP含量與溫度成正相關(guān)（例如月平均溫度最低的12月，2個(gè)檳榔園的監(jiān)測(cè)植株葉片的AYLP檢出率均為0，而月平均溫度最低的6月，2個(gè)檳榔園的AYLP檢出率均為80%）。孟秀利等^[32]根據(jù)16S rDNA序列設(shè)計(jì)了巢式PCR引物組和F4/R1-F2/R2并建立新的巢式PCR檢測(cè)方法，發(fā)現(xiàn)該組合檢測(cè)效果優(yōu)于植原體檢測(cè)常用的引物組合R16mF2/R16mR1-R16F2n/R16R2。故筆者團(tuán)隊(duì)近年來主要應(yīng)用該方法進(jìn)行疑似檳榔黃化病樣品的檢測(cè)。在實(shí)現(xiàn)檳榔黃化植原體穩(wěn)定檢測(cè)的基礎(chǔ)上，筆者團(tuán)隊(duì)還進(jìn)一步研發(fā)了靈敏、高效的LAMP^[33]和微滴式數(shù)字PCR（droplet digital PCR， ddPCR）^[34]檢測(cè)方法，二者分別是基于16S rRNA基因和tuf基因序列開發(fā)完成。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示LAMP檢測(cè)極限為200?ag/μL（即目標(biāo)片段濃度為53個(gè)拷貝/μL）^[33]。ddPCR的檢測(cè)極限為0.07個(gè)拷貝/μL，約是LAMP檢測(cè)技術(shù)靈敏度的1000倍^[34]。這2種高靈敏度檢測(cè)技術(shù)有望應(yīng)用于YLD的早期診斷和種苗檢測(cè)等。

1.2 檳榔黃葉病毒病

近年來，筆者項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)在病原檢測(cè)、監(jiān)測(cè)技術(shù)等方面均取得了可喜進(jìn)展，其中一個(gè)重要發(fā)現(xiàn)是鑒定了另外一種檳榔黃化相關(guān)病害——檳榔黃葉病毒?。ˋLYVD）。2015年，中國(guó)科技大學(xué)YU等^[35]用2012年采集于海南的黃化檳榔樣品進(jìn)行了小RNA測(cè)序，發(fā)現(xiàn)了一種侵染檳榔的新病毒，命名為檳榔隱癥病毒1（Areca palm velarivirus 1， APV1）。該研究為檳榔黃葉病毒病的發(fā)現(xiàn)奠定了基礎(chǔ)。2020年，海南大學(xué)WANG等^[10]對(duì)采集的來自檳榔黃化病流行區(qū)以及非流行區(qū)的樣品進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果來自流行區(qū)（保亭等8個(gè)市、縣）有黃化癥狀的樣品均檢測(cè)到APV1（檢出率100%），來自流行區(qū)瓊海和萬寧的部分無黃化癥狀樣品也檢測(cè)到APV1（檢出率分別為50%和21%），而來自非流行區(qū)儋州和?？诘臉悠肪礄z測(cè)到APV1（0%）。該結(jié)果表明APV1與海南“檳榔黃化病”高度相關(guān)。最近，該團(tuán)隊(duì)通過雙條拂粉蚧（Ferrisia virgata）接種試驗(yàn)成功完成了APV1病原性質(zhì)驗(yàn)證。用帶毒雙條拂粉蚧接種檳榔幼苗30?d后檢測(cè)到APV1，60?d后幼苗逐漸開始表現(xiàn)與田間“檳榔黃化病”類似的不均勻黃化癥狀特征（葉肉褪綠變黃而葉脈保持綠色），75 d后檢測(cè)呈陽性幼苗數(shù)量達(dá)到峰值，不再增加^[36]。CAO等^[37]對(duì)新測(cè)序的20個(gè)APV1株系的全基因組序列進(jìn)行了比對(duì)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)APV1基因組存在3'端序列高度保守（核苷酸序列同源性>95%）的7個(gè)開放閱讀框和5'端則具有序列多樣性（核苷酸序列同源性為81%～87%）的3個(gè)開放閱讀框。系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果表明20個(gè)APV1株系可分為3個(gè)遺傳譜系，其中16個(gè)株系聚類于譜系A(chǔ)，這表明譜系A(chǔ)是海南檳榔上最具流行性的APV1基因型。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)3個(gè)譜系中均存在不同基因型混合感染的情況，這與APV1基因組具有較高水平的遺傳重組密切相關(guān)，這表明不同基因型混合感染可引起APV1基因組的重組。目前針對(duì)APV1開發(fā)了反轉(zhuǎn)錄-PCR（RT-PCR）^[10]和酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法^[38]。雙條拂粉蚧接種試驗(yàn)結(jié)果表明APV1也是引起檳榔黃化的一種病原。由APV1引起的病害最初稱為“檳榔黃化病”^[10]，現(xiàn)從檳榔黃化病中分離出來，命名為檳榔黃葉病毒病（ALYVD），從而區(qū)分此前已經(jīng)存在的、已納入農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)^[39]的由檳榔黃化植原體引起的檳榔黃化病。2020年前，學(xué)界一直認(rèn)為檳榔黃化植原體是導(dǎo)致海南檳榔大面積黃化的“元兇”（盡管也有一些質(zhì)疑，但并未證實(shí)還有其他病原），APV1與檳榔黃葉病毒病的發(fā)現(xiàn)則打破了這種認(rèn)知局限，促使筆者項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)從更新、更全面的角度重新審視海南“檳榔黃化病”并開展病害防控等相關(guān)研究。DA667E26-CCFB-4AE7-805F-E2D72A702372

為了更好地推進(jìn)示范基地的病害防控工作，筆者項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)對(duì)6個(gè)基地的黃化植株進(jìn)行了病原檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示（表1，尚未發(fā)表），所有基地均檢出AYLP和APV1?2種病原，表明6個(gè)基地均存在AYLP和APV1感染;而且6個(gè)基地的部分植株黃化是由AYLP或APV1單獨(dú)感染引起，部分植株是由AYLP和APV1復(fù)合感染引起。

1.3 檳榔壞死環(huán)斑病毒病和檳榔壞死梭斑病毒病

除了檳榔黃葉病毒病外，YAND等^[12-13]發(fā)現(xiàn)

了另外2種新的病毒病害——檳榔壞死梭斑病毒病和檳榔壞死環(huán)斑病毒病，并在病原檢測(cè)技術(shù)和致病機(jī)理研究方面取得了突破性進(jìn)展。檳榔壞死梭斑病毒病于2017年10月在保亭縣首次發(fā)現(xiàn)，且僅在保亭有發(fā)現(xiàn)。檳榔壞死環(huán)斑病毒病于2019年首次報(bào)道，定安、瓊海、瓊中、萬寧、保亭、陵水、臨高、屯昌、瓊中、文昌均有發(fā)生，其中，萬寧、定安和瓊海局部區(qū)域分布較廣，發(fā)病率分別達(dá)46%、45%和36%^[13]。這2種病害的病原分別為ANRSV^[12]和ANSSV^[13]。目前，針對(duì)ANRSV和ANSSV已研發(fā)了3種高效、靈敏的核酸檢測(cè)方法，包括反轉(zhuǎn)錄-PCR（RT-PCR）、反轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（RT-LAMP）^[40]和反轉(zhuǎn)錄重組酶聚合酶-側(cè)流層析試紙條（RT-RPA-LFD）檢測(cè)方法^[41]。同時(shí)，孫迪^[41]根據(jù)病毒外殼蛋白特異抗原決定簇制備了多克隆抗體，以此建立了血清學(xué)檢測(cè)方法。最近，該團(tuán)隊(duì)在前導(dǎo)蛋白酶功能上取得了原創(chuàng)性進(jìn)展，在國(guó)際上得到了較大關(guān)注。QIN等^[42]通過基因組注釋和序列分析表明ANSSV和ANRSV在分類上歸屬于馬鈴薯Y病毒科的一個(gè)新屬——檳榔病毒屬（Arepavinus）。不同于該科其他病毒，ANSSV和ANRSV編碼特異的前導(dǎo)蛋白酶為一個(gè)串聯(lián)的半胱氨酸蛋白酶（HCPro1-HCPro2）。通過構(gòu)建酶切位點(diǎn)突變載體和體外翻譯等實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)ANSSV編碼的HCPro1和HCPro2的切割位點(diǎn)分別是273G/S274和574G/G575。進(jìn)一步的基因沉默抑制子實(shí)驗(yàn)表明，與其他Potyviral HCPro不同，HCPro2是病毒沉默抑制子，其抑制基因沉默活性獨(dú)立于上游蛋白酶HCPro1的酶切事件。該研究為進(jìn)一步深入研究病毒致病新機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

1.4 中國(guó)檳榔黃化病研究中存在的問題及黃化因子特征分析

目前，一直制約國(guó)內(nèi)檳榔黃化病研究的2個(gè)關(guān)鍵問題是：（1）檳榔黃化植原體具有分布不均的特點(diǎn)^[30]，而且含量很低^{[2， 23]}，給病原檢測(cè)、致病機(jī)理等研究帶來了挑戰(zhàn)。研究發(fā)現(xiàn)用傳統(tǒng)的巢式PCR方法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)植原體檢出率較低。例如周亞奎等^[28]在萬寧、瓊海、陵水采集了28株病株的葉片樣品，僅來自萬寧和瓊海的9份樣品檢測(cè)到植原體。曹學(xué)仁等^[43]在采集的49個(gè)黃化樣品中僅15個(gè)樣品檢測(cè)到植原體。筆者團(tuán)隊(duì)改進(jìn)后的巢式PCR方法的檢測(cè)極限也僅為25 ng/μL（樣品總DNA濃度，尚未發(fā)表）。因此，若無YLD病原檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)或植原體研究背景的研究人員的協(xié)助與指導(dǎo)，在進(jìn)行檳榔黃化植原體檢測(cè)時(shí)則經(jīng)常會(huì)遇到例如樣品采集、巢式PCR污染等各種問題，造成檢測(cè)試驗(yàn)失敗。（2）不同因子造成的“真假”檳榔黃化病并存情況較多，給YLD（包括新病害ALYVD）的病原認(rèn)識(shí)和診斷帶來了極大困擾。在省重大項(xiàng)目立項(xiàng)之前，調(diào)查發(fā)現(xiàn)除YLD外，一些生物因素（如炭疽病、細(xì)菌性葉斑病^[44]等葉斑類病害，褐根病、紅根病^[45]等根部病害，以及害蟲椰心葉甲^{[2， 7]}）均可引起檳榔葉片變黃。此外，非生物因素如除草劑^{[43， 46]}、氣候（干旱、寒害）、生理性缺素^[45]等也會(huì)導(dǎo)致檳榔葉片變黃。在陵水、萬寧、瓊海等病區(qū)，通常是YLD與1種或多種病蟲害同時(shí)發(fā)生，且多種病害引起的病斑癥狀非常相似、發(fā)病初期難以區(qū)分。加上營(yíng)養(yǎng)和氣候等因素干擾，田間YLD與“假檳榔黃化病”并存情況較多，很容易造成混淆。許多農(nóng)戶因缺乏相關(guān)的植保知識(shí)，將生產(chǎn)上各種因子引起的檳榔黃化均稱為“檳榔黃化病”或“檳榔黃葉病”（也有農(nóng)戶將其稱為“葉瘟”）。同時(shí)，學(xué)界對(duì)YLD的病原或病因是否僅有植原體這個(gè)問題也有較大分歧。在此背景下，為了回應(yīng)YLD病原認(rèn)識(shí)上的分歧以及實(shí)際生產(chǎn)中多種致黃因子存在的問題，學(xué)界暫時(shí)采用“檳榔黃化現(xiàn)象”（檳榔在生長(zhǎng)過程中所表現(xiàn)出的葉片變黃的表征或癥狀）的概括性概念，以待后續(xù)研究進(jìn)行澄清，進(jìn)而查明YLD的本質(zhì)（病原或病因）。對(duì)YLD進(jìn)行精準(zhǔn)診斷和識(shí)別正是省重大項(xiàng)目中需要完成的一個(gè)重要任務(wù)。

經(jīng)過近年來的調(diào)查研究，生物和非生物因素中各種因子的致黃特點(diǎn)現(xiàn)已基本明確。（1）YLD和ALYVD是2種致黃關(guān)鍵病害。這是導(dǎo)致生產(chǎn)上檳榔大面積黃化、樹勢(shì)衰弱、減產(chǎn)的2種致黃關(guān)鍵病害，目前尚無有效的防治藥劑，只能采取綜合措施進(jìn)行防控。其田間癥狀特點(diǎn)比較類似（盡管目前作了癥狀初步區(qū)分，但還需進(jìn)一步補(bǔ)充完善），表現(xiàn)為發(fā)病初期樹冠倒數(shù)第2、3片羽狀復(fù)葉的部分小葉首先黃化，隨后黃化癥狀向上層葉片擴(kuò)展，發(fā)病中后期樹冠縮小呈束頂狀，嚴(yán)重者植株死亡。這2種病害有發(fā)病中心。（2）葉斑類病害。包括炭疽病、細(xì)菌性葉斑病^[44]以及新報(bào)道的壞死梭斑病毒病^[12]和壞死環(huán)斑病毒病^[13]等，其癥狀特點(diǎn)為在葉片局部產(chǎn)生帶黃色暈圈的病斑，嚴(yán)重者葉片上病斑累累。炭疽病僅在瓊中等局部區(qū)域發(fā)病較重，細(xì)菌性葉斑病多在臺(tái)風(fēng)季節(jié)爆發(fā)，病害嚴(yán)重時(shí)雖可導(dǎo)致葉片枯死，但防治較容易。壞死梭斑病毒病目前僅在保亭有發(fā)現(xiàn)，壞死環(huán)斑病毒則在定安、瓊海、萬寧等市（縣）均有發(fā)生。YLD和ALYVD 2種病毒病的傳播途徑、防控方法及其對(duì)產(chǎn)量的影響等研究尚待開展。（3）根腐病害。包括褐根病、紅根病、黑紋根病^[45]。其癥狀特點(diǎn)為發(fā)病后植株下層老葉首先變黃、下垂，嚴(yán)重者植株死亡。3種根病地上部分的黃化表現(xiàn)在下層葉片，容易與YLD和ALYVD進(jìn)行區(qū)分。此外，根腐病從表現(xiàn)癥狀到植株死亡通常僅需幾周至幾個(gè)月，而YLD從表現(xiàn)癥狀到死亡常長(zhǎng)達(dá)5～7 a^[7]（ALYVD有待進(jìn)一步研究）。根腐病多是單個(gè)而非連片檳榔園發(fā)生，一旦發(fā)病常引起植株死亡，防治存在一定難度。（4）芽腐病。該病表現(xiàn)為感染后心葉首先變黃，常造成植株死亡。芽腐病在瓊中縣有發(fā)生，但多為零星發(fā)生。（5）藻斑病。常造成下層葉片衰弱，葉柄、葉片、葉鞘上均長(zhǎng)出帶有黃色暈圈的麻點(diǎn)狀小病斑，病斑上?？梢婞S褐色毛氈狀物，易與其他葉斑病區(qū)分。該病為害較小。（6）椰心葉甲。該蟲在陵水、萬寧、瓊海等市（縣）發(fā)生嚴(yán)重，可以引起整園甚至局部區(qū)域檳榔園連片枯黃，其為害甚至超過YLD和ALYVD。椰心葉甲主要危害心葉，造成樹冠縮小，心葉甚至植株死亡，對(duì)產(chǎn)量影響較大，可通過噴施高效氯氰菊酯、辛硫磷等藥劑或釋放天敵寄生蜂（椰甲截脈姬小峰和椰心葉甲嚙小峰）進(jìn)行有效防治。（7）干旱和寒害。干旱可季節(jié)性地引起局部或大范圍檳榔園葉片因缺水而失綠變黃，多表現(xiàn)在下層葉片。干旱對(duì)于新定植的1～2 a的幼樹甚至成齡樹影響較大，若不及時(shí)灌水，達(dá)到一定極限后下部1～2片葉常在一周至幾周內(nèi)快速干枯、死亡。干旱造成的黃葉癥狀可通過灌水措施得到緩解、恢復(fù)，無灌溉條件時(shí)到雨季也可逐漸恢復(fù)健康綠色狀態(tài)。海南每年5—8月為高溫干旱季節(jié)，干旱通常是對(duì)全島范圍內(nèi)的檳榔均有影響，不具發(fā)病中心的特點(diǎn)。寒害多發(fā)生于1月或12月，持續(xù)數(shù)天低溫（通常是低于10℃）天氣會(huì)引發(fā)寒害。2021年1月海南遭遇低溫（1月13日瓊中縣黎母山鎮(zhèn)監(jiān)測(cè)到-0.3℃低溫），全島西至澄邁、南到三亞的檳榔均有寒害發(fā)生。初期癥狀表現(xiàn)為葉片出現(xiàn)褪綠、干枯病斑，此后葉片呈淡綠至淺黃色。調(diào)查發(fā)現(xiàn)萬寧、瓊海、定安等地大面積檳榔受寒害影響葉片變黃情況較普遍，至4月初才逐漸恢復(fù)。臺(tái)風(fēng)也有一定影響，除了對(duì)檳榔葉片直接傷害外，還表現(xiàn)在引起檳榔細(xì)菌性葉斑病的爆發(fā)以及造成椰心葉甲大面積擴(kuò)散。此外，水害漚根也會(huì)引起葉片變黃，多見于地勢(shì)低洼、排水不良的檳榔園。（8）生理性缺素及肥害。生理性黃化多見于管理不善或失管檳榔園，表現(xiàn)為全園植株樹勢(shì)衰弱，全株葉片因營(yíng)養(yǎng)不良表現(xiàn)為淺綠色，略帶黃色。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，剛定植1～2 a幼樹有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)生理性黃化的情況。肥害多發(fā)生于集中過量施用硝酸鉀、硫酸鉀、氯化鉀等化學(xué)肥料或未腐熟的牛糞、羊糞、豬糞等有機(jī)肥^[45]，導(dǎo)致燒根從而引起下層葉尖、葉緣失綠變黃，葉尖多變褐枯死。生理性缺素或肥害引起的黃化無發(fā)病中心。楊旭光等^[47]研究表明檳榔園水肥供施情況和土壤中養(yǎng)分狀況與檳榔黃化病的發(fā)生無必然聯(lián)系。（9）除草劑藥害。除草劑問題是在2013年前后才引起注意和重視的。筆者調(diào)查發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)上常用草甘膦等滅生性除草劑，造成地表根系變褐壞死，葉片褪綠變黃、枯死，最后整株枯死。吳童童等^[46]發(fā)現(xiàn)在生產(chǎn)中除草劑使用非常普遍，且除草劑使用歷史越長(zhǎng)、頻率越高時(shí)，園中檳榔長(zhǎng)勢(shì)越差。除草劑雖與檳榔園黃化有一定相關(guān)性，但其引起的黃化不具備發(fā)病中心的特點(diǎn)。綜上，生產(chǎn)上引起檳榔黃化的因素盡管較多，且多個(gè)因子常同時(shí)并存于黃化檳榔園，通過綜合考慮田間癥狀、病蟲害發(fā)生歷史、種苗來源、水肥管理及除草劑施用等情況，通?？梢詤^(qū)分YLD（和/或ALYVD）與其他因素引起的黃化。YLD與ALYVD則需綜合考慮田間癥狀并結(jié)合分子檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行區(qū)分。DA667E26-CCFB-4AE7-805F-E2D72A702372

迄今，已基本理清YLD和ALYVD與其他8類因子的“黃化”癥狀，筆者認(rèn)為對(duì)各種因子引起的“檳榔黃化現(xiàn)象”進(jìn)行澄清，解析檳榔黃化病本質(zhì)的時(shí)機(jī)已日趨成熟。鑒于YLD和ALYVD分布廣泛、造成的損失嚴(yán)重、防控難度大、社會(huì)關(guān)注程度高，建議今后將這2種致黃關(guān)鍵病害作為核心對(duì)象進(jìn)行重點(diǎn)防控。

1.5新的科學(xué)問題及今后的攻關(guān)重點(diǎn)

新病害ALYVD的發(fā)現(xiàn)拓寬了對(duì)老病害YLD的認(rèn)識(shí)，也提出了新的科學(xué)問題：（1）YLD和ALYVD的癥狀區(qū)別表現(xiàn)在哪些方面？（2）YLD和ALYVD病害的流行規(guī)律如何？（3）YLD和ALYVD病害是如何傳播的？（4）YLD和ALYVD病害致黃機(jī)理存在哪些異同？

針對(duì)檳榔黃化病，現(xiàn)階段需要聚焦的攻關(guān)重點(diǎn)有3個(gè)。（1）現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)各有不足。例如改進(jìn)的巢式PCR方法靈敏度依然偏低且費(fèi)時(shí)費(fèi)力;雖然LAMP靈敏、快速（約3 h即可獲得檢測(cè)結(jié)果）、結(jié)果可視化，但技術(shù)操作過程中需格外避免污染的問題;ddPCR靈敏度極高但檢測(cè)儀器昂貴且成本偏高（1個(gè)樣品3次重復(fù)平均檢測(cè)費(fèi)用為240～250元;巢式PCR為1.8～2.0元;LAMP為25～100元。美國(guó)和日本試劑價(jià)格差異較大，筆者注），故LAMP和ddPCR這2種方法并未用于高通量檢測(cè)工作。因此，需繼續(xù)研發(fā)其他檢測(cè)方法，對(duì)不同檢測(cè)方法進(jìn)行對(duì)比和評(píng)價(jià)，進(jìn)而篩選出1～2種靈敏、高效的檢測(cè)方法是亟需攻關(guān)的重點(diǎn)。（2）雖然對(duì)YLD和ALYVD的癥狀進(jìn)行了初步區(qū)分，但還需重點(diǎn)對(duì)這2種病害癥狀的擴(kuò)展情況進(jìn)行細(xì)致觀察，進(jìn)一步明確其癥狀和流行規(guī)律的異同。（3）植原體是一類通過媒介昆蟲傳播的病原菌^[48]，一旦確認(rèn)YLD的媒介昆蟲并研發(fā)相應(yīng)防治技術(shù)可為檳榔黃化病的防控提供有力支撐。目前，已在柑橘棘粉蚧等6種刺吸式口器昆蟲體內(nèi)檢測(cè)到AYLP^[49]。因此，加快疑似媒介昆蟲接種驗(yàn)證、傳毒特征研究，并開展防治技術(shù)研究也是當(dāng)前的攻關(guān)重點(diǎn)。

2 ?檳榔黃化病和檳榔黃葉病毒病的防控

迄今，檳榔黃化病和檳榔黃葉病毒病2種病害流行規(guī)律、監(jiān)測(cè)以及防控方面的進(jìn)展更多地來自前者（如病害監(jiān)測(cè)和防控實(shí)踐^[50]）。然而，受廣大農(nóng)戶對(duì)檳榔黃化病認(rèn)知、檳榔價(jià)格持續(xù)處于高位等方面的影響，此前一些學(xué)者提出的YLD防控措施（如砍除病株）在實(shí)際生產(chǎn)中實(shí)施的并不多，全省僅有三亞市組織實(shí)施了砍除病株的措施^[51]。同時(shí)，ALYVD的發(fā)現(xiàn)也大大增加了防控難度。因此，有必要重新梳理YLD和ALYVD?2種致黃關(guān)鍵病害的基礎(chǔ)資料并制定針對(duì)性的防控策略和措施。

2.1 防控形勢(shì)緊迫

從1995年金開璇等^[3]最早提出植原體（即類菌原體MLO）與黃化型YLD有關(guān)開始，20多年以來YLD（包括ALYVD）并未得到有效控制，甚至不斷蔓延危害，發(fā)生范圍、面積逐步擴(kuò)大，病情日趨嚴(yán)重。海南全?。ú缓呈校┱{(diào)查結(jié)果表明，由AYLP和APV1引起的檳榔黃化面積為4.00～5.33萬hm²（尚未發(fā)表），若任由其繼續(xù)擴(kuò)散蔓延，將會(huì)給海南經(jīng)濟(jì)、社會(huì)及生態(tài)帶來難以估量的損失。與此同時(shí)，生產(chǎn)上還缺乏一套公認(rèn)的、能夠科學(xué)指導(dǎo)防控檳榔黃化病和檳榔黃葉毒病的指南。鑒于此，筆者團(tuán)隊(duì)結(jié)合近年來的科研成果編寫了《檳榔“黃化病”防控明白紙》（此處檳榔“黃化病”指黃化病和黃葉病毒病，下同。為了便于廣大檳榔種植戶的理解和接受，《明白紙》未對(duì)YLD和ALYVD進(jìn)行區(qū)分）。《明白紙》充分借鑒了柑橘黃龍病^[52]、椰子致死性黃化病^{[48， 53]}、棗瘋病^[54-55]、葡萄金黃化病^[46]等類似病害的防控措施（表2），根據(jù)植保領(lǐng)域?qū)＜覍W(xué)者、一線農(nóng)技人員提出的建議進(jìn)行完善，于2020年9月在萬寧市正式向各市（縣）農(nóng)技人員和廣大檳榔種植戶推介，得到了廣泛關(guān)注。

2.2 《明白紙》解讀

《明白紙》提綱挈領(lǐng)地介紹了檳榔“黃化病”病原、癥狀、危害等級(jí)、傳播途徑，確

立了“預(yù)防為主、分類防控”的策略，并提出了綜合防控措施?！睹靼准垺返闹朴喤c推介實(shí)施是檳榔黃化病和黃葉病毒病研究和防控中的一個(gè)里程碑，以下作簡(jiǎn)要解讀。

2.2.1 ?危害等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)??檳榔園危害等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：輕病園，全園發(fā)病率20%以下;中病園，全園發(fā)病率20%～50%;重病園，全園發(fā)病率50%～70%;特重病園，全園發(fā)病率70%以上。這是分類防控策略的依據(jù)。

2.2.2 ?傳播途徑??傳播途徑主要是種苗和媒介昆蟲，這是種植健康種苗、防治介體昆蟲的依據(jù)。

2.2.3 ?檳榔園黃化病3個(gè)關(guān)鍵預(yù)防措施??（1）選用無病種苗，嚴(yán)禁從疫區(qū)引進(jìn)種果和種苗;嚴(yán)禁用感病檳榔園的種果進(jìn)行育苗;嚴(yán)禁在感病檳榔園及周邊育苗。（2）檳榔園禁用草甘膦除草劑。（3）不在病園內(nèi)新種幼苗。

2.2.4 ?檳榔園黃化病分類防控措施??（1）針對(duì)新建檳榔園，從種苗開始進(jìn)行預(yù)防，種植無病種苗，隔離種植，遠(yuǎn)離感病檳榔園，建議間隔至少1 km以上，避免連片種植。（2）針對(duì)健康園，以預(yù)防為主。加強(qiáng)肥水管理;全面除殺刺吸式口器害蟲，預(yù)防病害傳播入園;一旦確認(rèn)園內(nèi)有植株感染植原體或APV1，做到發(fā)現(xiàn)一株清除一株。（3）針對(duì)輕、中和重病檳榔園，控治并舉，采用“五板斧”措施。即，“一養(yǎng)”：加強(qiáng)肥水管理，養(yǎng)根養(yǎng)樹，提高檳榔樹體營(yíng)養(yǎng)，增強(qiáng)樹勢(shì)?！岸T”：誘抗，結(jié)合除殺刺吸式口器害蟲，葉面噴施免疫誘抗劑、葉面肥，誘導(dǎo)檳榔產(chǎn)生抗性和提高免疫力?！叭{(diào)”：生態(tài)調(diào)控，通過豐富林間生物多樣性，改善林下微生態(tài)環(huán)境，達(dá)到涵養(yǎng)水源、以草（或其他作物）控草甚至增加收入的目的?！八闹巍保壕C合治理，結(jié)合免疫誘抗處理對(duì)病原及傳播媒介采用化學(xué)、物理等防控技術(shù)，降低菌源、阻止傳播。“五除”：加強(qiáng)病害管理，清除病葉和病株，減少傳染源。（4）針對(duì)特重病園，全園更新。清除全園后，種植其他短期經(jīng)濟(jì)作物，至少2 a后再重新種植健康檳榔。DA667E26-CCFB-4AE7-805F-E2D72A702372

《明白紙》充分考慮了以下4個(gè)因素：（1）檳榔是一種常綠棕櫚植物，經(jīng)濟(jì)壽命可長(zhǎng)達(dá)30 a;（2）現(xiàn)有的種植管理模式（單一、“懶人”模式）;（3）種植4～5 a后才開始結(jié)果，在此期間農(nóng)戶通常一直無收獲回報(bào);（4）染病2～3 a內(nèi)，整園產(chǎn)量通常不會(huì)大幅下降，水肥管理好的檳榔園產(chǎn)量會(huì)保持一個(gè)較高的水平;（5）近年來鮮果價(jià)格較高，絕大部分農(nóng)戶尚不愿接受砍除病株的措施，主動(dòng)砍除病株的農(nóng)戶僅是極少數(shù)。整體而言，對(duì)于中、重度發(fā)病檳榔園采取的是一種帶病維持生產(chǎn)的策略。然而，從整個(gè)檳榔產(chǎn)業(yè)的長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展來看，病園更新的措施必不可少（參考柑橘黃龍病園更新措施^[7]），否則2種病害仍將持續(xù)擴(kuò)展，危害繼續(xù)加重。雖然YLD和ALYVD尚無特效防控藥劑，但通過上述綜合防控措施可在一定程度上達(dá)到控制病害蔓延、延長(zhǎng)檳榔植株經(jīng)濟(jì)壽命、提高或維持產(chǎn)量的目的。

2.3 《明白紙》需進(jìn)一步完善之處及防控中亟待解決的問題

目前，海南全省的YLD和ALYVD防控形勢(shì)仍非常緊迫。及時(shí)發(fā)布《明白紙》為這2種病害的科學(xué)防控提供了指南。然而，目前對(duì)這2種病害的了解依然不夠深入，《明白紙》中病害基礎(chǔ)介紹及防控措施的部分內(nèi)容還需進(jìn)一步完善。如，媒介昆蟲研究尚顯不足。雖然已發(fā)現(xiàn)柑橘棘粉蚧、雙條拂粉蚧可以傳播APV1^[36]，YLD帶“毒”昆蟲方面也有階段性進(jìn)展^[11]，然而這些昆蟲的交配產(chǎn)卵、種群動(dòng)態(tài)等生物生態(tài)學(xué)特性、傳毒特征以及防治技術(shù)等研究尚待開展。這些研究結(jié)果將進(jìn)一步有針對(duì)性地補(bǔ)充和完善《明白紙》的基礎(chǔ)知識(shí)以及防控目標(biāo)、防控技術(shù)和方法等。

檳榔黃化病和檳榔黃葉病毒病防控中還面臨很多問題，但最根本或亟需解決的問題有3個(gè)：（1）轉(zhuǎn)變主管部門對(duì)YLD及ALYVD的防控認(rèn)識(shí)與指導(dǎo)思想。只有充分認(rèn)識(shí)到現(xiàn)有的種植模式及技術(shù)措施無法完全根治YLD及ALYVD的事實(shí)，才能轉(zhuǎn)變“治療”“治愈”觀念，形成YLD及ALYVD可防可控不可治的統(tǒng)一認(rèn)識(shí)^[56]，從而牢固樹立“預(yù)防為主，分類防控”的戰(zhàn)略指導(dǎo)原則，依照《明白紙》中的措施系統(tǒng)推進(jìn)防控工作。（2）轉(zhuǎn)變廣大農(nóng)戶長(zhǎng)期以來的檳榔“懶人種植”模式（管理意識(shí)淡薄，重種植、輕管理，管理投入不足或幾乎不投入）以及對(duì)病害的認(rèn)知。只有徹底摒除僥幸心理，改變先前“靠天吃飯”的種植模式，加強(qiáng)水、肥、草管理和病蟲害防控，及時(shí)清除病株殘?bào)w，才能形成有利于檳榔健康生長(zhǎng)、YLD及ALYVD防控的條件。（3）建立種子種苗檢疫制度和健康種苗保障體系。近年來海南檳榔種苗市場(chǎng)非?；钴S，萬寧等疫區(qū)一些農(nóng)戶留老果育苗的情況較多，多個(gè)種苗公司年育苗量達(dá)到幾萬甚至幾十萬株。調(diào)查發(fā)現(xiàn)大多未做隔離或預(yù)防措施，這些來自疫區(qū)的種苗具有較大的帶“毒”風(fēng)險(xiǎn)，筆者的采樣檢測(cè)結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)^[11]。因此，建議加快檳榔種果種苗檢疫制度及健康種苗繁育體系建設(shè)，禁止疫區(qū)農(nóng)戶和種苗公司育苗售賣，非疫區(qū)的種苗也需具有檢測(cè)資質(zhì)的單位現(xiàn)場(chǎng)抽樣、檢測(cè)，獲得健康種苗報(bào)告后方可銷售。

3 ?展望

近年來，海南省重大項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)在YLD及ALYVD研究上取得階段性進(jìn)展。在檳榔黃化相關(guān)病害方面，明確了2種致黃關(guān)鍵病害——YLD和ALYVD，并區(qū)分了這2種病害與其他8類因子的黃化癥狀，對(duì)“檳榔黃化現(xiàn)象”說法進(jìn)行了澄清。在病原檢測(cè)方面，針對(duì)YLD和ALYVD研發(fā)了可供病害早期診斷的靈敏、高效、快速的檢測(cè)新方法，后續(xù)有望開發(fā)出可用于田間檢測(cè)的方法和產(chǎn)品。在傳播途徑和防控方面，筆者發(fā)現(xiàn)來自萬寧等疫區(qū)的部分種苗有AYLP和/或APV1感染（尚未發(fā)表），為種苗檢疫措施的實(shí)施提供了依據(jù)。同時(shí)，在萬寧、定安2個(gè)病園遺留的檳榔老果組織DNA樣品中檢測(cè)到AYLP^[32]，若證實(shí)帶“毒”種果育出的種苗同樣帶有AYLP和/或APV1，則將進(jìn)一步研究種苗脫毒或組培脫毒，為健康種苗供應(yīng)、病害防控提供保障。此外，YLD帶“毒”昆蟲^[11]及ALYVD媒介昆蟲^[36]方面的研究也有一定進(jìn)展，后續(xù)研發(fā)的防治技術(shù)將進(jìn)一步提高這2種病害傳播媒介的防治效果?？傊?，預(yù)期5～10 a內(nèi)在YLD及ALYVD病原檢測(cè)、種苗脫毒、媒介昆蟲防治方面有望獲得突破，《明白紙》的不斷完善也將進(jìn)一步發(fā)揮對(duì)YLD及ALYVD防控的指導(dǎo)作用。

近10?a來，檳榔致黃關(guān)鍵病害YLD及ALYVD危害逐年加重，發(fā)病面積不斷擴(kuò)大，現(xiàn)已給海南檳榔產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展和農(nóng)民增收帶來了嚴(yán)峻考驗(yàn)，其科研攻關(guān)和有效防控需要從“產(chǎn)學(xué)研推用”多個(gè)層面協(xié)調(diào)進(jìn)行^[57]，通過政府指導(dǎo)與專項(xiàng)資金支持（科研資助、重病園更新及帶毒種苗銷毀補(bǔ)償?shù)龋⒖蒲袡C(jī)構(gòu)重點(diǎn)攻關(guān)、企業(yè)技術(shù)推廣、農(nóng)戶依據(jù)《明白紙》的措施積極加強(qiáng)管理和病蟲害防控，YLD及ALYVD引發(fā)的檳榔黃化問題將得到有效控制，以保障檳榔產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。

致謝??感謝海南大學(xué)黃惜教授團(tuán)隊(duì)在示范基地病樣APV1檢測(cè)工作中的幫助與支持。

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