麩炒天麻質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

佘永紅　楊德泉　向君

【摘 要】 目的：建立麩炒天麻的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用對性狀，檢查、浸出物測定法，薄層色譜法及HPLC色譜法進(jìn)行研究。結(jié)果：修訂麩炒天麻的成品性狀、鑒別及含量測定，增訂了水分、總灰分、二氧化硫殘留量的檢查及浸出物測定，15批麩炒天麻的水分在7.13%～11.27%之間、總灰分在2.29%～3.00%之間、二氧化硫殘留量在1～210 mg/kg之間、浸出物在42.35%～66.32%之間、天麻素與對羥基苯甲醇總量在0.26%～0.58%之間。結(jié)論：建立了麩炒天麻的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

【關(guān)鍵詞】 麩炒天麻;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);天麻素;對羥基苯甲醇;HPLC

【中圖分類號】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2022）15-0035-05

Study on Quality Standard of Fuchaotianma

SHE Yonghong YANG Dequan XIANG Jun

Xiangxi Tujia and Miao Autonomous Prefecture of food and drug inspection office，Jishou 416000，China

Abstract：Objective Establish the quality standard of Fuchaotianma.? Methods Using the method of character， examination and extract determination，By Thin layer chromatography and HPLC.Results The character， identification and content determination of Fuchaotianma were revised. The test of moisture， total ash， sulfur dioxide residue and the determination of extract were added. The moisture content of 15 batches of Fuchaotianma ranged from 7.13% to 11.27%. The total ash content is between 2.29% and 3.00%. The residual amount of sulfur dioxide was between 1 and 210 mg/kg. The extract was between 42.35% and 66.32%. The total amount of gastrodin and p-hydroxybenzyl alcohol ranged from 0.26 to 0.58%.Conclusion The quality control standard of Fuchaotianma was established.

Key words：Fuchaotianma;Quality Standard;Gastrodin;P-hydroxybenzyl;HPLC

天麻為蘭科植物天麻Gastrodia elataBI.的干燥塊莖，具有息風(fēng)止痙、平抑肝陽、祛風(fēng)通絡(luò)的功能。用于治療小兒驚風(fēng)、癲癇抽搐、破傷風(fēng)、頭痛眩暈、手足不遂、肢體麻木、風(fēng)濕痹痛。明代《普濟(jì)方》^[1]提出 “炙黃”“麩炒黃”和 “酒炙”等炮制方法。在臨床應(yīng)用中，炒天麻與人參、炒白術(shù)、炒白僵蠶等同用，如醒脾散用于治療小兒慢驚風(fēng)，吐瀉不止，脾困昏沉，默默不食;與石決明（醋煅）、炒白蒺藜、蟬蛻等同用，如天麻退翳散用于治療垂簾障，昏暗失明。天麻的現(xiàn)代炮制方法主要為潤制和蒸制?！吨袊幍洹?sup>[2^]2020 年版一部：“洗凈，潤透或蒸軟，切薄片，干燥?！笔蛰d了天麻飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，麩炒天麻未收載。各省、市、自治區(qū)仍沿用歷代方法，主要有酒天麻、姜天麻、麩炒天麻、煨制天麻等，麩炒天麻是《湖南省中藥飲片炮制規(guī)范》^[3]2010年版收載品種，但是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)亟待提升。為了使麩炒天麻飲片質(zhì)量得到更有效地控制，本標(biāo)準(zhǔn)研究修訂了麩炒天麻的成品性狀、鑒別及含量測定，增訂了水分、總灰分、二氧化硫殘留量的檢查及浸出物測定，為保障臨床療效提供有效依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260 高效液相色譜儀（含VWD 檢測器、YMC HPLC? Column C18色譜柱、Rev.B.04.03色譜工作站）、AUW220D電子天平（島津）、ZOOMWO Water Environmental超純水機(jī)、KM5200D中文液晶超聲波清洗器（功率200W，40KHz）;DZTW電子調(diào)溫電熱套;XMTD-4000電熱恒溫水浴鍋;TDZ5-WS醫(yī)用離心機(jī)。

1.2 試藥 天麻素對照品（批號：110807-202010，含量以95.5%計(jì)）、對羥基苯甲醇對照品（批號：111970-201702，含量以99.4%計(jì)）、天麻對照藥材（批號：120944-201611）均購自中國食品藥品檢定研究院。硅膠G板（德國默克公司），甲醇、乙腈為色譜純;水為純凈水;其他試藥均為分析純。15批麩炒天麻由湖南省5家飲片生產(chǎn)企業(yè)，產(chǎn)地分別為四川、安徽、湖南、云南。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀 通過考察15批麩炒天麻的性狀特征，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：本品呈不規(guī)則的薄片。外表皮黃色至黃棕色，有時(shí)可見點(diǎn)狀排成的橫環(huán)紋。切面黃色至黃棕色。角質(zhì)樣，半透明，略有焦斑。有特異氣，味甘。如圖1所示。

2.2 薄層鑒別 照《中國藥典》2020年版一部升麻鑒別（2）方法，取本品粉末1 g，加甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取天麻對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取天麻素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法《中國藥典》2020年版四部通則0502試驗(yàn)，吸取供試品溶液和對照藥材溶液各10 μL，對照品溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（2∶4∶2.5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以對羥基苯甲醛溶液（取對羥基苯甲醛0.2 g，溶于乙醇10 mL中，加50%硫酸溶液1 mL，混勻），在120 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果如圖2所示。

2.3 檢查

2.3.1 水分 照《中國藥典》2020年版四部通則0832第二法，測定15批麩炒天麻樣品的水分。結(jié)果見表1。

2.3.2 總灰分 照《中國藥典》2020年版四部通則2302，測定15批麩炒天麻樣品的總灰分。結(jié)果見表1。

2.3.3 二氧化硫殘留量 照《中國藥典》2020年版四部二氧化硫殘留量測定法通則2331測定。15批麩炒天麻的二氧化硫殘留量結(jié)果見表1。

2.4 浸出物 照《中國藥典》2020年版四部通則2201水溶性浸出物測定法項(xiàng)下的熱浸法，測定15批麩炒天麻飲片的浸出物。結(jié)果見表1。

2.5 含量測定

2.5.1 對照品溶液 取天麻素對照品，精密稱定①22.14 mg、②11.02 mg，分置50 mL、25 mL量瓶中，加乙腈-水（3∶[KG-*3/5]97）混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得天麻素對照品儲備液（422.8740 μg/mL、420.9640 μg/mL）。另精密稱取對羥基苯甲醇對照品①22.98 mg、 ②11.42 mg分置50 mL、25 mL量瓶中，加乙腈-水（3∶[KG-*3/5]97）混合溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對羥基苯甲醇對照品儲備液（456.8424 μg/mL、454.0592 μg/mL）。精密吸取天麻素對照品儲備液及對羥基苯甲醇對照品儲備液各2 mL及1 mL，加乙腈-水（3∶97）混合溶液依次稀釋成含天麻素42.28740 μg/mL、對羥基苯甲醇22.84212 μg/mL的混合對照品溶液Ⅰ及含天麻素42.09640 μg/mL、對羥基苯甲醇22.70296 μg/mL混合對照品溶液Π。

2.5.2 供試品溶液 取本品粉末（過三號篩）約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率120W，40KHz）30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取濾液10 mL，濃縮至近干無醇味，殘?jiān)右译?水（3∶97）混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，用乙腈-水（3∶97）混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5.3 色譜條件 色譜柱：YMC HPLC Column C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）;流速1.0 mL/min;檢測波長為220 nm;柱溫30 ℃。理論板數(shù)按天麻素峰計(jì)算，不低于5000。

取混合對照品溶液Ⅰ、供試品溶液按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖（圖3）。結(jié)果表明，樣品中其他成分對天麻素、對羥基苯甲醇的測定無干擾。

2.5.4 線性關(guān)系考察 精密吸取濃度為422.8740 μg/mL的天麻素對照品儲備液10 mL及濃度為456.8424 μg/mL的對羥基苯甲醇對照品儲備液5 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈-水（3∶97）混合溶液稀釋成含天麻素211.4370 μg/mL、對羥基苯甲醇114.2106 μg/mL的混合對照品儲備液，吸取上述混合對照品儲備液適量，依次稀釋成天麻素濃度為2.6430 μg/mL、10.5718 μg/mL、21.1437 μg/mL、42.2874 μg/mL、63.4311 μg/mL、105.7185 μg/mL、211.4370 μg/mL及對羥基苯甲醇濃度為1.4276 μg/mL、5.7105 μg/mL、11.4211 μg/mL、22.8421 μg/mL、34.2632 μg/mL、57.1053 μg/mL、114.2106 μg/mL的混合對照品溶液，精密吸取上述混合對照品溶液各5 μL， 注入液相色譜儀，測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，濃度（μg/mL ）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。天麻素回歸方程為：y=9.9956x-11.245，r=0.9999;對羥基苯甲醇回歸方程為：y=20.75x-11.314，r=0.9999。結(jié)果表明：天麻素和對羥基苯甲醇對照品分別在2.6430～211.4370 μg/mL和1.4276～114.2106 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.5 精密度試驗(yàn) 取同一麩炒天麻供試品溶液（批號2019102206），連續(xù)進(jìn)樣6次，每次5μL，記錄色譜峰面積，天麻素峰面積RSD為0.32%（n=6），對羥基苯甲醇RSD為1.8%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.5.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一麩炒天麻供試品溶液（批號2019102206），分別于配制后的0 h、6 h、9 h、12 h、24 h，精密吸取5 μL，注入液相色譜儀，測定，天麻素峰面積RSD為0.20%，對羥基苯甲醇峰面積RSD為0.81%，表明供試品溶液在配制后24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一麩炒天麻供試品溶液（批號2019102206），依法制備6份供試品溶液，按干燥品計(jì)算，含天麻素和對羥基苯甲醇的總量分別為3.064、2.963、2.959、2.964、2.960、3.027，RSD為1.6%，天麻素的平均含量為2.034 mg·g^-1，對羥基苯甲醇的平均含量為0.956 mg/g。

2.5.8 回收率試驗(yàn) 取已測定含量（含天麻素2.034mg/g、對羥基苯甲醇0.956mg/g）的同一麩炒天麻供試品（批號2019102206）供試品6份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按干燥品計(jì)算（水分9.10%），按100%的水平精密加入濃度為422.8740 μg/mL的天麻素對照品儲備液及濃度為456.8424 μg/mL對羥基苯甲醇對照品儲備液各適量（見表2、3），依法制備供試品溶液，測定并計(jì)算，結(jié)果天麻素及對羥基苯甲醇平均加樣回收率分別為101.4%、96.6%。

2.5.9 樣品含量測定結(jié)果 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 檢查項(xiàng)目和浸出物限度的擬定 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，水分最低值為7.13%，最高值為11.27%，平均值為9.29%，中位數(shù)為9.72%，水分定為“不得過12.0%”;總灰分最低值為2.29%，最高值為3.00%，平均值為2.58%，中位數(shù)為2.42%，總灰分限度定為“不得過4.0%”;二氧化硫殘留量同《中國藥典》2020年版天麻藥材及飲片標(biāo)準(zhǔn)不得過400 mg/kg;浸出物中最低值為42.35%，最高值為66.32%，平均值為52.58%，中位數(shù)為51.02%，麩炒天麻的浸出物限度定為“不得少于40.0%”。

3.2 含量測定限度的擬定 15批次麩炒天麻含量測定結(jié)果顯示，含量在0.26%～0.58%之間，平均值為0.36%。在天麻炮制加工過程中，使用硫磺熏蒸，飲片整潔美觀且具保鮮、防霉、防蟲效果，尹珉等^[4]采用 RP-HPLC對不同產(chǎn)地經(jīng)過硫磺熏蒸與未經(jīng)過硫磺熏蒸的天麻進(jìn)行天麻素測定，得出結(jié)論，經(jīng)過硫磺熏蒸后天麻中天麻素的含量普遍低于現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)含量最低值為0.26%，為硫磺熏蒸品種，但未超過規(guī)定的二氧化硫殘留量400 mg/kg，綜合考慮，麩炒天麻中天麻素及對羥基苯甲醇含量總量限度同《中國藥典》2020年版天麻藥材及飲片標(biāo)準(zhǔn)，即“本品按干燥品計(jì)算，含天麻素（C13H18O7）和對羥基苯甲醇（C7H8O2）的總量不得少于0.25%。

3.3 天麻麩炒的作用 天麻臨床多用生品，味甘，質(zhì)潤，善治一切風(fēng)證，以平肝息風(fēng)止痙見長，通過對1批天麻飲片和用其加工成的3批麩炒天麻的含量測定變化情況比較，天麻飲片麩炒后的含量有所降低，可能天麻飲片經(jīng)過麩炒后使天麻的藥性緩和，利于兒童、老年患者用藥治療，同時(shí)可以矯正天麻的特異氣味，減少黏膩之性，便于服用。

綜上，本研究從麩炒天麻的性狀、薄層色譜鑒別、水分、總灰分、二氧化硫殘留量、浸出物及含量測定方面對麩炒天麻的質(zhì)量進(jìn)行了評價(jià)，為臨床用藥安全提供了有效的控制手段。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2021-12-02 編輯：陶希睿）